II Посмертні

Посмертні барвники діляться на 2 види: 1. Загальні 2. Спеціальні

1. Загальні барвники у свою чергу ділять на а) ядерні (основні) б) цитоплазматичні (кислі)

Загальні ядерні барвники фарбують ядра будь-яких клітин в свій основний колір. Наприклад: 1. Гематоксилін – забарвлює ядра у фіолетово-чорнильний колір. 2. Азур – фарбує ядра в синій колір. Сафранін – забарвлює ядра в червоний колір.

Оскільки хімічна природа ядра кисла (ДНК, РНК), ядерний барвник має властивості лугу. У зв'язку з цим, здатність якої-небудь структури забарвлюватися основними барвниками називається базофілія (basis – основа (луг) , philia - любов), а сама структура – базофільною. Висока концентрація РНК в цитоплазмі може зумовити її базофілію.

Загальні барвники цитоплазми фарбують цитоплазму будь-яких клітин в свій основний колір.

1. Еозин – фарбує цитоплазму в оранжево-рожевий колір.

2. Водна синька – в блакитний колір

3. Фуксин кислий – інтенсивно-рожевий колір

Більшість барвників цитоплазми є кислими, оскільки гіалоплазма диференційованих клітин насичена основними білками. Властивість якої-небудь структури забарвлюватися кислими барвниками називається ацидофілія або оксифілия (acidicum – кислота, philia - любов), а сама структура – ацидофільною.

2. Спеціальні барвники зв'язуються вибірково з певною клітинною або позаклітинною структурою, дозволяючи відрізнитки її або виділити від схожих по будові структур. Найчастіше спеціальні барвники застосовують в тих випадках, коли досліджувана структура загальними барвниками не забарвлюється. Наприклад, включення жиру і включення слизу при загальному забарвленні залишаються безбарвними. Використання спеціального барвника муцикарміну дозволяє офарбувати слиз в червоний колір, а осмієва кислота забарвить жир в чорний. Інші приклади:

Судан III – жир – оранжево-червоний колір

Пікринова кислота – м'язова тканина – жовтий колір

Кармін Беста – глікоген – червоний колір

Резорцин – фуксин - еластичні волокна – синьо-фіолетовий колір

Орсеїн – еластичні волокна – червоно-бурий колір

Спеціальні методи обробки тканин.

1. Декальцинація. Застосовується по відношенню до щільних тканин (кістка, зуб). Мета – витягання солей кальцію. Внаслідок цього об'єкт стає м'яким і придатним до різання. Декальцинація завжди проводиться після фіксації. Об'єкт поміщають в 2-10% розчин азотної кислоти на декілька днів.

2. Імпрегнація. Метод відкладення солей важких металів на яких-небудь структурах з метою їх виявлення. Застосовують солі срібла, золото. Цей метод застосовується для виявлення нервових волокон, аргірофиіьних волокон (ретикулярних, преколлагенових), клітинних меж, комплексу Гольджі.

3. Гістохімічні методи дослідження проводять з метою виявлення зміст і локалізації хімічних речовин, що входять до складу тканин, постановкою хімічної реакції безпосередньо на зрізі тканини. В результаті реакції взаємодії шуканих груп або елементів досліджуваної речовини з реактивом виходить специфічне забарвлення. Користуючись спеціальними реактивами, можна виявити амінокислотний склад білків, виявити наявність нуклеїнових кислот (ДНК, РНК), визначити наявність мікроелементів, ферментів і т.д. Наприклад: для виявлення тривалентного заліза тканину обробляють свіжо приготованою рівною сумішшю 2% фероціаніду калія (жовта кров'яна сіль) і 2% соляною кислотою.

Ділянки, в яких локалізується тривалентне залізо, забарвлюються в синій колір (берлінська блакить).

Глікозаміноглікани (ГАГ) дають реакцію метахромазії – зміна основного кольору барвника при взаємодії його з шуканою речовиною. При фарбуванні толуідиновим синім, тионіном (барвники синього кольору) ГАГ дають вишнево-червоне забарвлення. ДНК виявляється реакцією Фельгена, РНК – реакцією Браше, вуглеводні з'єднання – ШИК-РЕАКЦИЕЮ і т.д.

Цитохімія - поєднання гістохімічних методів з методом електронної мікроскопії – дозволяє вивчати локалізацію хімічних речовин на субклітинному і молекулярному рівнях.

4. Імуноцитохімічний (імунофлюоресцентний) метод – заснований на реакції антиген-антитіло. Кожна клітина організму має специфічний антигенний склад. Антитіла володіють високою специфічністю відносно антигенів, що дозволяє використовувати їх для виявлення специфічних білків. Антитіла забарвлюються флюоресцируючими барвниками і після зв’язування їх з певною структурою, препарат вивчають в люмінесцентному мікроскопі.

Антитіла можна використовувати для вивчення антигенних структур на ультрамікроскопічному рівні. Для цього антитіла мітять електронний-щільними частинками, наприклад колоїдним золотом.