Добавил:

Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.

Вуз:

Национальный университет Львовская политехника

Предмет:

[НЕСОРТИРОВАННОЕ]

Файл:

мет ТБАР.doc

Скачиваний:

Добавлен:

12.02.2016

Размер:

575.49 Кб

Скачать

☆

<<< < Предыдущая 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 1819 / 2019 20 > Следующая >>>

Теоретичні відомості

Здатність калусів до морфогенезу визначається балансом фітогормонів як в поживних середовищах, так і в самих клітинах (ендогенні фітогормони). Для отримання рослин-регенерантів використовують середовища, які містять кінетин - 0,1-0,3 мг/л, ГК - 4 мг/л, 6-БАП - 0,5-1,5 мг/л, ІОК - 0,5-1,5 мг/л. Калуси культивують при 16 годинному фотоперіоді і інтенсивністю освітлення 2-3 кLх.

Морфогений калус має щільну консистенцію, горбисту поверхню, молочно-білий, жовтуватий і зеленуватий колір.

Поверхневі шари морфогенного калусу складаються з меристематичних, багатих цитоплазмою клітин, що мають заповнені крохмалем пластиди і добре розвинені мітохондрії. Центральна частина калусу представлена великими вакуолізованими клітинами з пікнотичними ядрами, які чергуються з меристематичними ділянками.

Для індукції паросткоутворення, калуси переносять на середовища для регенерації: МС + кінетин - 1-2 мг/л, 6-БАП - 3-6 мг/л, аденін - 1-2 мг/л, ГК - 1-2 мг/л, ферулова кислота - 0,5-0,7 мг/л, ІОК - 0,2-0,4 мг/л, НОК - 0,2-0,4 мг/л, ІМК - 0,2-0,4 мг/л, 2,4-Д - 0,1-0,3 мг/л.

Через 1,5-2 місяці культивування морфогених калусів на 16-ти годинному фотоперіоді при освітленості 3 кLх починається проліферація бруньок і пагонів. Морфогенні калуси страхують кожні 4-6 тижнів.

Пагони-регенеранти, отримані з пилкових калусів, неоднорідні за морфологічними ознаками. Це обумовлено гетерогенністю калусів. Тому необхідно проводити цитологічне вивчення і калусів і рослин-регенерантів.

Матеріали і устаткування. Ламінар-бокс, спиртівки, флакони з 96 % спиртом, пробірки з пилковими калусами, пробірки з середовищами для отримання морфогенного каллусу, пробірки з середовищами для регенерації, препарувальні голки, пінцети.

Хід роботи.

1. В умовах ламінар-боксу витягнути калус з пробірки і перенести на стерильну поверхню. Стерильною препарувальною голкою виділити зону морфогенного калусу (білі дрібні клітини, калус середньої щільності).

2. Стерильною препарувальною голкою перенести шматочок (5-6 мм) морфогенного каллусу в пробірку з середовищем для регенерації, закрити пробірку стерильною пробкою.

3. Перенести штативи з пробірками у світлову культуральну кімнату з температурою 25 + 2^о С, вологістю 70 %, освітленістю 4 кLх.

4. Через 4-6 тижнів замалювати результати роботи.

5. Пагони перенести в пробірки з середовищами для проліферації пагонів: МС +1-2 мг/л 6-БАП, 1 мг/л НОК.

6. Перенести пагони на середовища для індукції коренеутворення: МС без гормонів, МС +1-2 мг/л ІМК + 1мг/л ГК і помістити на 20 днів в темряву.

Контрольні питання до теми VI.

1. Для чого використовуються гаплоїди в селекції і генетиці?

2. Як отримати морфогенний калус з пильників?

3. Які основні способи отримання гаплоїдних і дигаплоїдних рослин-регенерантів?

Додаток

Таблиця 1.

Приготування маточних розчинів для середовища Мурасіге-Скуга.

№ п.п.

