Гидролиз протеогликанов пупочного канатика и анализ продуктов гидролиза
Кусочек пупочного канатика (источник протеогликанов) кипятят 30 мин в широкой пробирке с обратным холодильником в 15 мл 10% раствора NаОН. В гидролизате обнаруживают составные компоненты протеогликанов: белок, углеводный компонент, Н2SО4.
а) белок обнаруживают биуретовой реакцией;
б) углеводы (аминосахара) обнаруживают реакцией Молиша: к 5 каплям гидролизата добавляют 2 капли раствора тимола и осторожно по стенке наслаивают 10-15 капель концентрированной серной кислоты. Серная кислота опускается на дно пробирки, образуется нижний слой жидкости, исследуемый раствор остается в верхнем слое. На границе слоев возникает фиолетовое кольцо. В основе реакции лежит способность углеводов образовывать с концентрированной серной кислотой фурфурол (оксиметилфурфурол), дающий с тимолом фиолетовое окрашивание.
в) Н2SО4 обнаруживают по выделению осадка сернокислого кальция после добавления к 1 мл гидролизата 2 капель раствора хлористого кальция. В протоколе записать схему гидролиза протеогликанов животных тканей.
СХЕМА ГИДРОЛИЗА:
протеогликаны
белок углеводы Н2SO4
моносахариды
Литература:
1. Материал лекций.
2. Берёзов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М., Медицина,
2004, с.661-671.
3. Биохимия под ред. Е.С.Северина, А.Я.Николаева М.: ГЭОТАР-МЕД,
2011, с.687-715.