Теоретичні відомості

У разі зараження посадкового матеріалу вірусами застосовують термотерапію. Заздалегідь бульби без бактерійних і грибкових інфекцій тестують ІФА. Потім їх розміщують в кюветах із стерильним піском і пророщують 1-2 тижні при температурі 28-30^оС, 4 тижні при температурі 37-38^оС і вологості повітря 70-80 %. Двічі в день пісок зволожують, через 7-10 днів проводять підживлення розчином Кнопа і мікроелементів по пропису Мурасіге-Скуга : 5 мл маточного розчину на 1 л розчину Кнопа. Бульби жаротривких сортів можна відразу вирощувати при температурі 37-38^оС і вологості повітря 70 %.

Режим теплової обробки для кожного сорту підбирають експериментально. У випадках зараження рослин мозаїчними, веретеновидними, нитчастими, паличкоподібними вірусами термічна обробка малоефективна. Тому додатково використовують біотехнологічні методи: метод апікальних меристем. Для цього перед термообробкою верхівки рослин картоплі зрізають і поміщають на 5 годин в розчин гетероауксину (50 мг/л). Вкорінені проростки поміщають в культуральні камери або кімнату з температурою повітря 37^оС, грунти - 30-32^оС, з фотоперіодом 16 годин на 4-6 тижнів.

Термообробку зазвичай проводять восени і зимою. Навесні з рослин вичленовують пазушні бруньки від 0,3 до 1 мм і висаджують на поживні середовища (МС без гормонів, pH 5,7).

Матеріали і устаткування. Бульби картоплі, кювети з піском, флакони з водою, кювети з пророщеними рослинами, що пройшли термотерапію, ламінар-бокс, бінокулярний мікроскоп МБС-9 або МБС-10, стерильні скальпелі, препарувальні голки, флакони з 96 % спиртом, хлораміном, спиртівки, пробірки з поживними середовищами.

Хід роботи.

1. Здорові бульби картоплі ретельно промити проточною водою.

2. Бульби обробити стерилізуючим розчином (спирт, хлорамін), промити проавтоклавованою водою.

3. Вирізувати очка з частиною паренхіми (1,5 г 1,5 см) і помістити в кювети для пророщування і термотерапії.

4. Проростки, що пройшли термотерапію, помістити в 6 % розчин хлораміну на 5 хвилин, промити стерильною дистильованою водою.

5. У ламінар-боксі під мікроскопом вичленувати апікальні меристеми і помістити їх в пробірки з поживними середовищами.

6. Увесь рослинний матеріал перенести в культуральну кімнату.

7. Результати замалювати через 2-4-6-8 тижнів.

Робота 7. ОТРИМАННЯ БЕЗВІРУСНОГО ПОСАДКОВОГО МАТЕРІАЛУ МЕТОДОМ ХІМІОТЕРАПІЇ У ПОЄДНАННІ З МЕТОДОМ

Апікальних меристем. Теоретичні відомості

Для хіміотерапії використовують спеціальні речовини-інгібітори вірусів : ферменти, що впливають на нуклеїнові кислоти (РНК-ази). Безпосередню обробку бульб ферментом можна проводити методом інфільтрації у вакуумній камері протягом 20 хвилин, що призводить до великої витрати речовини. Тому ефективніше додавати РНК-ази в поживні середовища для культивування апексів.

РНК-аза стимулює зростання і розвиток рослин з апексів та інгібує розвиток вірусів. В результаті застосування такої технології вирощування на 10-35 % підвищується приживання меристем на поживних середовищах, на 30-40 % більше утворюється рослин-регенерантів.

Матеріали і устаткування. Пробірки з поживними середовищами, ламінар-бокс, фільтри Зейтца, стерильна бідистильована вода, флакони з 96 % спиртом, спиртівки, мікроскопи МБС-9 або МБС-10, стерильні інструменти (скальпелі, препарувальні голки, пінцети), розчин РНК-ази (0,01 н), хімічний посуд (колби на 50-100 мл, склянки на 50-100 мл, мірні циліндри), проростки картоплі.