Компонент середовища

Кількість речовини

Маточний розчин макросолей (г на 1 л маточного розчину)

KNO₃

NH₄NО₃

KH₂PO₄

MgSO₄ ^. 7H₂O

або MgSO₄ безводний

3,4

7,4

3,6

CaCl₂ ^. 2H₂O

або CaCl₂ безводний

8,8

6,65

Маточний розчин мікросолей (мг на 100 мл маточного розчину)

10.

11.

12.

Na₂MoO₄ ^. 2H₂O

CuSO₄ ^. 5H₂O

H₃BO₃

MnSO₄ ^. 5H₂O

або MnSO₄ ^. 4H₂O

ZnSO₄ ^. 7H₂O

CoCl₂ ^. 6H₂O

2,5

620

2410

2230

860

2,5

13.

FeSO₄

Na₂ ЕДТА

557

745

Таблиця 2

Середовище Мурасіге-Скуга (М-С) для клітинних і тканинних культур

Компоненти поживного середовища

Маточний розчин макросолей

Маточний розчин мікросолей

Fe-хеллат

CaCl₂

Тіамін-HCl

Піридоксин-HCl

Нікотинова кислота

Мезоінозит

Гліцин

Сахароза

50 мл/л

1 мл/л

5 мл/л

50 мл/л

0,1 мг/л

0,5 мг/л

100 мг/л

2 мг/л

30 г/л

рН 5,6-5,8

Таблиця 3

Модифіковане поживне середовище Мурасіге-Скуга для культивування апікальних меристем картоплі

Компоненти поживного середовища

Маточний розчин макросолей

Маточний розчин мікросолей

Fe-хеллат

CaCl₂

Тіамін-HCl

Піридоксин-HCl

Вітамін В₁₂

Нікотинова кислота

Фолієва кислота

Мезоінозит

Гідролізат казеїну

Аденін

Пантотенат Са

Рибофлавін

Біотин

Активоване вугілля

ГК

Кінетин

Сахароза

Глюкоза

Агар-агар

50 мл/л

1 мл/л

5 мл/л

50 мл/л

1 мг/л

0,015 мг/л

2 мг/л

0,5 мг/л

100 мг/л

1 г/л

40 мг/л

10 мг/л

0,5 мг/л

1 мг/л

10 г/л

2 мг/л

0,5 мг/л

20 г/л

7 г/л

рН 5,7-5,8

Таблиця 4

Модифіковане поживне середовище Мурасіге-Скуга для мікророзмноження картоплі черенкуванням пагонів

Компоненти поживного середовища

Маточний розчин макросолей

Маточний розчин мікросолей

Fe-хеллат

CaCl₂

Тіамін-HCl

Піридоксин-HCl

Нікотинова кислота

Аденін

Кінетин

Гіббереллова кислота

Пантотенат Са

Активоване вугілля

Сахароза

Агар-агар

50 мл/л

1 мл/л

5 мл/л

50 мл/л

1 мг/л

2 мг/л

40 мг/л

0,5 мг/л

2 мг/л

10 мг/л

10 г/л

30 г/л

7 г/л

рН 5,8

Таблиця 5

Приготування маточних розчинів для середовища Гамборга-Евелега.

№п.п.	Компонент середовища	Кількість речовини
	Маточний розчин макросолей (г на 1 л маточного розчину)
1. 2. 3. 4.	KNO₃ (NH₄)₂SO₄ MgSO₄ ^. 7H₂O NaH₂PO₄ ^. H₂O	60 2,68 10,0 3,0
5.	CaCl₂ ^. 2H₂O	3,0
	Маточний розчин мікросолей (мг на 100 мл маточного розчину)
6. 7. 8. 9. 10. 11.	Na₂MoO₄ ^. 2H₂O CuSO₄ ^. 5H₂O H₃BO₃ MnSO₄ ^. H₂O ZnSO₄ ^. 7H₂O CoCl₂ ^. 6H₂O	25 7,5 300 1000 200 2,5
12.	FeSO₄ Na₂ ЕДТА	557 745

Таблица 6

Середовище Гамборга-Евелега

Компоненти поживного середовища

Маточний розчин макросолей

Маточний розчин мікросолей

Fe-хеллат

CaCl₂

Тіамін-HCl

Піридоксин-HCl

Нікотинова кислота

Мезоінозит

2,4-Д

Сахароза

50 мл/л

1 мл/л

5 мл/л

50 мл/л

10 мг/л

1 мг/л

100 мг/л

2 мг/л

20 г/л

рН 5,8

Таблиця 7

Модифіковане поживне середовище Мурасіге-Скуга для бульбоутворення у картоплі.

