- •Депарпамент образования и науки
- •Оглавление
- •Глава 1. Особенности некоторых методов микроскопии
- •Устройство и принцип работы темнопольного конденсора ои-13
- •1.1.1. Условия работы с темнопольным конденсором
- •1.1.2. Порядок работы с темнопольным конденсором:
- •Принцип и порядок работы с фазово-контрастным устройством кф-4
- •1.2.1.Устройство фазово-контрастной приставки кф-4
- •1.2.2. Порядок работы с фазово-контрастным устройством
- •Глава 2. Методы окраски фиксированных препаратов
- •2.1. Подготовка красителей и реактивов для окраски по методу Грама и техника окрашивания
- •2.1.1. Особенности подготовки красителей
- •2.1.2. Техника окраски по методу Грама
- •2.1.3. Дифференциация бактерий по Граму без окрашивания
- •2.2. Выявление кислотоустойчивости и спиртоустойчивости бактерий
- •2.2.1. Окраска по методу Циля-Нильсена
- •2.2.2. Красители и реактивы для окраски кислотоустойчивых бактерий
- •2.3. Методы окраски спор у бактерий
- •2.3.1. Метод Циля — Нильсена в модификации Мюллера
- •3.3.2. Окраска спор по методу Пешкова
- •2.3.3. Окраска спор по методу Виртца в модификации Саватеева
- •2.3.4. Окраска спор по методу Виртца в модификации Шеффелера и Фултона
- •2.3.5. Окраска спор по Битеру
- •2.3.6. Реактивы и красители для окрашивания спор бактерий:
- •2.4. Методы окраски капсул
- •2.5. Методы окраски жгутиков бактерий
- •2.5.1. Окраска жгутиков по методу Леффлера
- •2.5.2. Метод серебрения жгутиков по Морозову
- •2.5.3. Окраска жгутиков по методу Грея
- •2.6. Окраска включений клеток микроорганизмов
- •2.7. Окраска генома бактерий
- •2.7.1. Окраска генома бактерий методом Романовского-Гимза
- •2.7.2. Выявление генома по реакции Фельгена
- •Глава 3. Определение качественного состава микроорганизмов по культуральным, морфологическим и физиолого-биохимическим признакам
- •3.1. Морфологические признаки
- •3.2. Культуральные признаки
- •Физиолого-биохимические признаки микроорганизмов
- •3.3.1. Тест на наличие каталазы
- •3.3.2. Тест на наличие оксидазы
- •3.3.3. Окислительно-ферментативный (о/f) тест на использование глюкозы (тест Хью — Лейфсона)
- •3.3.4. Тест на наличие уреазы
- •3.3.5. Тест на наличие протеолитической активности (протеиназы)
- •3.3.6. Тест на наличие диастазы (амилазы)
- •3.3.7. Тест на наличие липазы
- •3.3.8. Тест на использование углеводов и органических кислот
- •Тест на редуцирующую способность микроорганизмов
- •Тест на декарбоксилазы и дегидролазы
- •3.3.11. Тест на образование индола и сероводорода
- •3.3.12. Тест на использование фумарата в анаэробных условиях
- •Список использованной литературы
- •Методы исследований при идентификации микроорганизмов Методическое пособие
Принцип и порядок работы с фазово-контрастным устройством кф-4
Окрашенные препараты поглощают часть проходящего через них света, в результате чего амплитуда световых волн снижается, и частицы препарата выглядят темнее фона. При прохождении света через неокрашенный препарат амплитуда световых волн не меняется, происходит лишь изменение фазы световых волн, прошедших через частицы препарата, что не способен уловить человеческий глаз. Поэтому неокрашенный препарат при правильной установке освещения в микроскопе будет невидим.
Фазово-контрастное устройство позволяет превратить изменение фазы лучей, прошедших через частицы неокрашенного препарата, в изменения амплитуды, воспринимаемые глазом человека, и таким образом позволяет сделать неокрашенные препараты отчетливо видимыми. Применение фазово-контрастного устройства не позволяет увеличить разрешающую способность микроскопа, но дает возможность наблюдать живые объекты, не прибегая к их фиксации и окрашиванию, увидеть прозрачные объекты более четко и даже выявить некоторые структуры и включения в клетках крупных микроорганизмов, используя светопольный микроскоп.
1.2.1.Устройство фазово-контрастной приставки кф-4
Оптическая система, используемая для получения фазового контраста, состоит из фазовой пластинки и кольцевой диафрагмы. Фазовая пластинка расположена в задней фокальной плоскости объектива и представляет собой прозрачный диск, на котором напылено кольцо из металлов. Кольцевая диафрагма расположена под конденсором и представляет собой прозрачную щель в виде кольца на непроницаемой для света пластинке.
Фазово-контрастная приставка КФ-4 состоит из вспомогательного окуляра, специальных фазовых объективов, как сухих так и иммерсионных, и конденсора с набором кольцевых диафрагм, каждая из которых соответствует фазовой пластинке определенного объектива.
1.2.2. Порядок работы с фазово-контрастным устройством
В светопольном микроскопе отвинчивают объективы и снимают светопольный конденсор.
В револьверы устанавливают фазовые объективы, имеющие дополнительное обозначение «ф».
Устанавливают фазово-контрастный конденсор. Диск револьвера конденсора поворачивают таким образом, чтобы в окошке стояла позиция «0». Ирисовая диафрагма конденсора должна быть полностью открыта.
Готовят нативный препарат и помещают на предметный столик микроскопа.
Регулируют освещение препарата и фокусируют изображение объекта с необходимым увеличением объектива (при работе с иммерсионным фазово-контрастным объективом, так же как и с обычным, пользуются иммерсионным маслом).
Из тубуса вытягивают обычный окуляр (правый) и вставляют вспомогательный окуляр фазово-контрастной приставки.
Откручивают винт вспомогательного окуляра и перемещают «вверх-вниз» линзу окуляра, добиваясь четкой фокусировки фазовой пластинки объектива в виде темного кольца. Положение линзы окуляра закрепляют винтом.
Револьвер конденсора поворачивают так, чтобы в окошке появилась позиция, соответствующая увеличению объектива. Теперь под микроскопом видно не только фазовое кольцо, но и светлое кольцо – щель диафрагмы.
Пользуясь двумя центрировочными винтами конденсора, перемещают кольцевую диафрагму так, чтобы она совместилась с фазовым кольцом.
Вспомогательный окуляр заменяют обычным, микровинтом микроскопа фокусируют препарат и проводят наблюдения.
При необходимости смены объектива, устанавливают соответствующие кольцевые диафрагмы (позиция на конденсоре) и центрировку с помощью вспомогательного окуляра повторяют заново.