микроб2

Глава 22. Ортомиксовирусы. Вирус гриппа. Семейство ортомиксовирусов - это РНК-овые вирусы со спиральным типом симметрии нуклеокапсида, имеющие суперкапсидную оболочку, содержащую липиды, в связи с чем они чувствительны к эфиру. Белки суперкапсидной оболочки имеют сродство к муцину. К этому семейству относится вирус гриппа. У него одноцепочечная фрагментированная РНК, состоящая из 8 фрагментов, что обуславливает дрейф генов и большую антигенную вариабельность вируса. РНК представлена “минус-нитью”, поэтому у вируса есть особый геномный белок - РНК- зависимая РНК полимераза, которая нужна для построения реплекативной формой РНК “плюс-нити”, выполняющей функцию и-РНК. Это необходимо для синтеза вирусных белков в клетке. Также с нуклеопротеидом вируса связаны еще 2 геномных фермента - эндонуклеаза и репликаза, участвующие в репродукции вируса в клетке. Форма вириона вариабельна, чаще сферическая (могут быть нитевые формы), размеры 80-120 нм. Капсидная оболочка построена из простых белков, способных к самосборке. В ее состав входит M- белок, который сверху покрывает бислойная липидная мембрана с гликопротеидными шипами суперкапсидной оболочки. Эти гликопротеидные шипы - ферменты гемагглютинин и нейраминидаза, связанные с суперкапсидной оболочкой. Гемагглютинин распознает мукопептидные рецепторы чувствительных клеток, содержащие N-ацетилнейраминовую кислоту, обеспечивает адсорбцию вируса на клетке. Нейраминидаза обуславливает проникновение вируса в клетку, отщепляя сиаловые кислоты, входящие в мембрану клетки. Антигены вируса гриппа. Глубокий антиген капсидной оболочки связан с белком рибонуклеопротеида и M- белком. По строению этого антигена различают вирус гриппа типа А, В и С. Поверхностные антигены суперкапсидной оболочки - антигены гемагглютинина /H/ и нейраминидазы /N/ - вариантспецифические. Они более вариабельны: у вируса гриппа А различают 13 сероваров по антигену гемагглютинина /H-АГ/ и 10 сероваров по антигену нейраминидазы /N-АГ/. Так у вируса гриппа А наибольшее распространение 163 имеют гемагглютинины H1-3 и нейраминидазы N1-2. H-АГ вируса гриппа рассматривают как протективный антиген. Вирус гриппа В имеет сходное строение с вирусом гриппа А, отличаясь только глубоким антигеном. Его геном также содержит минус-нитевую РНК, состоящую из 8 фрагментов, кодирующих 3 неструктурных белка (геномные ферменты) и 7 структурных оболочечных белков. Различают несколько сероваров по H- и N- антигенам, но антигенный дрейф выражен слабее. Вирус гриппа С отличается не только антигенами, но и некоторыми другими признаками: у него 7 фрагментов РНК, нуклеотидные последовательности в которых отличаются от таковых у вируса гриппа А и B; в геноме закодировано 2 неструктурных белка и 6 структурных, отсутствует нейраминидаза. Клеточные мукопептидные рецепторы к вирусу С имеют иное строение, чем клеточные рецепторы к вирусам А и B. Антигенный дрейф не выражен. Вирус гриппа хорошо размножается в культурах тканей и курином эмбрионе (амниотической и аллонтоисной оболочках). Из культур тканей оптимальной для репродукции вируса является культура клеток почек эмбриона человека. Цитопатическое действие выражено слабо и не во всех культурах тканей. Вирус гриппа С труднее адаптируется к куриному эмбриону, лучше культивируется при температуре 320 - 330С. В окружающей среде вирус гриппа разрушается под действием температуры 560С, УФ-лучей, детергентов и дезинфектантов, но может сохраняться при низких температурах до - 700С. Эпидемиология и патогенез гриппа. Грипп - это острая респираторная вирусная инфекция, имеющая тенденции к распространению в человеческой популяции в виде эпидемий с характерной сезонностью и даже пандемий. Вирус гриппа А поражает человека и некоторые виды животных (лошадей, свиней, птиц), а вирусы гриппа B и C только людей. Источником инфекции для человека являются больные люди, путь заражения - воздушно-капельный. Эпидемические вспышки наблюдаются в зимнее время и каждые 10 лет могут перерастать в пандемии. Особенно это характерно для вируса гриппа А, в то время как вирус гриппа B чаще вызывает эндемические, локальные вспышки, а для вируса гриппа С регистрируются лишь спорадические случаи заболевания. Одна из самых тяжелых пандемий гриппа, получившая название "испанки", разразилась в 1918г. и унесла 20 млн. жизней. Ответственен за нее был вирус гриппа А (HsN1). Азиатская пандемия 1957 г. была вызвана вирусом гриппа А (H2N2) и охватила 2 млрд. человек, а тяжелая эпидемия, начавшаяся в Гонконге в 1968г., - вирусом гриппа А (H3N2). В организме человека основное место локализации вируса - дыхательный эпителий трахеи, бронхов, бронхиол и альвеолы. 