Докум по группе крови / гр кр / 1047

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИГЕНОВ ЭРИТРОЦИТОВ СИСТЕМ АВО/Rh И ПРЯМОЙ РЕАКЦИИ КУМБСА ДЛЯ НОВОРОЖДЕННЫХ, С ПОМОЩЬЮ ID-КАРТ, СОДЕРЖАЩИХ МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА И АНТИГЛОБУЛИНОВЫЙ РЕАГЕНТ.

Анти-А, анти-В, анти-АВ тест-сыворотки необходимы для выявления А/В антигенов на эритроцитах человека. Из-за недоразвития антигенов А и В у новорожденных, более слабые реакции могут наблюдаться у них чаще, чем у взрослых,и подгруппы, таким образом, могут не выявляться.Сыворотка взрослых содержит антитела против А и В антигенов, отсутствующих на собственных эритроцитах крови. Оба данных антитела появляются после первых 4-х, 6-ти месяцев жизни. Как результат этого, реверсивное (перекрестное) определение групповой принадлежности не может быть проведено с образцами крови новорожденных. Таким образом, подтверждение групповой принадлежности новорожденных показано после полного формирования антигенов А и В (в 2-4 года).

D-антиген также как и D-слабый(D^u)полностью развит на эритроцитах при рождении. Определение Rh(D) и слабого D(D^u)-антигенов в крови новорожденных обязательно, если мать новорожденного является Rh(D)-отрицательной.

Прямая реакция Кумбса на образцах крови новорожденных стала стандартной процедурой с момента появления возможности знать, покрыты или нет эритроциты антителами .

Определение АВО и Rh(D)-принадлежности и прямой реакции Кумбса одновременно на эритроцитах новорожденных может быть проведено с использованием или:

-ID-карт “DiaClon ABO/Rh for Newborns”, содержащих моноклональные антисыворотки, используя суспензию эритроцитов в Растворе 2, без инкубации. Анти-D может не реагировать со всеми образцами слабого D^u-антигена,

или

-ID-карт “ABO/Rh for Newborns”, содержащих человеческие антисыворотки, используя суспензию эритроцитов в Растворе 1(раствор Бромелина), 10-ти минутную инкубацию при комнатной температуре, слабый D(D^u)-антиген определяется одновременно.

Используемые материалы: (только для диагностики “in vitro”)

1.ID-карты АВО/Rh для новорожденных DiaClon A-B-AB-D_(VI+)-ctl/ahg (direct Coombs)

2.ID-Раствор 2

3.Пуповинная кровь (не отмывать перед исследованием!)

Техника выполнения исследования:

1.Выдержать ID-Раствор 2 до достижения ими комнатной температуры.

2.Промаркировать чистую пробирку.

3.Промаркировать соответствующую ID-карту.

4.Приготовить 0,8% суспензию исследуемых эритроцитов в ID-Растворе 2, для чего:

• взять промаркированную пробирку

• отдозировать в нее 1 мл ID-Раствора 2

• добавить 12,5 мкл исследуемой пуповинной крови

• аккуратно смешать и инкубировать 10 минут при комнатной температуре

• использовать не позднее 15 минут после инкубации!

5.Снять защитную фольгу с промаркированной ID-карты.

6.Добавить в каждую микропробирку ID-карты по 50 мкл приготовленной суспензии

эритроцитов.

7.Установить ID-карту(карты)в ротор ID-центрифуги (с обязательным уравновешиванием

другими ID-картами, возможно неиспользованными).

8.Центрифугировать ID-карты (время и скорость центрифугирования постоянны и

заданы автоматически).

9.Оценить результат исследования:

-Результат в контрольной микропробирке –“ctl” должен быть всегда отрица-

тельным. Положительная реакция в «контроле» может быть вызвана присутствием

материнских аллоантител на эритроцитах ребенка и неспецифическими плазменными

белками. Если «контроль» положителен – определение недостоверно, его необходимо

повторить после однократного отмывания образца эритроцитов 0,9% раствором NaCl или

ID-Раствором 2.

-Результаты определения каждого антигена внести в соответствующую графу ID-карты(на

белом поле внизу под каждым антигеном).

-Идентифицировать результат по схеме:

Определение антигенов эритроцитов системы АВО

Группа крови (АВО)	Результаты исследования с соответствующими антисыворотками
	Анти-А	Анти-В	Анти-АВ
O(I)	-	-	-
A(II)	от + до ++++	-	от + до ++++
В(III)	-	от + до ++++	от + до ++++
AB(IV)	от + до ++++	от + до ++++	от + до ++++

Определение Резус-принадлежности(D):

Резус-принадлежность	Результаты исследования с соответствующими антисыворотками
	Анти-D
D-отрицательная	-
D-положительная	++++
D-cлабоположительная(Du)	от + до +++

-Оценка результатов прямой реакции Кумбса:

Отрицательная реакция в последней шестой микропробирке ID-карты свидетельствует об отсутствии антител на мембранах эритроцитов новорожденного.

Положительная реакция (от + до ++++)показывает, что эритроциты новорожденного сенсибилизированы (покрыты антителами).

-Внести результаты исследования на белое поле ID-карты.

-Поставить дату и подпись определяющего лица.

Результаты исследования сохраняются в неизмененном виде:

-Сорок восемь(48) часов при комнатной температуре.

-Три недели в холодильнике ( при +2-8^оС)при заклеенной липкой лентой верх-

ней части ID-карты.

-Нижнее поле ID-карты можно отклеить или отрезать и использовать, как до-

кумент в истории болезни,карте новорожденного или в картотеке.