Хід роботи.

1. Поверхня ламінару, штативи, пробірки, мікроскоп обробити ультрафіолетом і 96 % спиртом. Руки протерти спиртом. Препарувальні голки, пінцети, скальпелі помістити в 96 % спирт і перед кожною маніпуляцією обпалювати на полум'ї спиртівки.

2. Проростки (2 см) відокремити від бульб і помістити в чашки Петрі із стерилизуючими розчинами: в діацид на 3-5 хвилин, в спирт на 1-2 хвилини.

3. Проростки промити 3 рази стерильною дистильованою водою і перенести в стерильні чашки Петрі.

4. Тонкою препарувальною голкою у проростків видалити усе листя, послідовно оголяючи верхівкові і бічні меристеми з примордіями.

5. Меристему з 1-2 примордіями відокремити від проростків, при цьому розмір експланту має бути не більше 100-250 мкм.

6. Експланти перенести в пробірку на поверхню поживного середовища.

7. Пробірки закрити пробками, помістити в штатив і перенести в культуральную кімнату.

8. Результати замалювати через 2-4 тижні, зробити висновки.

Робота 2. ПРОЛІФЕРАЦІЯ ПАГОНІВ І МІКРОЖИВЛЕННЯ

Стерильних проростків. Теоретичні відомості

Мікроклональне розмноження пробірних рослин здійснюють за допомогою живлення. Таке розмноження засноване на пригніченні апікального домінування і активації пазушних меристем при видаленні верхівки пагони. З пазушних бруньок на поживних середовищах утворюються пагони. Рослини, що сформували 5-6 листочків, в стерильних умовах виймають з пробірок і розрізають на частини (відрізок стебла з листом і пазушною брунькою). Живці висаджують на глибину меживузля в поживні середовища або без гормонів, або з додаванням ауксинів.

Живці культивують в тих же умовах, що і меристеми: при температурі 24-25^оС вдень і 19-20^оС вночі, освітленості 5-6 кLx і тривалість фотоперіоду 16 годин.

Ріст стебла і коріння починається на 3-4 день після посадки на поживне середовище, а повністю рослини формуються через 12-15 днів.

Кожне наступне живцювання проводять через 14-20 днів. З однієї рослини можна отримати 5-8 живців, а через 2-3 місяці - 3-5 тис. живців.

Нижню частину рослини використовують для ІФА. Рослини, заражені вірусами, бракують, а здорові дають початок мериклонам (меристематичним клонам).

Якщо бруньки або живці висадити на поживні середовища з високим вмістом цитокінінів, то утворюється конгломерат бруньок і пагонів. Отримані пагони легко відділяються один від одного, їх можна або укоренити, або використовувати для подальшого мікроживцювання.

Матеріали і устаткування. Ламінар-бокс, пробірки з проростками, пробірки з поживним середовищем, скальпелі, препарувальні голки, спиртівка, флакон з 96 % спиртом.

Хід роботи.

1. Підготувати ламінар-бокс і інструменти до роботи.

2. У ламінарі витягнути стерильні проростки з пробірок.

3. Пагони розділити на мікроживців (меживузля з брунькою) і посадити в поживне середовище на глибину меживузля.

4. Пробірку закрити пробкою, помістити в штатив і перенести в культуральну кімнату.

5. Результати замалювати через 2-4 тижні. Зробити висновки про міру проліферації бруньок різних сільськогосподарських культур.

Робота 3. ІНДУКЦІЯ КОРЕНЕУТВОРЕННЯ ПРИ