164 За счет гемагглютина вирус гриппа адсорбируется на гликопротеиновых рецепторах эпителиальных клеток нижних отделов дыхательного тракта и с помощью нейраминидазы проникает в клетку путем эндоцитоза. В фагосоме идет частичное раздевание вируса, а окончательное происходит у ядра пораженной клетки. В ядре клетки идут процессы репликации и транскрипции вирусных нуклеиновых кислот с участием геномных ферментов самого вируса, т.к. его РНК, являясь минус-нитевой молекулой, служит лишь матрицей для построения и-РНК за счет вирусной РНК-зависимой РНК- полимеразы. Вирусная эндонуклеаза, формируя модифицированный конец вирусной и-РНК - шапочку (сap), откусывает его от клеточной м-РНК, после чего происходит транскрипция и становится возможным синтез вирусных белков в рибосомах клетки. Окончательное формирование вириона идет на внутренней клеточной мембране после трансляции вирусных белков. Углеводные и липидные компоненты свой суперкапсидной оболочки вирус захватывает из мембраны клетки, когда выходит из нее путем почкования. Из-за повреждения мембран эпителиоцитов под действием нейраминидазы вируса гриппа образуются эрозии на слизистой дыхательных путей. Через эрозированную поверхность вирус попадает в кровь, развивается вирусемия, сопровождающаяся высокой температурой, болями в мышцах и костях, явлениями интоксикации, обусловленными попаданием в кровь продуктов клеточного распада. Инкубационный период короткий - 1-2 суток. Возможны очень тяжелые формы гриппа (“токсические”) с развитием отека легкого при нарушении проницаемости сосудов под действием нейраминидазы. Часто присоединяются бактериальные инфекции, что связано с повреждающим действием вируса на лимфоциты в лимфоузлах и созданием условий развития вторичных иммунодефицитов. Иммунитет переболевших вариантспецифический. Методы микробиологической диагностики. Материалом для исследования чаще всего служит носоглоточный и бронхиальный смывы, иногда кровь, и могут быть использованы следующие методы: вирусологический - из исследуемого материала вирус выделяют при заражении куриного эмбриона и культуры ткани почек эмбрионов человека с последующей идентификацией в РТГА сероваров и в РСК типов вируса гриппа; иммуноиндикация - антигены вируса обнаруживают в исследуемом материале - носоглоточном, бронхиальном смывах - с помощью РТГА и ИФА или РИФ в мазках-отпечатках из эпителиальных клеток слизистой оболочки носоглотки; серологический - методом РТГА, РСК, ИФА определяют наличие инфекционных антител в парных сыворотках больного по нарастанию их титра. С помощью ИФА определяют и титр секреторных иммуноглобулинов А в носоглоточных смывах; 165 методы генетического анализа - разработаны РНК-зонды, использование которых позволяет обнаружить нуклеотидные последовательности вируса в исследуемом материале. Этиотропная терапия. В терапии гриппа используют противовирусные средства этиотропной химиотерапии, а также препараты интерферона и иммунотерапии. Антибиотики используют только для профилактики бактериальных осложнений, т.к. сами вирусы не являются мишенями для действия этих химиопрепаратов. Среди химиотерапевтических средств с противовирусной активностью в лечении гриппа используют ремантадин и его аналоги, арбидол. Эти препараты препятствуют попаданию вируса гриппа в клетку и его депротеинизации. В первые дни болезни можно назначить противогриппозный гамма- глобулин, в более поздние сроки он не действует, т.к. все вирусы находятся внутри клеток. В начале заболевания и более поздние сроки можно назначать препараты интерферона, который действует и на внутриклеточный вирус, препятствуя синтезу нуклеиновых кислот и белков вирусов. На практике используют лейкоцитарный интерферон и интерфероногены, например неовир, а также препараты генноинженерных интерферонов, например реальдерон. Иммунопрофилактика. Разработаны средства активной и пассивной иммунопрофилактики гриппа. Активная иммунопрофилактика проводится живыми, убитыми и химическими гриппозными вакцинами. Предпочтение отдают живым вакцинам, т.