Докум по группе крови / Инструкции / 8510,8610,8701,8711-профили

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИГЕНОВ ЭРИТРОЦИТОВ

С ПРИМЕНЕНИЕМ ID-КАРТ “Antigen profile I,II,III”.

Трансфузии подразумевают под собой переливание совместимой по системам АВО и Rh крови, а в определённых случаях и по антигенам системы Rh и Келл. Другие групповые антигены в основном не определяются. Однако, в случае выявления клинически значимого антитела, следует переливать только отрицательную по соответствующему антигену кровь.

В таких случаях использование полностью типированной донорской крови является большим преимуществом. Используя рутинные методики, полное фенотипирование будет громоздким и дорогостоящим. В основном, когда требуется отрицательная по определённым антигенам кровь, отобранные для этого образцы крови доноров исследуются на наличие данных антигенов. С помощью гелевой технологии ДиаМед возможно полное типирование антигенного состава исследуемой крови.

ID-карта “Antigen profile I” используется для определения антигенов P1, Lea, Leb, Lua, Lub;

ID-карта “Antigen profile II” – для определения антигенов к(челлано), Kpa, Kpb, Jka, Jkb;

ID-карта “Antigen profile III” – для определения антигенов M, N, S, Fya, Fyb. В ID-картах “Antigen profile I и II” гель содержит соответствующие антитела, и требует добавления только суспензии эритроцитов (в Растворе 1, Бромелине).

В ID-карте “Antigen profile III” первые две микропробирки содержат нейтральный гель, последние четыре микропробирки содержат полиспецифический антиглобулиновый реагент(АГР), соответствующие антитела(ID-тест сыворотка, специально адаптированная для гелевого теста), добавляются после суспензии эритроцитов (в Растворе 2, модифицированном РНИС-растворе).

Используемые материалы: (только для диагностики “in vitro”)

1. ID-карта “Antigen profile I”, содержащая анти-Р1 антитела козла, моноклональные анти-Lea антитела(линия клеток LM112/161), моноклональные анти-Leb антитела(линия клеток LM129/181), человеческие анти-Lua, человеческие анти-Lub антитела, суспензированные в геле. Микропробирка “сtl” является отрицательным контролем.

2. ID-карта “Antigen profile II”, содержащая человеческие анти-к, анти-Кра, анти-Крв антитела, моноклональные анти-Jka(линия клеток MS-15) и моноклональные анти-Jkb антитела(линия клеток MS-8), суспензированные в геле. Микропробирка “сtl” является отрицательным контролем.

3. ID-карта “Antigen profile III”, содержащая нейтральный гель в первых двух микропробирках и полиспецифический АГР в остальных(кроличьи анти-IgG антитела и моноклональные анти-С3d-антитела, линия клеток С139-9), суспензированные в геле(с данной картой используется специфическая ID-сыворотка).

Условия хранения: при комнатной температуре (18-25^оС), не

хранить вблизи отопительных и вентилирующих источников,

беречь от прямых солнечных лучей.

Срок хранения смотрите на упаковке.

4. Тест-сыворотки (для карты “Antigen profile III”),готовая к

Применению, во флаконах по 1,4 мл : анти-М моноклональная(линия клеток LM110/140) и анти-N моноклональная(линия клеток 1422С7); анти-S, анти-s, анти-Fya и анти-Fyb человеческие.

Условия хранения: только в холодильнике (2-8^оС).

Срок хранения смотрите на упаковке.

Предостережение: Биологические материалы, из которых приготавливаются настоящие реагенты, предварительно обследуются на наличие Hbs антигена, HCV и HIV(1+2) при помощи лицензированных реагентов. Однако, ни один из известных в настоящее время методов диагностики не дает полной гарантии отсутствия инфекции. Поэтому при работе с препаратами крови необходимо соблюдать осторожность, как с потенциальным источником инфекции.

Дополнительные реагенты:

1. ID-Раствор 1:Бромелин для приготовления рабочей суспензии

эритроцитов.

2. ID-Раствор 2:модифицированный РНИС-раствор для приготовления рабочей суспензии эритроцитов(смотри вкладыш в упаковке).

Во избежание получения ложных результатов не рекомендуется

забирать и хранить кровь для исследований в силиконовых

пробирках! Используйте свежевзятую кровь.

Техника выполнения исследования:

Не используйте ID-карты с признаками высыхания, пузырями в геле или повреждениями!

1.В ID-картах “Antigen profile I и II”

1.Выдержать ID-Раствор 1 до достижения им комнатной

температуры.

2.Промаркировать чистую пробирку.

3.Промаркировать соответствующую ID-карту.

4.Приготовить 5% суспензию исследуемых эритроцитов в

ID-Растворе 1, для чего:

• взять промаркированную пробирку

• отдозировать в нее 0,5 мл ID-Раствора 1

• добавить 50 мкл исследуемой цельной крови или 25 мкл эритроцитарной массы

• аккуратно смешать

• инкубировать суспензию в течение 10 минут при комнатной температуре

• данная суспензия может быть использована немедленно

5.Снять защитную фольгу с промаркированной ID-карты.

6.Добавить во все микропробирки ID-карты по 10 мкл

приготовленной суспензии эритроцитов.

7.Установить данную ID-карту(карты) в ротор ID-центрифуги (с

обязательным уравновешиванием другими ID-картами, можно

неиспользованными).

8.Центрифугировать ID-карту (время и скорость

центрифугирования постоянны и заданы автоматически).

9.Оценить результат исследования.

2.В ID-картах “Antigen profile III”

1.Выдержать ID-Раствор 2 до достижения им комнатной

температуры.

2.Промаркировать чистую пробирку.

