5. Авторадіографія.

Мічені атоми широко використовуються в цитології для вивчення хімічних процесів в клітині. Наприклад: для вивчення біосинтезу білка і нуклеїнових кислот, проникності оболонки, локалізації речовин в клітині і т.д.

Для цього використовуються з'єднання, в які введена радіоактивна мітка. У молекулі міченої речовини, наприклад, амінокислоти або вуглеводу, один з атомів заміщається атомом тієї ж речовини, але радіоактивного, тобто радіоактивним ізотопом. Завдяки тому, що ці атоми поводяться в організмі також, як і що не володіють радіоактивністю, але при цьому випускають радіоактивні промені, їх можна легко виявити, застосовуючи фотографічний метод.

У цитології використовуються ізотопи водню – тритій 3Н, ізотоп вуглецю – 14С, фосфору 32Р, сірі 35S, йоду і ін., які входять до складу органічних сполук. Вводять ізотопи в організм тварин з їжею, у вигляді ін'єкцій або ж в поживне середовище при культивуванні тканин. Вони включаються в обмін речовин. Доза встановлюється досвідченим шляхом і не повинна змінювати нормальний обмін речовин. Через різні проміжки часу після введення мічених речовин фіксуються шматочки тканин і органів (суміш Каріуа або спирт-оцтова кислота 3:1). З фіксованого матеріалу готують парафінові зрізи, на поверхню яких після видалення парафіну наносять тонкий шар чутливої і фотографічної емульсії. Ця ядерна емульсія характеризується дуже дрібним розміром зерен, їх однорідністю і набагато більшим насиченням желатину, чим звичайна фотографічна емульсія.

Препарати з нанесеною на них фотоемульсією експонується в темноті при температурі 4 градуси, а потім промиваються і закріплюються також, як і звичайні фотографії.

Під час експозиції препаратів вивчення радіоактивних ізотопів, які включилися в ті або інші структури клітини, залишає слід від пробігу радіоакт. частинок в шарі фотоемульсії. В процесі прояву зерна, які опинилися в місцях пробігу радіоакт. частинок, відновлюються проявником до металевого срібла. Останні мають чорний колір і виявляються після прояву у вигляді зерен, які знаходяться в шарі фотоемульсії над тими клітинами і структурами, в які включився радіоактивний ізотоп. Такі препарати називають радиіактографами. Після прояву і закріплення радиоактографи добре промивають у воді, а потім офарблюють одним з гістологічних барвників.

Контрольні питання

1. Методи дослідження, використовувані в сучасній гістології, цитології і ембріології.

2. Вітальні методи дослідження. Культивування in vivo і in vitro.

3. Основні принципи приготування препаратів для світлової мікроскопії.

4. Етапи приготування постійного гістологічного препарату.

5. Види мікропрепаратів.

6. Загальна характеристика і класифікація гістологічних барвників.

7. Гістохімічні методи дослідження.

8. Суть методу імпрегнації, декальцинації, авторадіографії.

Питання, винесені на СРС

1. Кількісні методи дослідження.

2. Поняття про імунофлюоресцентні, цитоспектрофотометричні, ауторадіографічні методи і їх використання.

3. Методи дослідження в гістології. Технологія виготовлення гістологічних препаратів

Основна література

1. Луцик О.Д. Іванова А.Й., Кабак К.С. Гістологія людини. Львів. Мир. 1992. С.5-11..

2. Гістологія / Під ред. Ю.И.Афанасьева, Н.А.Юриної. М.: Медицина, 2001. С.16-23.

3. Гістологія / Під ред. Ю.И.Афанасьєва, Н.А.Юриної. М.: Медицина, 1989.С. 9-14.

Додаткова література

4. Лабораторні заняття по курсу гістології, цитології і ембріології / Під. Ред. Ю.И.Афанасьева. М.: Вища школа. 1990. С. 15-22.

5. Напханюк В.К., Сервецкий К.Л. Практикум по цитології, загальній гістології і ембріології. Навчальний посібник. Одеса, 1999. С. 16-23.

6. Практикум по гістології, цитології і ембріології / Під. Ред. Н.А.Юриної, А.И. Радостиної. М.: Вид-во УДН. 1989. С. 5-11.

7. Методичні рекомендації кафедри.

8. Напханюк В.К. Основи цитології, загальної гістології і ембріології (курс лекцій). Одесса.1999. С.14-18.