к. они активируют не только гуморальный, но и клеточный иммунный ответ, синтез интерферона, а также обеспечивают развитие механизма вирусной интерференции. В настоящее время в России используются живая аттенуированная вакцина, убитая цельновирионная и химические (субвирионные и субъединичные), приготовленные из H- и N- антигенов вируса гриппа. Последние обладают наименьшей реактогенностью и рекомендуются для вакцинации по эпидпоказаниям детей в возрасте от 6 месяцев до 12 лет; Пассивная иммунопрофилактика гриппа возможна в очагах инфекции. Для ее целей могут использовать противогриппозный гамма-глобулин, противогриппозную сыворотку типа А1, А2, В с сульфаниламидами (вводят в носовые ходы, чтобы местно создать высокий титр антител). Пассивная иммунопрофилактика донорским иммуноглобулином назначается контактным лицам не позднее 7 дня. Глава 23. Парамиксовирусы: вирусы парагриппа, кори, эпидемического паротита, РС- вирусы. 166 Парамиксовирусы - это семейство РНК-овых вирусов. РНК однонитчатая (“минус-нить”), линейная, нефрагментированная. Тип симметрии нуклеокапсида спиральный. Нуклеокапсид покрыт суперкапсидной оболочкой, содержащей липиды. Чувствительны к эфиру. Размеры вириона 120-300 нм. Семейство объединяет вирусы-возбудители острых респираторных вирусных инфекций: вирус парагриппа, эпидемического паротита - род Paramyxavirus, РС-вирус (респираторно-синтициальный) - род Pneumovirus, вирус кори - род Morbilivirus. Парагрипп протекает с поражением верхних дыхательных путей, а РС- инфекция - с поражением бронхиол и альвеол (чаще у детей). Корь - острая детская инфекция, при которой вирус из носоглотки проникает в кровь и разносится по организму, что сопровождается появлением сыпи на теле. В условиях обязательной иммунопрофилактики в детском возрасте заболевание в последние годы “повзрослело”. Эпидемический паротит характеризуется поражением околоушных желез. Вирусы отличаются антигенами, наличием гемагглютинина и нейраминидазы, размножением в курином эмбрионе. Все они размножаются в культуре ткани с цитопатическим действием /ЦПД/: очень характерно для РС- вирусов - образование многоядерных клеток-синтиций. 23.1. Вирус парагриппа. Вирус парагриппа имеет сферическую форму вириона с размерами 150- 200 нм. Геном вируса представлен минус-нитью РНК, включающей 6 генов, и геномными белками-ферментами: РНК-зависимой РНК-полимеразой и полимеразами P и L. Капсидная оболочка содержит матриксный М-белок, а суперкапсидная - N-, H- и F- белки и липиды клеточного происхождения. N- белок - это нейрамидаза, а H- белок - гемагглютинин. F- белок - белок слияния - отвечает за гемолиз, образование синтиций, слияние вирусной суперкапсидной оболочки с мембраной клетки и лизис клетки. У вируса парагриппа различают глубокий (S) антиген, связанный с нуклеопротеидом, и поверхностный Y- антиген, состоящий из двух компонентов : Н- и N- белков. По строению поверхностного антигена суперкапсидной оболочки различают 5 серотипов вируса парагриппа. Вирус парагриппа не размножается в курином эмбрионе. Для его репродукции используют первичные и перевиваемые культуры тканей человека и обезьян. Вирус парагриппа высоко чувствителен к детергентам и дезинфектантам, разрушается при температуре 500 С, под действием эфира. Эпидемиология и патогенез парагриппа. Источником инфекции является больной и вирусоноситель, заражение происходит воздушно-капельным путем. За счет NH- и F-белков происходит 167 адсорбция вируса на гликопротеидных рецепторах чувствительных эпителицитов дыхательного тракта и проникновение в клетки путем эндоцитоза. Не нуждаясь в затравочной м-РНК для синтеза вирусных нуклеиновых кислот, вирус после стадии фагосомы не проникает в ядро клетки, и его репродукция идет в цитоплазме. Характерно образование ацидофильных цитоплазматических включений. Выход вируса из клетки осуществляется почкованием с образованием синтиций. Возможна вирусемия и развитие тяжелых форм инфекций, особенно у детей. Вирусы парагриппа нередко являются причиной внутрибольничных инфекций в педиатрических стационарах. Иммунитет типоспецифический. Искусственная иммунопрофилактика не проводится. Методы микробиологической диагностики парагриппа. В микробиологической диагностике парагриппа могут быть использованы вирусологическое, серологическое