3.Промаркировать соответствующую ID-карту.

4.Приготовить 0,8% суспензию исследуемых эритроцитов в

ID-Растворе 2, для чего:

• взять промаркированную пробирку

• отдозировать в нее 1 мл ID-Раствора 2

• добавить 10 мкл исследуемой цельной крови

• аккуратно смешать

• данная суспензия может быть использована немедленно

5.Снять защитную фольгу с промаркированной ID-карты.

6.Добавить во все микропробирки ID-карты по 50 мкл

приготовленной суспензии эритроцитов.

7.Добавить по 50 мкл ID-тест сыворотки во все микропробирки. 8.Инкубировать в течение 10 минут при комнатной температуре

9.Установить данную ID-карту(карты) в ротор ID-центрифуги (с

обязательным уравновешиванием другими ID-картами, можно

неиспользованными).

10.Центрифугировать ID-карту (время и скорость

центрифугирования постоянны и заданы автоматически).

11.Оценить результат исследования.

Интерпретация результатов

А. Принцип:

Положительный результат: Эритроцитарные агглютинаты образуют

красную линию на поверхности геля или распределяются в толще геля.

Отрицательный результат: Эритроциты образуют плотный осадок на дне микропробирки.

Б. Реакции для карт Антигенных Профилей:

Положительные результаты реакции с силой агглютинации от + до ++++ показывают присутствие соответствующего антигена в исследуемом образце.

Отрицательные результаты реакции показывают отсутствие данного антигена.

Всегда следует использовать известные положительные и отрицательные по исследуемым антигенам эритроциты как контроли.

-Результаты определения каждого антигена внести в соответствующую графу ID-карты (на белом поле внизу под каждым антигеном).

-Поставить дату и подпись определяющего лица.

Примечания:

1.В ID-картах “Antigen profile I и II”

-“Отрицательный контроль” должен всегда показывать

отрицательный результат.

-Если “отрицательный контроль” положителен, необходимо перед

приготовлением суспензии эритроциты отмыть тёплым

физиологическим раствором или ID-Растворе 2. Затем повторить

контрольный тест (на картах “NaCl/Enzyme test”).

-Если после этого “контроль” стал отрицательным, можно

типировать данные антигены.

-Если “контроль” остаётся положительным, определение данного

антигена считается недействительным и дальнейшие

исследования следует проводить другими рекомендованными

методиками до выяснения причины этого.

2.В ID-картах “Antigen profile III”

Перед тестированием данных антигенов необходимо убедиться в отсутствии на исследуемых эритроцитах “in vivo” или “in vitro” аутоантител и/или компонентов комплемента, которые могут реагировать с антиглобулиновым реагентом, вызывая ложноположительные результаты.

Для исключения таковых рекомендуется выполнить Прямой Антиглобулиновый Тест как указано ниже:

1. Промаркируйте необходимые микропробирки ID-карты “LISS/Coombs” с указанием Ф.И.О. или номера, пациента или донора. Удалите алюминиевую фольгу с необходимого количества микропробирок ID-карты.

2. Добавьте в открытую микропробирку 50 мкл приготовленной суспензии исследуемых эритроцитов(в ID-Растворе 2).

3. Центрифугируйте данную ID-карту в ID-центрифуге 10 минут.

4. Интерпретируйте результаты реакции.

• Если Прямой Антиглобулиновый Тест отрицательный, проведите тестирование данных антигенов.

• Если Прямой Антиглобулиновый Тест положительный, перед приготовлением суспензии в ID-Растворе 2, отмойте эритроциты тёплым(37^оС)физиологическим раствором или ID-Раствором 2. Затем повторите Прямой Антиглобулиновый Тест.

• Если после этого Прямой Антиглобулиновый Тест отрицательный, проведите тестирование данных антигенов.

• Если Прямой Антиглобулиновый Тест остаётся положительным после отмывания, аутоантитела с эритроцитов должны быть элюированы согласно существующим методикам и после этого следует проводить тестирование данных антигенов.

Ограничения

- Бактериальная или иная контаминация используемых материалов может приводить к ложноположительным или ложноотрицательным результатам.

- Остатки фибрина во взвеси эритроцитов могут захватывать неагглютинированные эритроциты и после центрифугирования представлять собой тонкую розовую линию на поверхности геля, тогда как большинство эритроцитов будут локализовываться на дне микропробирки.

- При проведении исследований необходимо использовать только рекомендуемое фирмой оборудование. Данное оборудование должно регулярно проходить проверки в соответствии с процедурами GLP.

- Использование иных, чем ID-Diluents cуспензионных растворов для эритроцитов, а также не ДиаМед Тест-сывороток может приводить к искажению результатов реакции.

- Использование слишком концентрированных суспензий эритроцитов может приводить к искажению результатов реакций.

Результаты исследования сохраняются в неизмененном виде:

-Сорок восемь(48) часов при комнатной температуре.

-Три недели в холодильнике (при 2-8^оС)

при заклеенной липкой лентой верхней части ID-карты.

-Нижнее поле ID-карты можно отклеить или отрезать и

использовать, как документ в истории болезни или в

картотеке.

Библиография

1. Coombs,R.R.A.,Mourant,A.E.and Race, R.R.: Lancet 1945;2:15.

2. Coombs,R.R.A.,Mourant,A.E.and Race, R.R.: Brit.J.Exp.Path.1945;26:255

3. Lapierre, Y., Rigal, D., Adam, J. et al.: The gel test; A new way to detect red cell antigen-antibody reactions. Transfusion 1990; 30: 109-113.

4. Technical Manual;R.H.Walker(ed.);11^th ed.1993; American Association of Blood Banks.