Занятие № 30
ТЕМА. ОБЩАЯ СХЕМА ИСТОЧНИКОВ И ПУТЕЙ УТИЛИ-ЗАЦИИ АМИНОКИСЛОТ В ТКАНЯХ. КАТЕПСИНЫ. СПЕ-ЦИФИЧЕСКИЕ ПУТИ ОБМЕНА НЕКОТОРЫХ АМИНОКИСЛОТ. ПАТОЛОГИЯ АЗОТИСТОГО ОБМЕНА. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОДУКТОВ АЗОТИСТОГО ОБМЕНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ.
Цель занятия:1.Изучить специфические пути обмена отдельных аминокислот.
2.Знать физиологическое значение метаболитов - производных аминокислот.
3.Ознакомиться с патологией азотистого обмена.
4.Овладеть методами определения продуктов азотистого обмена в крови и моче.
Исходный уровень знаний:
- химия аминокислот;
- заменимые и незаменимые аминокислоты;
- универсальные пути катаболизма аминокислот;
- витамины РР, ВС: строение, биологическая роль.
Содержание занятия.
I.2. Обмен глицина и серина: взаимопревращения, роль ТГФК.
Обмен серосодержащих аминокислот: взаимопревращения, особенности дезаминирования, синтез креатинина, глутатиона.
Обмен фенилаланина и тирозина: распад до фумаровой и ацетоуксусной кислот, синтез катехоламинов, тиронинов, меланина.
Обмен триптофана: серотониновый и кинурениновый пути.
Схема утилизации дикарбоновых аминокислот.
Врожденные и вторичные нарушения азотистого обмена.
II.1. Работа № 1. ОТКРЫТИЕ КРЕАТИНИНА В МОЧЕ.
Креатинин образуется из креатина или фосфокреатина путем отщепления фосфорной кислоты и выделяется с мочой в количестве около 2 г/сут.
Принцип метода.
Наиболее характерными реакциями для креатинина являются реакция образования нестойкого нитрозокреатинина (красного цвета) и реакция образованияхорошо растворимой солипикрата креатинина, окрашенной в оранжево-красный цвет.
Порядок выполнения работы.
а) Нитропруссидная проба.
К 1 мл мочи добавить 0,5 мл 10% раствора едкого натра и 0,5 мл нитропруссида натрия. Отметить окраску. После добавления уксусной кислоты окраска быстро исчезает.
РЕЗУЛЬТАТ:
б) Реакция с пикриновой кислотой.
К 1 мл мочи добавить 10 кап 10% раствора пикриновой кислоты и столько же 10% раствора едкого натра.
РЕЗУЛЬТАТ:
Работа № 4. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КРЕ-
АТИНИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (БИОТЕСТ).
Принцип метода.
В щелочной среде пикриновая кислота взаимодействует с креатинином с образованием оранжево-красной окраски, которую измеряют фотометрически. Определение в сыворотке крови проводят после депротеинирования, в моче - после разведения водой. Определение не совсем специфично
Порядок выполнения работы.
|
Реактивы (мл) |
Проба |
Контроль |
Эталон |
|
Сыворотка крови |
0,5 |
- |
- |
|
Дистиллированная вода |
1,0 |
1,5 |
1,0 |
|
Калибровочный раствор |
- |
- |
0,5 |
|
Реактив 3 (ТХУ) - осторожно! |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
|
|
Перемешать, отцентрифугировать пробу при 1500 об/мин – 10 мин. | ||
|
Надосадочная жидкость |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
|
Реактив 4 (пикриновая кислота) |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
|
Реактив 5 (NaOH) |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
Перемешать и точно через 20 мин измерить оптическую плотность пробы (А1) и эталона (А2) против контрольного раствора при длине волны 500-510 нм, кювета 1 см.
РАСЧЕТ: Количество креатинина (Х) рассчитать по формуле
А1
Х = 177 •
мкмоль/л
А2
NB. Определение не совсем специфично,т.к. интерферируют вещества с активной метиленовой группой и некоторые восстанавливающие вещества, напр., глюкоза.
Физиологические значения.
В норме показатель у мужчин составляет 61-115 мкмоль/л,
у женщин - 58- 97 мкмоль/л.
РЕЗУЛЬТАТ:
ВЫВОД:
Работа № 3. ОБНАРУЖЕНИЕ АММОНИЙНЫХ СОЛЕЙ В МОЧЕ.
Принцип метода.
При добавлении в пробирку с мочой раствора слабой щелочи жидкость приобретает запах аммиака вследствие разложения присутствующих в моче аммонийных солей.
2NH4Cl + Ca(OH)2→2NH4OH + CaCl2
Слабые щелочи типа гидроксида кальция не разлагают азотсодержащие органические вещества (мочевину, креатинин и др.) и разрушают только аммонийные соли.
Порядок выполнения работы.
В пробирку налить 1-2 мл мочи и столько же раствора Ca(OH)2. Опустить в жидкость влажную красную лакмусовую бумажку. Через 1-2 мин отметить изменение окраски бумажки. Пробирку можно закрыть ватой.
РЕЗУЛЬТАТ:
ВЫВОД:
III.2. Контрольные вопросы.
Какие продукты азотистого обмена определяются в моче здоровых людей?
Сколько за сутки выделяется креатинина с мочой?
Сколько в норме креатинина в сыворотке крови?
Какие цветные реакции используются для определения креатинина?
Специфичен ли БИОТЕСТ на креатинин? Почему?
Материал для самоподготовки. а)1 с.451-468, 567-579; II, III