исследования, метод иммунноиндикации. Материалом для вирусологического исследования и иммуноиндикации являются носоглоточный и бронхиальный смывы, а при серологическом исследовании материалом от больного служат парные сыворотки. При вирусологическом исследовании производят заражение исследуемым материалом первичных и перевиваемых культур тканей человека с идентификацией вируса по ЦПД, гемадсорбции эритроцитов морских свинок ( для разных серотипов гемагглютинирующая активность и ЦПД варьирует, но все обладает гемолитической активностью и способностью образовывать симпласты) и в РТГА. Для иммуноиндикации используют постановку реакций вирусонейтрализации, РТГА, РСК, РИФ , ИФА для обнаружения антигенов вирусов в носоглоточном смыве и соскобе эпителия слизистой дыхательного тракта. При серологическом исследовании обнаружение инфекционных антител в разведениях парных сывороток больного проводят в РТГА, РСК, ИФА. 23.2. Вирус эпидемического паротита. Вирус эпидемического паротита - типичный представитель парамиксовирусов по строению вириона и свойствам. Его однонитевая нефрагментированная “минус” РНК кодирует 8 белков, в том числе H, N и F- белки суперкапсидной оболочки. Вирус обладает гемолитической, гемагглютинирующей и нейраминидазной активностью, способностью образовывать синтиции, имеет поверхностный и глубокий антигены, но в отличии от вируса парагриппа у вируса эпидемического паротита нет сероваров. 168 Он может размножаться в курином эмбрионе, но при этом теряет свою инфекционность, что используют для приготовления живых вакцин. Вирус разрушается под действием эфира, 2% фенола, 1% лизола и детергентов. Эпидемиология и патогенез эпидемического паротита. Источником инфекции является больной человек, путь заражения - воздушно-капельный. Заболеваемость высока в детском возрасте, особенно среди мальчиков от 5 до 15 лет. Наиболее заразен инкубационный период и первая неделя клинических проявлений болезни. Первичная репродукция вируса происходит в эпителиальных клетках носоглотки, откуда по стенонову протоку вирус попадает в клетки околоушных желез, где и происходит его репродукция. С током крови вирус заносится во внутренние органы и фиксируется в яичках или яичниках, поджелудочной и щитовидной железах, в головном мозге. Наиболее опасными осложнениями при тяжелых формах инфекции являются орхиты и менингиты. Иммунитет стойкий, пожизненный. Дети первых трех месяцев жизни не восприимчивы к инфекции из-за циркуляции в крови материнских иммуноглобулинов класса G, передающихся плоду через плаценту в период внутриутробного развития и обеспечивающих врожденный пассивный иммунитет. Он может сохраняться в течении 6 месяцев. В 3-х месячном возрасте предусмотрена плановая активная иммунизация живой вакциной. Методы микробиологической диагностики. Для микробиологической диагностики используют вирусологический, серологический ( РТГА, РСК и др.) методы и иммуноиндикацию. 23.3. Респираторно-синтициальный вирус (РС- вирус). РС-вирусы отличаются полиморфизмом вирионов с размерами 120-200 нм. Геном представлен “минус-нитью” нефрагментированной РНК, связанной с геномными белками-ферментами. Геном включает 10 генов, кодирующих 10 белков, в том числе 7 структурных. Среди них - G- и F-белки суперкапсидной оболочки, N-, P-, L- полимеразный комплекс, содержащий транскриптазу, M-, K- белки внутренней поверхности суперкапсидной оболочки. F-белок обеспечивает слияние вирусной оболочки с мембраной клетки, образование синтиций, а белок G - фиксацию вируса на мембране клетки. Нейраминидазы и гемагглютинина у вируса нет. По антигенному строению различают 2 серовара. У РС-вирусов есть общий комплементсвязывающий антиген. 169 Вирус не размножается в курином эмбрионе. Его культивируют в культурах тканей почек обезьян, Hela и др., где проявляется ЦПД в виде образования симпластов и синтиций. РС-вирус разрушается под действием детергентов и эфира, при нагревании (550 С), при замораживании и последующем оттаивании. Эпидемиология и патогенез РС-вирусной инфекции. Источник инфекции - больной, путь передачи - воздушно-капельный. При заражении вирусом поражаются эпителиальные клетки верхних и нижних отделов дыхательных путей, в том числе бронхиол и альвеол, что приводит к развитию очень тяжелых пневмоний у новорожденных и детей 1-2 года жизни. Нередко этот вирус является возбудителем внутрибольничных инфекций в педиатрических стационарах. Развитие РС-инфекции сопровождается присоединением бактериальных осложнений, т.