Докум по группе крови / гр кр / Группа крови

Группа крови

Код 4003

 

Система групп крови (АВ0) состоит из одного или более антигенов, регулируемых одним геном или комплексом из двух или более генов, тесно связанных между собой. Также были выявлены и другие антигены, которые не были отнесены к установленным системам. Антигенами эритроцитов могут быть белки, гликопротеины или гликолипиды. Большинство из них синтезируются эритроцитами, однако некоторые антигены, например, принадлежащие к системе Льюиса, адсорбируются из плазмы на мембране эритроцитов. Некоторые антигены характерны именно для эритроцитов, в то время как другие встречаются и в других клетках организма. Определение группы крови имеет важное практическое значение для трансфузионной терапии. Поэтому люди, не обладающие определенными эритроцитарными антигенами крови, могут вырабатывать аллоантитела при контакте с кровью, содержащие эти антигены в ходе трансфузии с продуктами крови или во время беременности. Антитела, которые взаимодействуют с эритроцитарными антигенами, вызывают гемолитические трансфузионные реакции замедленного или быстрого типов, и гемолитическую болезнь новорожденных. Система группы крови АВ0 является самой важной системой групп крови, потому что когда антигены не выражены на поверхности эритроцитов, соответствующие антитела всегда присутствуют в плазме, провоцирующие факторы для выработки антител представлены различными факторами среды, такими как бактерии (например, Е.соli), которые представляют на поверхности структуры, практически идентичные углеводам AB0. Образующиеся антитела представляют собой смесь иммуноглобулинов IgM (преимущественно) и IgG, активных при 37 °С и способных активировать комплемент, но высокая плотность антигенных сайтов на мембране эритроцитов позволяет связывать большое количестве антител, приводя тем самым при трансфузии крови, несовместимой в системе АВ0, к острым гемолитическим трансфузионным реакциям. Существуют три аллельных гена в системе АВ0 (А, В и 0), которые наследуются по Менделю. А и В являются кодоминантными аллелями, а 0 является рецессивным аллелем. Эти три гена определяют четыре фенотипа: А, В, АВ и 0. У лиц с фенотипом А или В могут быть гетерозиготными (A0, B0 соответственно), или гомозиготными (АА и ВВ соответственно). Антигены системы АВ0 локализуются на олигосахаридных цепочках, являющихся гликосфинголипидами. Гены АВ0 системы непосредственно не кодируют антигены, а кодируют ферменты, которые добавляют специфические сахара в субстрат из мембраны эритроцитов (вещество Н): N-ацетил-галактозамин для гена А и галактоза – для гена B; аллель 0 кодирует неактивную трансферазу, таким образом, что ни один из специфических сахаров не прикрепляется к мембране эритроцитов. Ген H кодирует фукозилтрансферазу, которая добавляет группы L-фукозы к галактозе в конце олигосахаридной цепи, в результате чего образуется вещество Н. Редкая аллель, наследуемая иногда в локусе Н называется h, которая кодирует неактивную трансферазу. При гомозиготных HH (фенотип Бомбей) вещество H не присутствует на поверхности эритроцитов, а трансферазы А и Б, даже если они присутствуют, не могут добавить специфические сахара, определяющие антигенную специфичность А или B. Клиническая значимость фенотипа Бомбей проявляется в способности этих лиц вырабатывать не только анти-А и анти-B, но и анти-H, что делает трудным поиск крови, совместимой для трансфузии, так как только кровь от человека с фенотипом Бомбей является совместимой, и такого найти бывает крайне сложно. Мутации генов А и В приводят к замене аминокислот на уровне трансфераз, что означает низкий уровень экспрессии антигенов А и В, классифицированных в качестве подгрупп, наиболее распространенных по связыванию с геном А, А1 и А2. Подгруппы А и В являются клинически значимыми для доноров крови, поскольку из-за слабой выраженности антигена могут быть фенотипированны как принадлежащие к группе 0, и перелиты реципиенту с 0 группой, и могут вызвать внутрисосудистый гемолиз. Все иммуннокомпетентные лица вырабатывают естественные антитела (изоагглютинины или изогемолизины) к отсутствующим у них антигенам группы AB0 (H). Анти-А и анти-В, как правило, обнаруживаются на 3-6 месяце после рождения ребенка, а в возрасте 5 лет титр антител достигает максимального пика и сохраняется в течение всей взрослой жизни. Титр антител IgM может постепенно уменьшаться с возрастом. Анти-А и анти-B антитела присутствуют и у тех, кого слабые варианты А и В. Новорожденные обычно не имеют значительного количества анти-А и анти-В в плазме крови, за исключением рожденных от аллоимунных матерей, у которых могут присутствовать в кровотоке материнские IgG антитела, которые проходят плацентарный барьер. Антитела AB0 не являются основной причиной гемолитической болезни новорожденных, в связи с ингибированием антител растворимыми веществами А и/или Б, которые присутствуют в крови, а также растворимых антигенов А или В, присутствующих в других клетках, за исключением эритроцитов; также сродство связывания антител к молекулам сахаров выражено слабее, чем сродство антител к белковым молекулам, таких как антиген D. Гемолиз более вероятен, если мать имеет группу 0, а дети – группу A.  

