Занятие № 28

ТЕМА.ДЕЗАМИНИРОВАНИЕ, ТРАНСАМИНИРОВАНИЕ, ДЕКАРБОКСИЛИРОВАНИЕ АМИНОКИСЛОТ. СУДЬБА-КЕТОКИСЛОТ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОДУКТОВ ОБМЕНА БЕЛКОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ.

Цель занятия:1.Изучить общие пути метаболизма аминокислот (дез-, трансаминирование, декарбоксилирование).

2.Овладеть методами качественного и количественного определения белков в моче.

Исходный уровень знаний:

- химия аминокислот;

- реакции дезаминирования, декарбоксилирования;

- классификация и номенклатура ферментов;

- строение витаминов В₂,РР,В₆и содержащих их коферментов.

Содержание занятия.

I.2. Общие пути метаболизма аминокислот.

Механизм поступления аминокислот в клетку.

Дезаминирование аминокислот и его виды.

Трансаминирование аминокислот: механизм, ферменты, роль витамина В₆.

Декарбоксилирование аминокислот и его виды.

Биогенные амины: строение, биологическая роль, инактивация.

II.1.Работа № 1. КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ НА БЕЛОК

В МОЧЕ.

В норме белок в моче находится в следовых количествах, которые не открываются обычными реакциями, применяемыми в клинической лаборатории. При ряде заболеваний с мочой выделяется заметное количество белка, начиная с долей грамма до 25 г в сутки. Появление белка в моче называется протеинуриейили альбуминурией, поскольку моча содержит, в основном, сывороточный альбумин.

Протеинурия может быть истинной и ложной. При истинной (или почечной) протеинурии белок сыворотки крови попадает в мочу через почки. Случайная (или ложная) протеинурия наблюдается при попадании в мочу слизи, крови, гноя, но не из почек, а из мочевыводящих путей.

Принцип метода.

Для обнаружения белка в моче применяют реакции осаждения с помощью азотной или сульфосалициловой кислот. Последняя - самая чувствительная.

Порядок выполнения работы.

К 1 мл мочи прилить 3 кап 20% раствора сульфосалициловой кислоты.

РЕЗУЛЬТАТ:

Работа № 2. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКА В МОЧЕ ПО МЕТОДУ БРАНДБЕРГА-РОБЕРТСА-СТОЛЬНИКОВА.

Принцип метода.

Метод основан на реакции Геллера с концентрированной азотной кислотой. Экспериментально установлено, что растворы, содержащие 0,033% белка (т.е. 0,033 г/л), дают мутное белое колечко в конце 2-й - начале 3-й минуты после наслаивания раствора белка на азотную кислоту. Толщина и быстрота появления кольца зависит от количества белка.

Порядок выполнения работы.

В пробирку налить 1 мл 50% раствора азотной кислоты, туда же осторожно по стенке добавить из пипетки 1 мл мочи. За счет меньшей относительной плотности моча наслаивается на кислоту. Если кольцо появилось сразу, повторить реакцию с мочой, разведенной в 10, 20, 30 и более раз до получения отрицательного результата.

РАСЧЕТ. Количество белка (Х) определяют по формуле

Х= n • 0,033 г/л, где

n- разведение мочи.

РЕЗУЛЬТАТ:

III.2. Контрольные вопросы.

Как можно открыть белок в моче?

Каков принцип количественного определения белка в моче?

Какие виды протеинурии Вы знаете?

Материал для самоподготовки. а)1 с.431-451; II, III