к. вирус способствует развитию вторичных иммунодефицитов и иммунопатологических реакций, связанных с формированием иммунных комплексов. Иммунитет сохраняется в течение года, часты повторные заболевания. Искусственная иммунопрофилактика не проводится. Методы микробиологической диагностики. В микробиологической диагностике РС-вирусной инфекции используют различные методы, а материалом чаще служат носоглоточный, бронхиальный смывы, мокрота. При вирусоскопическом исследовании обнаруживают симпласты и синтиции в соскобах слизи, взятой при бронхоскопии. В ходе вирусологического исследования вирус культивируют в культурах тканей и идентифицируют по ЦПД, а также в РСК и реакции вирусонейтрализации в культуре ткани. Для иммуноиндикации используют РИФ по обнаружению антигена вируса в бронхиальных смывах. При серологическом исследовании обычно ставят РСК по обнаружению антител в разведениях парных сывороток больного. 23.4.Вирус кори. Размеры вириона - 150-250 нм. Геном представлен “минус-нитью” однонитевой, нефрагментированной РНК, связанной с геномными белками P и L (полимеразный комплекс, содержащий РНК-зависимую РНК -полимеразу). Тип симметрии нуклеокапсида спиральный. С нуклеокапсидом связаны белок NP и M-белок. В суперкапсидной оболочке содержатся H- и F- белки. Первый обеспечивает гемагглютинирующую активность вируса в отношении эритроцитов макак-резус, а второй - образование симпластов и гемолитическую активность вируса. У вируса нет нейраминидазы. Различают несколько 170 сероваров, но вирус кори обладает и общими антигенами с вирусом чумы собак и рогатого скота. Лабораторные животные маловосприимчивы к этому вирусу, и он плохо размножается в курином эмбрионе, теряя вирулентность, что использовано при создании живой вакцины. Культивируют вирус кори в культуре ткани почек обезьян, эмбриона человека, Hela, KB, Vero, где он обладает ЦПД. При этом образуются симпласты, и появляются зернистые включения в цитоплазме и ядре пораженных клеток. Вирус нестоек в кислой среде, погибает при температуре 560С и снижает свою активность при 370С. Разрушается под действием эфира, детергентов, солнечного света, но устойчив при низких температурах -700С. Эпидемиология и патогенез кори. Источник инфекции - больной с последнего дня инкубационного периода и до 4-5 дня с момента появления сыпи. Инкубационный период - 10 дней, путь заражения - воздушно-капельный. Первичная репродукция вируса идет в эпителии носоглотки, трахеи, бронхов, после чего развивается вирусемия с поражением эндотелия сосудов и появлением характерной сыпи на теле, в том числе на слизистой оболочке щек отмечаются пятна Коплика-Филатова. У детей старше 8-10 лет нередко встречаются тяжелые формы заболеваний. Осложнениями при кори могут быть пневмонии, отек гортани с развитием крупа, острый коревой энцефалит. Постинфекционный иммунитет при кори пожизненный. В первые три месяца жизни ребенок защищен материнскими иммуноглобулинами класса G, перешедшими к плоду через плаценту в процессе внутриутробного развития. Искусственный противокоревой иммунитет может быть создан как активный, так и пассивный. Для целей активной обязательной плановой иммунопрофилактики используют живую коревую вакцину. Первичная вакцинация проводится в 9 месячном возрасте. Контактным лицам не позднее 7 дня инкубационного периода может быть введен противокоревой донорский иммуноглобулин как средство экстренной пассивной иммунопрофилактики. * Считают, что вирус кори может вызывать и развитие медленной вирусной инфекции с клиникой подострого склерозирующего панэнцефалита, что может быть связано с длительной персистенцией вируса в клетках головного мозга с последующим их разрушением, что приводит к летальным исходам. Длительная персистенция вируса обусловлена неблагоприятными условиями для его репродукции в клетках головного мозга, куда он заносится током крови, и появлением дефектных вирионов, не имеющих суперкапсидной оболочки и белка М. В то же время ряд ученых рассматривают возбудителя этой формы инфекции как самостоятельный вирус, который имеет сходство с вирусом чумы собак и отличается от вируса кори строением генома и молекулярной массой. Подострый склерозирующий панэнцефалит развивается у лиц с ослабленной 171 иммунной системой. Показано, что у этих больных цитотоксические Т-клетки не распознают инфицированные вирусом клетки организма. Методы микробиологической диагностики кори. Микробиологическая диагностика кори обычно не проводится, т.