Хід роботи.

1. Листя тютюну помістити в стерилізуючий розчин на 5 хв, потім промити стерильною дистильованою водою 3 рази.

2. Стерильним скальпелем вирізати серединну жилку листа з ділянкою паренхіми : завдовжки 1,5-2 см, шириною 1 см.

3. Помістити експланти на поживні середовища (перед кожною маніпуляцією інструменти обробляти спиртом і обпалюють на полум'ї спиртівки).

4. Чашки Петрі з експлантами перенести в термостат для індукцій калусогенезу при температурі 25 + 2^о С.

5. Результати замалювати через 2-4 тижні.

Робота 2. ОТРИМАННЯ КАЛУСІВ З НЕЗРІЛИХ ЗАРОДКІВ І

Вузлів кущіння пшениці Теоретичні відомості

Калуси з різних органів пшениці на штучних поживних середовищах уперше були отримані в 1968 році. Їх можна використовувати для вивчення солестійкості, стійкості до температурного стресу, отримання суспензій і протопластів.

Для індукції калусогенезу зазвичай використовують стерильні пробірні рослини, вирощені із зародків на середовищах без гормонів.

Рослини для отримання калусів можна виростити в теплиці. Для цього набрякле насіння поміщають на 5 тижнів в холодну камеру на яровизацію при 2^оС, проростки висаджують у вегетаційні посудини і вирощують до досягнення молочної стиглості. Незрілі зародки виділяють і переносять на поживні середовища.

Матеріали і устаткування. Ламінар-бокс, пробірки з поживним середовищем, пробірки із стерильними рослинами, колоси пшениці у стадії молочної стиглості, інструменти: препарувальні голки, пінцети, скальпелі, стерильний папір, 6% розчин хлораміну, стерильна дистильована вода, спиртівки, флакони з 96 % спиртом.

Хід роботи.

1. Незрілі зернівки помістити в стерилізуючий розчин на 5 хвилин.

2. Промити 3 рази стерильною дистильованою водою.

3. Простерилізовані зернівки помістити на стерильні паперові місточки.

4. Препарувальною голкою вичленувати зародки і перенести в пробірки з поживними середовищами.

5. Пробірки із зародками закрити пробками і поставити в штатив.

6. Пробірні рослини пшениці викласти на стерильні паперові матрацики і розрізати на невеликі частини по 5-10 мм, виділити меживузля з ділянками листкової піхви.

7. Перенести експланти на поживні середовища МС+2,4Д в концентрації 4мг/л.

8. Замалювати калуси через 2-4 тижні, зробити висновки про морфологію калусів, розглянути калусні клітини під мікроскопом.

Робота 3. ОТРИМАННЯ КАЛУСІВ З КОРІНЦІВ КВАСОЛІ.

Теоретичні відомості

Калуси можна отримувати з різних частин рослини, у тому числі з кінчиків коріння. Утворення калусу відбувається в ділянці первинних і вторинних меристем. Процес калусоутворення залежить від розміру експланту. Оптимальна величина експланту 5-10 мм² і маса 20-100 мг.

Багато тканин мають фізіологічну полярність. Тому калус краще утворюється на тій стороні експланту, яка ближче до апікальних меристемам кореня. Кінчики коріння легко утворюють калус, якщо вони поміщені на середовище горизонтально, тоді як сегменти стебла краще формують калус, якщо їх помістити вертикально.

Для культивування на поживних середовищах краще використовувати стерильні корінці, отримані при пророщуванні насіння в стерильних умовах.

Матеріали і устаткування. Насіння квасолі, 6% розчин хлораміну, стерильні інструменти: пінцети, скальпелі, препарувальні голки, чашки Петрі з поживними середовищами для індукції калусогенезу, стерильні чашки Петрі, флакони із спиртом і стерильною дистильованою водою.