13

6.3. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Основной функцией иммунной системы является контроль за постоянством внутренней среды организма и удаление болезнетворных микробов или чужеродных молекул. В выпол­нении этой функции важная роль принадлежит механизмам врожденного иммунитета. Их называют еще факторами неспецифической защиты, т.к. они защищают организм от различных экзогенных и эндогенных агрессий, а их защитные функции лишены избирательности. К системе врожденного иммунитета относятся фаго­цитарные клетки крови и тканей, натуральные киллеры, а также молекулы, продуцируемые этими клетками (систе­ма комплемента, интерлейкины, интерфероны и др.).

Механизмы специфического иммунного ответа вклю­чаются только после контакта с антигеном, а защита выполня­ется высокоспециализированными клетками иммунной системы. Распоз­навание и элиминацию чужеродных агентов осуществляют лимфоциты (клеточный иммунитет), а также продуцируемые и секретируемые ими антитела - иммуноглобулины (гуморальный иммунитет). Все эти компо­ненты находятся в тесной взаимосвязи; местом их функциональной коо­перации являются органы и ткани иммунной системы организма. В гематологической клинике обычно используются методы изучения гуморального и клеточного иммунитета, а также системы фа­гоцитов.

6.3.1. Изучение гуморального звена иммунитета.

Концентрации иммуноглобулинов классов M, G, A в сыворотке крови, а также секреторного иммуноглобулина А (SIgA) и S-компонентов в слюне и других секретах являются важнейшими параметрами гуморально­го звена иммунной системы. Методы количественной оценки иммуногло­булинов в биологических средах можно разделить на несколько групп в соответствии с принципами, лежащими в их основе: иммунопреципитация в геле, нефелометрия или турбодиметрия, твердофазный иммунофермент­ный анализ и радиоиммуноанализ. Они основаны на сравне­нии концентрации иммуноглобулинов в исследуемом объекте со стан­дартным раствором установленной концентрации.

В иммунологических исследованиях наибольшее распространение получил метод радиальной иммунодиффузии по Манчини. Он основан на том, что при встрече антигена (АГ) и антитела (АТ), относящегося к определенному классу иммуноглобулинов, в агаровом геле происходит их взаимодействие, и образующийся преципитат выпадает в осадок в виде визуально определяемых зон или полос. Диаметр кольца преципи­тации пропорционален концентрации иммуноглобулина. В норме содержа­ние иммуноглобулинов в сыворотке крови составляет: IgG - 13,9±0,64 г/л, IgA - 2,82±0,19 г/л, IgM - 1,18±0,06 г/л.

Лазерная нефелометрия основана на регистрации светового пото­ка, который рассеивается комплексом АГ-АТ, взвешенным в оптически прозрачной среде. Принцип турбодиметрии основан на регистрации света, поглощаемого образовавшимся комплексом АГ-АТ. Большим преимуществом кинетической нефелометрии является быстрота получения результатов (несколько минут; для сравнения: метод Манчи­ни для IgG и IgA - 24 часа, для IgM - 48 часов).

Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) в силу своей боль­шой чувствительности применяется для определения в сыворотке минор­ных иммуноглобулинов IgD и IgE, а также для определения всех клас­сов и субклассов иммуноглобулинов в супернатантах культур лимфоци­тов периферической крови, стимулированных В-митогенами: бактериаль­ным липополисахаридом (ЛПС), митогеном растительного происхождения PWM, антителами против иммуноглобулиновых m-цепей.

Недостаточность иммуноглобулинов может быть врожденной или приобретенной. Причинами недостаточности иммуноглобулинов могут быть: дефекты пролиферации, дифференцировки и функций В-лимфоцитов, нарушения регуляции синтеза иммуноглобулинов или переключения на другой изотип, связанные с дефектами Т-хелперов или соответствующих цитокинов, общая недостаточность белкового синтеза, ускорение ката­болизма молекул иммуноглобулинов или их разрушение протеолитически­ми ферментами.

Примером генетического дефекта является агаммаг­лобулинемия Брутона, которая развивается вследствие мутации в гене, кодирующем тирозинкиназу, которая необходима для дифференцировки В-клеток. В ре­зультате предшественники В-лимфоцитов не могут дифференцироваться в зрелые В-лимфоциты. У таких больных отсутствуют зрелые В-лимфоциты, плазматические клетки и нет никаких иммуноглобулинов.

Злокачественная трансформация В-лимфоцитов приводит к селективной пролиферации какого-то одного клона клеток и к продукции антител одного класса и одной специфичности. Такие случаи относятся к моноклональным гаммапатиям и проявляются вариабельными иммунодефицитами. Примером вторичного иммунодефицита, развивающегося вследствие злокачественной трансфор­мации В-лимфоцитов, является множественная миелома, при которой в сыворотке больного появляется большое количество гомогенного бел­ка - моноклонального иммуноглобулина, секретируемого злокачественным клоном В-клеток. Избыток легких цепей иммуноглобулинов, продуцируемых теми же клетками, выводится через почки и выявляется в моче в виде белка Бенс-Джонса.

Нарушение синтеза иммуноглобулинов наблюдается при лимфогранулематозе, неходжкинских лимфомах, хроническом лимфолейкозе. Лечение онкогематологических заболеваний с помощью цитоста­тических препаратов, стероидов, рентгеновского облучения может выз­вать существенное снижение уровня иммуноглобулинов.

6.3.2. Изучение клеточного звена иммунитета.

Для оценки клеточного иммунитета применяется набор иммунологических тестов, среди которых наибольшее расп­ространение получили: 1)определение гиперчувствительности замедленного типа с по­мощью кожных проб; 2)изучение пролиферативной активности лимфоцитов;3) количественная оценка популяций и субпопуляций лимфоцитов;4)определение уровня секретируемых цитокинов; 5)реакция торможения миграции лейкоцитов.

6.3.2.1. Кожные тесты.

Кожные тесты являются аналогом туберкулиновых проб. Так как эти реакции опосредуются Т-лимфоцитами, то в качестве антигенов вы­бираются только Т-зависимые антигены, например, вирус свинки, очи­щенный туберкулин, кандидозный антиген, дифтерийный или столбнячный анатоксин, антиген трихофитона, гемоцианин.

Указанные антигены вводятся внутрикожно, и учет реакции осу­ществляется по величине воспалительного очага через 24-48 часов. Кожный тест является интегральной реакцией, оцени­вающей несколько этапов иммунного ответа (распознавание антигена, хемотаксис, синтез цитокинов). Главным недостатком при проведении этого теста является трудность стандартизации воспалительной реак­ции.

Результаты оценки клеточного иммунитета с помощью кожных проб являются достаточно постоянными как у мужчин, так и у женщин в воз­расте от 16 до 65 лет. С возрастом клеточный иммунитет понижается, что проявляется снижением способности давать положительные реакции. Наблюдается корреляция между кожными пробами и повышенной заболеваемостью (инфекции, злокачест­венные опухоли) или смертностью в определенных группах больных. Поэтому кожные тесты можно рассматривать и как прогностические.