к. клиническая картина болезни столь очевидна, что не требует лабораторного подтверждения. Однако, при необходимости могут быть использованы вирусологическое, серологическое исследования и методы иммуноиндикации. При вирусологическом исследовании возможно заражение культур тканей кровью больного или носоглоточными смывами. Идентификация вируса проводится по феномену ЦПД, гемагглютинации, а также в РТГА, РИФ и реакции вирусонейтрализации в культуре ткани. Для целей иммуноиндикации используют РИФ по обнаружению антигенов вируса в пораженных клетках слизистой. При серологическом исследовании выявляют инфекционные антитела у больного в РСК, РТГА и других реакциях. 172 Глава 24. Вирус краснухи. Вирус краснухи относится к семейству Togaviridae роду Rubivirus. Краткая характеристика семейства тогавирусов представлена в таблице 2, о роли арбовирусов этого семейства (род α-вирусы) в развитии энцефалитов с геморрагическим синдромом и выраженной лихорадкой, характеризующихся трансмиссивным путем передачи, уже указывалось ранее. Геном вируса краснухи представлен нефрагментированной, однонитевой “плюс-нитью” РНК. Вирионы имеют сферическую форму с диаметром 60-70 нм. Нуклеокапсид построен по кубическому типу симметрии, окружен суперкапсидной оболочкой, включающей липиды. На поверхности суперкапсидной оболочки имеются шиповидные выросты гликопротеидной природы, которые обладают гемагглютинирующей, гемолитической и нейраминидазной активностью. Известны три структурных белка вируса: белок капсидной оболочки С(cor) и два гликопротеида суперкапсидной оболочки E1 и Е2. Вирус представлен одним серотипом. Наличие на поверхности вирионов белков делает их чувствительными к температуре, а наличие липидов - к эфиру. При замораживании вирус сохраняет инфекционную активность годами. Культивируют эти вирусы в развивающихся куриных эмбрионах, в первичной культуре клеток амниона человека, перевиваемых культурах клеток почек кролика и почек обезьян Vero, где вирус обладает цитопатическим действием. В других клеточных культурах вирус может размножаться без видимых изменений, но индуцирует развитие интерференции, защищающей клетки от цитопатического действия других вирусов (например, ЕСНО). Эпидемиология и патогенез краснухи. Источником инфекции является больной. Путь передачи - воздушно- капельный. После заражения вирус попадает в лимфатические клетки шейных лимфоузлов, в которых начинается его первичная репродукция. Оттуда вирус, примерно через неделю после заражения, поступает в кровь. Через две-три недели появляется сыпь. За 5-7 дней до появления сыпи вирус можно обнаружить в отделяемом носоглотки, при появлении сыпи - в моче и кале, в течение недели после появления сыпи - в крови. Краснуха - это преимущественно детская инфекционная болезнь, но могут болеть и взрослые. Краснуха высоко контагиозная инфекция. Пик заболеваемости наблюдается весной. Эпидемии регистрируются каждые 6-9 лет. У взрослых инфекция приобретает более тяжелое течение с развитием артритов, энцефалитов и тромбоцитопенией. У инфицированных беременных женщин вирус в период вирусемии проходит через плаценту и проникает в ткани плода, приводя к его гибели или тяжелым уродствам. Тератогенное действие вируса характеризуется триадой 173 симптомов: пороки сердца, поражение органов зрения, поражение органов слуха. Оно обусловлено подавлением митотической активности клеток плода, цитодеструктивным действием вируса, поражением сосудов плаценты. Профилактика. После перенесенной инфекции формируется стойкий пожизненный иммунитет. Для профилактики краснухи применяют убитые и живые вакцины. Противопоказанием к прививке у женщин детородного возраста является беременность. Плановая иммунопрофилактика для создания активного иммунитета может проводиться с трех месячного возраста с использованием ассоциированных вакцин против кори, коревой краснухи и эпидемического паротита. Профилактика живыми или убитыми вакцинами Рубивакс может проводиться выборочно девочкам 12-14 лет и женщинам детородного возраста. Методы