Хід роботи.

1. Стерильним пінцетом перекласти калуси на стерильну поверхню столу ламінар-бокса, розділити на шматочки 5х5 мм. і помістити в колби з поживними середовищами, що містять різні набори фітогормонів.

2. Колби перенести в культуральну кімнату з температурою 25 + 2^оС, вологістю повітря 70 % і інтенсивністю освітлення 5кLх.

4. Результати експерименту замалювати через 2-4-6-8 тижнів.

Робота 2. Індукція ділення і росту клітин розтягуванням під дією ауксину і гібереліну Теоретичні відомості

У рослині фітогормони знаходяться в тісній взаємодії один з одним: ІОК індукує синтез етилену і цитокінінів, ГК збільшує вміст ІОК, цитокініни посилюють синтез МОК, але знижують вміст вільною АБК, етилен гальмує транспорт ІОК і збільшує вміст АБК.

У культурі тканини фітогормони, додані в різних пропорціях, регулюють синтез ендогенних гормонів рослин, що проявляється в різноманітних морфогенетичних реакціях клітин і тканин.

У 1955 р. Скуг і Міллер запропонували гіпотезу гормональної регуляції в культурі клітин і тканин, яка зараз відома, як правило Скуга-Міллера: якщо концентрація ауксинів і цитокінінів в поживному середовищі відносно рівні або концентрація ауксинів трохи перевершує концентрацію цитокінінів, тоді утворюється калус; якщо концентрація ауксинів значно перевершує концентрацію цитокінінів, то формується коріння; якщо концентрація ауксинів значно менше концентрації цитокінінів, то утворюються бруньки, пагони.

Фітогормони здатні змінювати проникність клітинних мембран. Під дією ауксинів і гіберелінів посилюється викид протонів з клітини, що призводить до підкислення клітинної стінки і послаблення зв'язків між целюлозним волокном в результаті часткового кислотного гідролізу пектинових речовин. Тому клітинна стінка стає еластичнішою і під дією тургорного тиску вакуолі клітина набуває здатність до розтягування.

Матеріали і устаткування. Насіння пшениці і тритікале, колби з дистильованою водою, 6 % хлорамін, чашки Петрі з розчинами гормонів, стерильні пінцети, спиртівки, 96% спирт, ламінар-бокс.

Хід роботи.

1. Відібрати 30 шт здорового насіння пшениці або тритикале.

2. Насіння простерилізувати в розчині хлораміну протягом 5 хвилин.

3. Промити насіння автоклавованою водою 3 рази.

4. Стерильним пінцетом помістити насіння в чашки Петрі з дистильованою водою, розчином 2,4-Д (5-10 мг/л), розчином гіберелової кислоти (2-4 мг/л).

5. Закрити чашки Петрі і помістити в термостат при температурі 25 + 2^оС і вологості повітря 70 %

6. Результати досліду замалювати через 2-4 тижні.

Контрольні питання до теми V.

1. Що таке фітогормони і які процеси в рослинних клітинах і тканинах вони стимулюють?

2. Які групи фітогормонів стимулюють і інгібірують ріст та розвиток рослин?

3. Як здійснюється гормональна регуляція в культурі клітин і тканин?

4. Яка хімічна природа фітогормонів, і в яких органах рослини вони синтезуються?

5. Яким чином гормональна система впливає на генетичний апарат клітини?

Тема VI. Культура гаплоїдних клітин.

Робота 1. Отримання калусів з пильників вишні