Подготовка пациента: натощак.

Материал: венозная кровь.

Пробирка: вакутайнер без консервантов.

Условия обработки и стабильность пробы: образец хранится 48 часов при температуре 2-8 °C.  

Метод: гелевая методика.

Анализатор: гелевые карты.

Тест-системы: DiaMed AG (Испания).  

Основные показания к назначению анализа:

1. Перед проведением гемотрансфузией. 2. Перед инвазивными или хирургическими процедурами с возможными геморрагическими осложнениями, которые могут потребовать экстренного переливания крови. 3. Иммунологический мониторинг дородового и послеродового периода матери и ребенка.

4. У доноров крови. 5. Для совместимости групп AB0 при  пересадке органов.

Интерферирующие факторы: результат определения группы крови должен рассматриваться двумя специалистами и должен быть подтвержден обычно путем второй пробы крови.

Возможные искажения анализа результата по техническим ошибкам:

• бактериальное загрязнение;

• наличие микросгустков (ложная агглютинация);

• не соблюдается: пропорции эритроцитов / сыворотки, порядок капельного введения гемотест-сывороток (конфликт-агглютинация), время чтениярезультата; - позднее чтение; сухие края (ложная агглютинация), раннее

• чтение результата (отсутствие агглютинации или слабая агглютинация).

Артефакты, вызываемые эритроцитами Ложные агглютинации: а) наличие сгустков (псевдоагглютинация) вследствие использования макромолекулярных растворов, нарушение коагуляции, не полностью коагулированные образцы крови, гиперфибриногенемия, продукты распада фибрина, фибринолитики, диспротеинемия, парапротеинемия, криоглобулинемия, увеличение факторов острой фазы, лекарственные препараты (высокие дозы гепарина), ревматоидные факторы, повышение уровня холестерина, общего билирубина, лейкоцитарных ферментов;

б) аутоагглютинация:

• наличие холодовых агглютининов;

• эритроциты, захваченные аллоантителами (у новорожденных детей – c несовместимостью по системе Rh, АВ0), пациенты после гемотрансфузии несовместимой кровью;

• определение группы крови в пуповинной крови;

• наличие терапевтических иммунных комплексов;

с) полиагглютинация (при септицемии, вызванной грамотрицательными палочками, хорошо выражены криптоантигены из-за ферментативного действия бактериальных агентов, распознанных антителами, присутствующими в большинстве человеческих сывороток).

Отсутствие агглютинации:

• Архивный образец крови.

• Слабые антигены (у новорожденных или у недоношенных детей).

• Наличие подгрупп А или В по рецессивному типу.

• При лейкемии, лимфоме, болезни Ходжкина.

• У пациентов с группой А или В кровь с переливанием группы крови 0.

• Фетоплацентарное кровотечение.

• Наличие большого количества вещества А или В в плазме крови при раке желудка, поджелудочной железы, которое нейтрализует тест-антитела.