микробиологической диагностики. Обычно клинический диагноз коревой краснухи не требует лабораторного подтверждения. Если же в этом возникает необходимость, то используют вирусологическое и серологическое исследования. Материалом для вирусологического исследования служит отделяемое носоглотки и кровь - до появления сыпи, кровь, моча, фекалии - после появления сыпи. Этим материалом заражают перевиваемые культуры клеток почек кролика, где легко выявляется цитопатическое действие вируса. Через 5-7 дней в культуре ткани образуются очаги дегенерации, а часто и многоядерные гигантские клетки с цитоплазматическими включениями. Для идентификации выделенного в ходе вирусологического исследования вируса краснухи могут быть использованы методы иммунофлюоресценции, реакция торможения гемагглютинации, реакция вируснейтрализации. Используют тест интерференции. Для этого исследуемым материалом заражают клетки почек зеленой мартышки и через 7-10 дней в культуру вносят вирус ЕСНО типа 2 или вирус везикулярного стоматита. Если развиваются цитопатические изменения, вызываемые вирусом ЕСНО, материал не содержит вируса краснухи, и наоборот, отсутствие цитопатического действия вируса ЕСНО свидетельствует о присутствии вируса краснухи в исследуемом материале. Серологическая диагностика краснухи заключается в обнаружении вирусспецифических антител. Используют реакцию торможения гемагглютинации, реакции нейтрализации, иммуноферментного и радиоиммунного анализа для выявления нарастания титра антител в парных сыворотках больного. 174 Глава 25. Пикорнавирусы: вирус полиомиелита. Вирусы семейства пикорнавирусов - это РНК-содержащие вирусы. РНК однонитевая, линейная, “плюс-нить”, выполняющая функцию и-РНК. Вирион имеет простое строение и представляет собой нуклеокапсид, т.е. РНК покрыта капсидной оболочкой, в которой капсомеры уложены по кубическому типу симметрии. Суперкапсидной оболочки нет, вирусы устойчивы к эфиру. Вирионы имеют форму многогранника. Размеры 20-30 нм. Семейство Picornaviridae включает 4 рода: Enterovirus, Rinovirus, Cardiovirus, Aphtovirus. Представители родов отличаются антигенным строением, различной чувствительностью к низким значениям pH, патогенностью для человека и клиникой вызываемых заболеваний. Кардио- и афтовирусы патогенны для животных, представители двух других родов ответственны за развитие инфекций у человека. Риновирусы вызывают острые респираторные вирусные инфекции с поражением носоглотки. Энтеровирусы передаются фекально-оральным путем. Местом их первичной локализации являются носоглотка и кишечник, но они могут проникать в кровь и попадать в другие органы, давая экстракишечные формы инфекции. К энтеровирусам относятся полеовирус, вирусы Коксаки А и В, вирусы ECHO (enteritic cytopathogenic human orphan), энтеровирусы серотипов 68-71 и вирус гепатита А (ранее называли энтеровирус серотип70). 25.1. Вирус полиомиелита. Вирус полиомиелита (полеовирус) является типичным представителем рода энтеровирусов. Строение его РНК и нуклеокапсида соответствует общей характеристике семейства пикорнавирусов. Капсидная оболочка состоит из 4 белков: 3 на внешней поверхности (VP1, VP2, VP3) и 1 на внутренней (VP4). Вирион имеет сферическую форму. Как и все энтеровирусы, вирус полиомиелита не размножается в курином эмбрионе, хорошо размножается как в первичных, так и перевиваемых культурах тканей (Hela, фибробластов человека). Репродукция вирусов в культурах тканей сопровождается цитопатическим действием и образованием вирусных включений. По антигенному строению различают 3 серотипа вируса полиомиелита. Гемагглютинирующей активностью он не обладает. К этим вирусам чувствительны лабораторные животные. Вирус полиомиелита инактивируется при температуре 50 0 -550С, чувствителен к УФ, высушиванию, хлорпроизводным дезинфектантам, но устойчив к действию детергентов, эфира и низким рН. Эпидемиология и патогенез полиомиелита 175 Источником инфекции являются больные и вирусоносители. Выделение вируса с фекалиями начинается уже в инкубационный период и активно продолжается в разгар болезни. Основной путь заражения - фекально-оральный, но в эпид.