Спора и спорообразование у бактерий

Определение	Эндоспора - Покоящаяся форма, позволяющая сохранить наследственную информацию бактериальной клетки в неблагоприятных условиях внешней среды
Функция	Защита от: неблагоприятных физико-химических факторов внешней среды истощения питательной среды
Строение	ДНК, окруженной многослойной оболочкой, в т.ч. пептидогликановой (кортекс)
Место образования	внешняя среда (не в организме человека) искусственная питательная среда
Факторы, обуславли- вающие термоустой- чивость	практически полное отсутствие свободной воды повышенная концентрация кальция наличие дипиколиновой кислоты особое строение белка особое строение пептидогликана кортекса
Стадии образования	формирование спорогенной зоны (уплотненный участок цитоплазмы вокруг нуклеоида) образование проспоры (изолирование спорогенной зоны от остальной части цитоплазмы врастающей внутрь клетки ЦПМ) образование кортекса образование внешней оболочки, содержащей дипиколиновую кислоту отмирание вегетативной части клетки
Спорообразующие бактерии	бациллы (спора меньше диаметра клетки) клостридии (спора больше диаметра клетки)
Выявление	Окраска по Цилю-Нильсену или по Ожешко

Окраска по Цилю-Нильсену для выявления кислотоустойчивых бактерий и спор:

1. На фиксированный мазок накладывают полоску фильтровальной бумаги и наливают карболовый фуксин Циля и над пламенем спиртовки подогревают препарат 2-3 раза до появления паров. Необходимо для размягчения оболочки споры («протравливания»).

2. Бумагу снимают, препарат обесцвечивают 5% раствором серной кислоты.

Промывают водой и докрашивают метиленовым синим.

Результат: споры (и кислотоустойчивые бактерии) прокрашиваются в красный цвет. Кислотоподатливые бактерии и цитоплазма обесцвечиваются из-за особенностей химического состава и приобретают голубой (синий) цвет.

Окраска по Ожешко:

1. На нефиксированный мазок наносят 0,5% раствор соляной кислоты при подогревании

2. Промывают и фиксируют в пламени спиртовки.

3. Окраска по Цилю-Нильсену.

Результат микроскопии: споры – красные, вегетативные клетки – синие.

18. Жгутики бактерий. Определение подвижности.

Органы движения бактерий	Жгутики Осевая нить и аксиальная нить (у спирохет)
Тип движения жгутиков	Вращательный
Классификация бактерий по числу и расположению жгутиков	Монотрихи – один на полюсе Политрихи – много Амфитрихи – на противоположенных полюсах Лофотрихи – пучок Перитрихи – по всей поверхности Атрихи - отсутствуют
Выявление жгутиков	Косвенное – по факту подвижности бактерий (препарат «висячая» или «раздавленная капля» в темно-польной или фазово-контрастной микроскопии) Прямое: Специальные методы окраски (по Леффлеру, по Морозову (пропитывание солями серебра и утолщение). Электронная микроскопия

Методика приготовления препарата "висячая" капля для изучения подвижности микроорганизмов.

Для приготовления препарата необходимо иметь предметное стекло с углублением в центре (лункой).

1. На середину чистого покровного стекла наносят каплю исследуемой культуры.

2. Края лунки на предметном стекле предварительно смазывают вазелином. Затем на покровное стекло накладывают предметное стекло с лункой так, чтобы капля находилась против центра лунки, и прижимают предметное стекло к покровному.

3. Препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Капля должна свободно свисать в центре лунки, не касаясь краев или дна. В результате образовалась герметично закрытая камера, в которой капля долго не высыхает.

Методика приготовления препарата "раздавленная" капля для изучения подвижности микроорганизмов.

1. На середину чистого обезжиренного стекла стерильной пастеровской пипеткой наносят 1-2 капли исследуемой культуры.

2. Осторожно покрывают каплю покровным стеклом, накладывая его пинцетом так, чтобы в жидкости не образовались пузырьки воздуха.

Материал необходимо брать в таком количестве, чтобы капля заполнила все пространство между стеклами и не выступала за края покровного стекла.