5. Авторадіографія.

Мічені атоми широко використовуються в цитології для вивчення хімічних процесів в клітині. Наприклад: для вивчення біосинтезу білка і нуклеїнових кислот, проникності оболонки, локалізації речовин в клітині і т.д.

Для цього використовуються з'єднання, в які введена радіоактивна мітка. У молекулі міченої речовини, наприклад, амінокислоти або вуглеводу, один з атомів заміщається атомом тієї ж речовини, але радіоактивного, тобто радіоактивним ізотопом. Завдяки тому, що ці атоми поводяться в організмі також, як і що не володіють радіоактивністю, але при цьому випускають радіоактивні промені, їх можна легко виявити, застосовуючи фотографічний метод.

У цитології використовуються ізотопи водню – тритій 3Н, ізотоп вуглецю – 14С, фосфору 32Р, сірі 35S, йоду і ін., які входять до складу органічних сполук. Вводять ізотопи в організм тварин з їжею, у вигляді ін'єкцій або ж в поживне середовище при культивуванні тканин. Вони включаються в обмін речовин. Доза встановлюється досвідченим шляхом і не повинна змінювати нормальний обмін речовин. Через різні проміжки часу після введення мічених речовин фіксуються шматочки тканин і органів (суміш Каріуа або спирт-оцтова кислота 3:1). З фіксованого матеріалу готують парафінові зрізи, на поверхню яких після видалення парафіну наносять тонкий шар чутливої і фотографічної емульсії. Ця ядерна емульсія характеризується дуже дрібним розміром зерен, їх однорідністю і набагато більшим насиченням желатину, чим звичайна фотографічна емульсія.

Препарати з нанесеною на них фотоемульсією експонується в темноті при температурі 4 градуси, а потім промиваються і закріплюються також, як і звичайні фотографії.

Під час експозиції препаратів вивчення радіоактивних ізотопів, які включилися в ті або інші структури клітини, залишає слід від пробігу радіоакт. частинок в шарі фотоемульсії. В процесі прояву зерна, які опинилися в місцях пробігу радіоакт. частинок, відновлюються проявником до металевого срібла. Останні мають чорний колір і виявляються після прояву у вигляді зерен, які знаходяться в шарі фотоемульсії над тими клітинами і структурами, в які включився радіоактивний ізотоп. Такі препарати називають радиіактографами. Після прояву і закріплення радиоактографи добре промивають у воді, а потім офарблюють одним з гістологічних барвників.

Контрольні питання

1. Методи дослідження, використовувані в сучасній гістології, цитології і ембріології.

2. Вітальні методи дослідження. Культивування in vivo і in vitro.

3. Основні принципи приготування препаратів для світлової мікроскопії.

4. Етапи приготування постійного гістологічного препарату.

5. Види мікропрепаратів.

6. Загальна характеристика і класифікація гістологічних барвників.

7. Гістохімічні методи дослідження.

8. Суть методу імпрегнації, декальцинації, авторадіографії.

Питання, винесені на СРС

1. Основні принципи приготування препаратів для електронної мікроскопії.

2. Кількісні методи дослідження.

3. Поняття про імунофлюоресцентні, цитоспектрофотометричні, ауторадіографічні методи і їх використання.

Основна література

1. Луцик О.Д. Іванова А.Й., Кабак К.С. Гістологія людини. Львів. Мир. 1992. С.5-11..

2. Гістологія / Під ред. Ю.И.Афанасьева, Н.А.Юриної. М.: Медицина, 2001. С.16-23.

3. Гістологія / Під ред. Ю.И.Афанасьєва, Н.А.Юриної. М.: Медицина, 1989.С. 9-14.

Додаткова література

4. Лабораторні заняття по курсу гістології, цитології і ембріології / Під. Ред. Ю.И.Афанасьева. М.: Вища школа. 1990. С. 15-22.

5. Напханюк В.К., Сервецкий К.Л. Практикум по цитології, загальній гістології і ембріології. Навчальний посібник. Одеса, 1999. С. 16-23.

6. Практикум по гістології, цитології і ембріології / Під. Ред. Н.А.Юриної, А.И. Радостиної. М.: Вид-во УДН. 1989. С. 5-11.

7. Методичні рекомендації кафедри.

8. Напханюк В.К. Основи цитології, загальної гістології і ембріології (курс лекцій). Одесса.1999. С.14-18.