очагах возможен и воздушно-капельный (уже в инкубационный период вирус может выделяться из глотки больного). Наиболее патогенен 1 серотип вируса, с ним связаны эпидемии этого заболевания. Наиболее восприимчивы к полеовирусу дети. До периода введения обязательной плановой иммунопрофилактики заболевания высокая частота заболеваемости, тяжелых форм инфекции и тяжелые постинфекционные осложнения (вялые параличи) характеризовали именно этот контингент лиц. Вирус проникает через рот. В лимфоидных узлах глоточного кольца происходит его частичная фиксация и первичная репродукция. Вирус свободно проходит кислый барьер желудка и размножается в энтероцитах и пееровых бляшках. Адсорбция вируса происходит на липопротеиновых рецепторах чувствительных клеток. Путем виропексиса он проникает в клетку. В образовавшейся фагосоме идет депротеинизация вируса и освобождение репликативной формы РНК (и-РНК). Так как его геномная РНК является и и- РНК, то процессы репликации и транскрипции у этого вируса тождественны, и на матрице вирусной РНК идет синтез вирусных белков в вирусспецифических полисомах, образовавшихся в клетке. В ходе процессов трансляции сначала синтезируются ранние вирусные белки - ферменты, участвующие в синтезе РНК вируса, а затем белки капсидной оболочки, точнее пробелки в виде полипептидной цепи, которая нарезается специфическими протеазами на белки капсидной оболочки. После этого они автоматически укладываются в капсомеры вокруг нуклеиновой кислоты вируса. При выходе вновь образовавшихся вирионов происходит гибель пораженных энтероцитов, что клинически проявляется диарейным синдромом. Полеовирус способен проникать через лимфатический барьер, что ведет к развитию вирусемии, сохраняющейся на протяжении нескольких часов или дней. С током крови вирус заносится во внутренние органы, в том числе в передние рога спинного мозга, где поражает α-мотонейроны. Это может быть связано с повышенной проницаемостью гематоэнцефалического барьера для вируса на фоне образования иммунных комплексов. Помимо передних рогов спинного мозга полеовирус может поражать двигательные клетки ретикулярной формации продолговатого мозга и варолиева моста, мозжечка, моторной и премоторной области коры головного мозга. Репродукция вируса в двигательных нейронах ведет к тяжелым дегенеративным изменениям нервных клеток с развитием клинической картины стойких параличей. При полиомиелите различают 4 основные клинические формы: 1. инаппарантная (скрытая); 2. абортивная (кишечная форма с маловыраженной симптоматикой); 3. непаралитическая (менингеальная); 176 4. паралитическая (чаще спинальная, бульбарная, понтинная - поражение варолиева моста), частота этой наиболее тяжелой формы 1:100. Постинфекционный иммунитет пожизненный, вариантспецифический. Высокий титр вирусонейтрализующих антител устанавливается через 1-2 месяца с момента заболевания и длительно сохраняется, что используется для ретроспективной серодиагностики. Однако, высокий титр сывороточных антител в период болезни не предотвращает развитие параличей. От матери ребенок может получить врожденный пассивный иммунитет, который сохраняется первые 4-5 недель. Искусственный активный иммунитет создают вакцинацией. Существуют живая вакцина А.А. Смородинцева - М.П. Чумакова на основе штамма А.Себина и убитая вакцина Солка. Механизм защиты при пероральном введении живой вакцины связан не только с развитием гуморального, клеточного иммунитета, но и явлением вирусной интерференции и стимуляцией выработки интерферона. Вакцинация против полиомиелита является плановой иммунопрофилактикой. Первичная вакцинация осуществляется ребенку в 3 месяца. Методы микробиологической диагностики полиомиелита. В микробиологической диагностике полиомиелита могут быть использованы вирусологическое, серологическое исследование и методы иммуноиндикации. Материалом для вирусологического исследования могут служить фекалии, кровь, спинно-мозговая жидкость. Производят заражение вирусодержащим материалом культур тканей, где индикацию вируса проводят по характерному цитопатическому действию, феномену бляшкообразования под агаром, а окончательную идентификацию в реакции вирусонейтрализации. В том же исследуемом материале антигены полеовируса можно обнаружить методами иммуноиндикации, используя РСК, ИФА, РИФ и другие реакции иммунитета. Серологическое исследование позволяет подтвердить диагноз на основании обнаружения нарастания титра антител в парных сыворотках больного. С этой целью могут быть использованы РСК, реакция вирусонейтрализации.