ОПРЕДЕЛЕНИЕ Келл(Kell) и Челлано(Cellano)

АНТИГЕНОВ ЭРИТРОЦИТОВ С ПРИМЕНЕНИЕМ ID-КАРТ

“Anti-К(KEL1)” и “Anti-k(KEL2)”,

СОДЕРЖАЩИХ ЧЕЛОВЕЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА.

По данным Mollison,частота встречаемости фенотипа Келл в европейской популяции следующая:

KK ------- +0.2%

Kk ------- +8.8%

kk ------- +91.0%

Система Келл(KEL,№ 006 по классификации Международного Общества Трансфузиологов), состоит из известных в настоящее время 22 антигенов, пронумерованных от К1 до К25(обозначения антигенов К8, К9 и К15 сейчас не используются). К-антиген является сильно иммуногенным и следовательно, анти-К антитела

часто выявляются у пациентов с переливаниями и посттрансфузионными осложнениями в анамнезе, а также при гемолитической болезни новорожденных. Анти-к антитела имеют подобные анти-К антителам серологические характеристики, но встречаются значительно реже.

Клиническая значимость анти-К антител определяется более систематическим выявлением Келл-антигена как у донора, так и у реципиента.

ID-карты “Anti-K(KEL1)” и “Anti-k(KEL2)” позволяют выполнить до 6 тестов одновременно.

Используемые материалы: (только для диагностики “in vitro”)

1. ID-карты: “Анти-К(KEL1)” и “Анти-k(KEL2)”,

содержащие по 6 микропробирок с человеческой анти-К

сывороткой или человеческой анти-k сывороткой,

соответственно, в геле.

Консервант: < 0.1% NaN₃.

Условия хранения: при комнатной температуре (18-25^оС), не

хранить вблизи отопительных и вентилирующих источников,

беречь от прямых солнечных лучей.

Срок хранения смотрите на упаковке.

Предостережение: Биологические материалы, из которых приготавливаются настоящие реагенты, предварительно обследуются на наличие Hbs антигена, HCV и HIV(1+2) при помощи лицензированных реагентов. Однако, ни один из известных в настоящее время методов диагностики не дает полной гарантии отсутствия инфекции. Поэтому при работе с препаратами крови необходимо соблюдать осторожность, как с потенциальным источником инфекции.

2. ID-Раствор 1(Бромелин) для приготовления 5% рабочей

суспензии эритроцитов.

3. Образец цельной крови или эритроцитарной массы

( для получения наилучших результатов рекомендуется

использовать свежевзятую кровь).

Во избежание получения ложных результатов не рекомендуется

забирать и хранить кровь для исследований в силиконовых

пробирках!

Техника выполнения исследования:

Не используйте ID-карты с признаками высыхания, пузырями в геле или повреждениями!

1.Выдержать ID-Раствор 1 до достижения им комнатной

температуры.

2.Промаркировать чистую пробирку.

3.Промаркировать соответствующую ID-карту.

4.Приготовить 5% суспензию исследуемых эритроцитов в

ID-Растворе 1, для чего:

• взять промаркированную пробирку

• отдозировать в нее 0.5 мл ID-Раствора 1

• добавить 50 мкл исследуемой цельной крови или 25 мкл эритроцитарной массы

• аккуратно смешать

• инкубировать в течение 10 минут при комнатной температуре

• данная суспензия должна быть использована в течение 15 минут после инкубации

Контроли: в качестве «положительного контроля» используются гетерозиготные по данным антигенам эритроциты, в качестве «отрицательного контроля» – эритроциты, не имеющие таковых.

5.Снять защитную фольгу с промаркированной ID-карты.

6.Добавить в одну микропробирку(на одно исследование) ID-карты

12,5 мкл приготовленной суспензии эритроцитов.

7.Установить данную ID-карту(карты) в ротор ID-центрифуги (с

обязательным уравновешиванием другими ID-картами, можно

неиспользованными).

10.Центрифугировать ID-карту (время и скорость

центрифугирования постоянны и заданы автоматически).

11.Оценить результат исследования:

Интерпретация результатов

А. Принцип:

Положительный результат: Эритроцитарные агглютинаты образуют

красную линию на поверхности геля или распределяются в толще геля.

Отрицательный результат: Эритроциты образуют компактный осадок на дне микропробирки.

Б. Реакции для Келл и Челлано:

Положительные результаты реакции с силой агглютинации от + до ++++ показывают присутствие соответствующего антигена в исследуемом образце.

Отрицательные результаты реакции показывают отсутствие данного антигена.

Примечания:

Перед типированием данных антигенов следует быть уверенными в отсутствии на данных эритроцитах ферментных аутоантител. Если данный образец крови не тестировался на картах “ABO/Rh” или “Rh-subgroups+K”,которые включают в себя контрольные микропробирки, следует выполнить следующее:

1.Взять ID-карту “ctl Negative Control”.

2.Добавить в одну микропробирку данной карты 12,5 мкл

приготовленной суспензии эритроцитов(в ID-Растворе 1).

3.Центрифугировать и считывать результаты.

-“Отрицательный контроль” должен всегда показывать

отрицательный результат.

-Если “отрицательный контроль” положителен, необходимо перед

приготовлением суспензии эритроциты отмыть тёплым(37^оС)

физиологическим раствором или ID-Растворе 2. Затем повторить

контрольный тест.

-Если после этого “контроль” стал отрицательным, можно

типировать данные антигены.

-Если “контроль” остаётся положительным, дальнейшие

исследования следует проводить другими рекомендованными

методиками до выяснения причины этого.

-Результаты определения каждого антигена внести в

соответствующую графу ID-карты (на белом поле внизу под

каждым антигеном).

-Поставить дату и подпись определяющего лица.

Ограничения

- Клетки, которые стали полиагглютинабельными из-за воздействия скрытого антигена, например Т-антигена, могут реагировать со всеми человеческими антисыворотками как “in vivo”, так и “in vitro”. В таких случаях необходимы дальнейшие исследования.

- Бактериальная или иная контаминация используемых материалов может приводить к ложноположительным или ложноотрицательным результатам.

- Остатки фибрина во взвеси эритроцитов могут захватывать неагглютинированные эритроциты и после центрифугирования представлять собой тонкую розовую линию на поверхности геля, тогда как большинство эритроцитов будут локализовываться на дне микропробирки.

- При проведении исследований необходимо использовать только рекомендуемое фирмой оборудование. Данное оборудование должно регулярно проходить проверки в соответствии с процедурами GLP.

- Использование иных, чем ID-Diluents cуспензионных растворов для эритроцитов может приводить к искажению результатов реакции.

- Использование слишком концентрированных или слишком светлых суспензий эритроцитов может приводить к искажению результатов реакций.

Результаты исследования сохраняются в неизмененном виде:

-Сорок восемь(48) часов при комнатной температуре.

-Три недели в холодильнике (при 2-8^оС)

при заклеенной липкой лентой верхней части ID-карты.

-Нижнее поле ID-карты можно отклеить или отрезать и

использовать, как документ в истории болезни или в

картотеке.

Библиография

1. Mollison, P.L., Engelfriet, C.P. and Contreras, M.: Blood Transfusion in Clinical Medicine, 10th ed. 1997; Blackwell Scientific Publications, Oxford.

2. Lapierre, Y., Rigal, D., Adam, J. Et al.: The gel test; A new way to detect red cell antigen-antibody reactions. Transfusion 1990; 30: 109-113.

3. Technical Manual: 11^th ed.1993; American Association of Blood Banks.