Компоненти поживного середовища

Маточний розчин макросолей

Маточний розчин мікросолей

Fe-хеллат

CaCl₂

Тіамін-HCl

Піридоксин-HCl

Нікотинова кислота

Аскорбінова кислота

Кінетин

Сахароза

Агар-агар

50 мл/л

1 мл/л

5 мл/л

50 мл/л

1 мг/л

0,5 мг/л

1 мг/л

0,5 мг/л

50 г/л

7 г/л

рН 5,8-6,0

Таблиця 8

Приготування маточних розчинів для середовища Блейдза.

№п.п.	Компонент середовища	Кількість речовини
	Маточний розчин макросолей (г на 1 л маточного розчину)
1. 2. 3. 4. 5.	KNO₃ KCl KH₂PO₄ NH₄NO₃ MgSO₄ ^. 7H₂O або MgSO₄ безводний	20 1,3 6 20 1,44 0,7
6.	Ca(NO₃)₂ ^. 4H₂O	10,28
	Маточний розчин мікросолей (мг на 100 мл маточного розчину)
7. 8. 9. 10.	H₃BO₃ MnSO₄ ^. H₂O або MnSO₄ ^. 5H₂O ZnSO₄ ^. 7H₂O KJ	160 440 627 150 80
11.	FeSO₄ Na₂ ЕДТА	557 745

Таблица 9

Середовище Блейдза для калусогенезу.

Компоненти поживного середовища

Маточний розчин макросолей

Маточний розчин мікросолей

Fe-хеллат

CaNO₃

Тіамін-HCl

Піридоксин-HCl

Нікотинова кислота

Аскорбінова кислота

Мезоінозит

2,4-Д

Сахароза

Агар-агар

50 мл/л

1 мл/л

5 мл/л

50 мл/л

0,5 мг/л

1 мг/л

0,1 г/л

2 мг/л

20 г/л

7 г/л

рН 6,0

Таблица 10

Середовище Блейдза для соматичного ебріогенезу.

Компоненти поживного середовища

Маточний розчин макросолей

Маточний розчин мікросолей

Fe-хеллат

CaNO₃

Тіамін-HCl

Піридоксин-HCl

Нікотинова кислота

Аскорбінова кислота

Мезоінозит

ІОК

Кінетин

АБК

Сахароза

Агар-агар

50 мл/л

1 мл/л

2,5 мл/л

50 мл/л

0,5 мг/л

1 мг/л

0,1 г/л

0,2 мг/л

0,05 мг/л

20 г/л

7 г/л

рН 6,0

<<< < Предыдущая 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 1819 / 2019 20 > Следующая >>>

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

#
01.05.2025294.4 Кб0Менеджмент_Лабораторні.doc
#
01.05.2025349.18 Кб0Менеджмент_Лабораторні.doc
#
01.05.2025346.62 Кб0Менеджмент_Лабораторні.doc
#
04.05.2019200.75 Кб1Мережі.docx
#
01.05.2025450.56 Кб0Мерці.doc
#
12.02.2016575.49 Кб7мет ТБАР.doc
#
24.11.2019236.03 Кб1мет. вказ..doc
#
01.05.2025304.13 Кб0Мет. вказівки.(прогнозування).doc
#
01.04.2025431.62 Кб0Мет.вказ.ДП-Н економісти.doc
#
27.11.2019588.29 Кб1Мет_наук_досл.doc
#
18.08.2019109.57 Кб1МЕТА І ЗНАЧЕННЯ КУРСОВОЇ РОБОТИ.doc