Докум по группе крови / Инструкции / Замораживание и размораживание эритроцитов

Замораживание и размораживание эритроцитов

Продукты:

CellFreeze: 40230 / Cell Thaw: 40240 / ID-CellStab: 05740

Введение

Идентификация антител к антигенам эритроцитов часто бывает затруднительным вследствие отсутствия в нужный момент соответствующих эритроцитов.

Поэтому важно подготавливать редкие образцы эритроцитов для длительного хранения.

ДиаМед разработал два специальных буфера для замораживания и размораживания эритроцитов, использование которых позволяет лабораториям создавать свой собственный запас эритроцитов с интересными конфигурациями антигенов.

РЕАГЕНТЫ

• «DiaMed Cell Freeze» - раствор для замораживания, содержит глицин фосфат, раствор NaCl, сахара, глицерин и бычий сывороточный альбумин во флаконах по 100мл. Консерванты: триметоприм и сульфаметоксазол.

• «DiaMed Cell Thaw» - раствор для размораживания, содержит солевой буфер с фосфатом глицина, сахара, бычий сывороточный альбумин во флаконах по 100мл. Консерванты: триметоприм и сульфаметоксазол.

Условия хранения +2 - +4⁰С

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЙ РЕАГЕНТ

- Раствор «ID-CellStab» - см. соответствующую инструкцию.

НЕОБХОДИМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ

Стеклянные флаконы (100мл)

Стеклянные пробирки

Стеклянные флаконы 5 мл с крышками (простерилизованные)

Маркировочные этикетки

Морозильник (-25⁰С - -85⁰С)

ПОЛУЧЕНИЕ ОБРАЗЦОВ

Перед забором образцов специальная подготовка пациентов не требуется. Получают образцы крови путем обычной флеботомии. Предпочтительно забирать кровь в пробирки с цитратом, ЭДТА, гепарином или CPD-A. Для получения более достоверных результатов использовать образцы сразу после получения.

Если требуется использование сыворотки вместо плазмы, сыворотка должна быть очищена путем центрифугирования в течение 10 минут при 1500 g, перед использованием (для удаления остатков фибрина, который может повлиять на результаты реакции).

ПРОЦЕДУРА ПРОВЕДЕНИЯ ТЕСТА

Процедура замораживания

(для долговременного хранения эритроцитов)

1. Отмыть эритроциты три раза растровом ID-CellStab, удалить супернатант после последнего центрифугирования.

2. Добавить буфер DiaMed Cell Freeze в соотношении100мл буфера на 1,2 мл осадка эритроцитов (например, 25 мл буфера : 0,3 мл эритроцитов), хорошо перемешать.

3. Перенести полученную суспензию эритроцитов по 4 мл в 5-мл флаконы, закрыть и перемешать.

4. Промаркировать флаконы.

5. Поместить флаконы в морозильник (-25⁰С - -85⁰С).

Процедура размораживания

1. Достать флакон с требуемым образцом эритроцитов из морозильника. Выдержать в течение 15 минут при комнатной температуре.

2. Аккуратно перемешать размороженную суспензию, отлить 2 мл в отдельную пробирку. Флакон с оставшейся суспензией можно поместить в морозильник для дальнейшего хранения.

3. Добавить в пробирку 2 мл буфера DiaMed Cell Thaw и хорошо перемешать.

4. Центрифугировать пробирку в течение 1 минуты при 1000 G.

5. Удалить супернатант.

6. Снова добавить 2 мл буфера, центрифугировать и удалить супернатант.

7. Добавить 2 мл буфера ID-CellStab, перемешать, центрифугировать пробирку в течение 1 минуты при 1000 G.

8. Если получен чистый супернатант, эритроциты готовы для использования, в противном случае отмойте их еще раз буфером ID-CellStab.

Полученная суспензия эритроцитов стабильна 4 недели при хранении при температуре +2 - +8⁰С.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Если эритроциты предназначены для использования в гелевой системе ДиаМед, после последнего центрифугирования удалите супернатант и приготовьте суспензию в растворе ID-Diluent 2 или ID-CellStab по стандартной методике.

2. Замораживанию подлежат образцы крови сроком хранения не более 3-х дней. При замораживании более старых образцов может иметь место усиленный гемолиз и снижение количества эритроцитов в образце.

ОГРАНИЧЕНИЯ

1. Температура замораживания должна быть не выше -20⁰С. При более высокой температуре суспензия не замерзнет.

2. Бактериальная или иная контаминация может приводить к снижению срока жизни эритроцитов.

3. Для замораживания не рекомендуется использовать емкости более 5 мл. Данные флаконы должны герметично закрываться во избежание абсорбции воды.

4. Использование других буферов может приводить к изменению стабильности эритроцитов.