 

Резус-фактор

Резус-фактор

Код 4003

Антигены системы группы крови Rh закодированы двумя генами: RHD и RHCE. RHD кодифицирует антиген D, в то время как RHCE кодифицирует антигены Cc и Ее. Антиген d используется для отметки отсутствия антигена D. RHD и RHCE кодируют схожие полипептиды, которые на мембране эритроцитов формируют комплекс с гликопротеином, связывающим Rh. Функция антигенов Rh до конца неизвестна, хотя, учитывая фенотип клеток Rh 0, предполагается, что антигены Rh могут играть структурную роль в мембране эритроцитов. Структура антигенов Rh предполагает наличие транспортных белков, а гликопротеин, связанный с Rh, может играть определенную роль в транспорте аммиака. Существуют 45 антигенов, которые были отнесены к системе групп крови Rh, среди которых наиболее распространенными и важными являются D, C, с, E и е, но возможно стать аллоиммунными на антигены C, с, E и е при переливании крови и беременности, но они гораздо менее иммуногены, чем D. Менее чем 3% от общего населения, подверженного действию антигенов C, с, E, е становятся аллоимунными, поэтому предтрансфузионное тестирование обычно не проводится на эти антигены. После антигенов А и В антиген D свидетельствует о самой высокой иммуногенности антигена (в 20 раз выше, чем у большинства других Rh-антигенов). При проведении гемотрансфузии D-положительных эритроцитов почти 80% от D5негативных реципиентов вызывают образование анти-D антител. К тому же, анти-D иммунизация способствует дальнейшему синтезу антител, по сравнению с другими антигенами в рамках группы крови или за пределами системы Rh. Также антиген D вовлечен в 95% случаев гемолитической болезни новорожденных. Человек считается «резус положительным», если его эритроциты выражены антигеном D, а термин «резус отрицательный» относится к случаю, когда отсутствует антиген D. Отсутствие антигена встречается у 15-17% людей белой расы и реже – у других групп населения. У «белых людей» отсутствие антигена D связано с делецией гена RhD, в то время как у азиатов и афроамериканцев связано с инактивацией генов, а не их делецией. Некоторые эритроциты, выражающие D-антиген, требуют длительной инкубации с анти-D реагентом для появления реакции агглютинации. Эти эритроциты считаются положительным D антигеном, и описаны как рецессивный D, ранее известные как Du (менее чем в 1% случаев). Считается, что фенотип рецессивного D гена появляется в ходе одного из трех механизмов:

1. Наследственная передача RHD гена, который кодирует белок D с ослабленной антигенной экспрессией. Более распространена среди чернокожего населения и связана с гаплотипом DCE, а среди белого населения связана с гаплотипами DCе или DсE.

2. Взаимодействие гена D с другими генами. Люди с геном D в транспозиции относительно гена С (например, DсE / Се) представляют ослабленную экспрессию гена D.

3. Наследственная передача гена, кодирующего антигенный комплекс D, в котором отсутствуют определенные эпитопы, называется и неполным D.Данные лица могут вырабатывать анти-D в случае их трансфузии с D-положительными эритроцитами. Среди них DVI представляет самое малое количество эпитопов и данные лица представляют самый высокий риск при иммунизации, но менее значимый, чем D-негативные лица. Доноры D-рецессивного гена должны считаться Rh(D)-положительными и важно, что они не должны быть определены ошибочно как «Rh негативные», потому что D-слабый антиген может вызвать иммунный ответ, если перелить через кровь Rh-отрицательным лицам. Лица с D-слабым могут быть перелиты с Rh-положительной кровью (исключение – DVI), а беременные не нуждаются в профилактике с анти-D иммуноглобулином. В случае использования соответствующего моноклонального анти-D реактива большинство антигенных детерминантов, включенные прежде как Du, не должны отличаться от D-гена при обычных условиях. Фенотип Rh0 появляется, когда эритроциты не проявляют свойств Rh5антигена минимум двумя возможными механизмами: наследственная передача гена, который кодирует гликопротеин, связывающий анормальный Rh, с нормальными генами RHD и RHCE (или наследственность) определенной мутации гена RHCE связана с отрицательным D геном. Фенотип Rh0 связан со структурными аномалиями эритроцитов и гемолизом. Данные лица вырабатывают аллоантитела, взаимодействующие со всеми эритроцитами, за исключением Rh0. Анти Rh0 антитела возникают при аллоиммунизации вследствие несовместимых трансфузий Rh-системы или при беременности. Очень редко могут вырабатываться естественные антитела в системе Rh без известных антигенных стимуляторов (анти-Е, анти-С_W), в большинстве случаев несоответствующих с точки зрения клиники. Также при иммунных гемолитических анемиях аутоантитела часто обладают анти-Rh-активностью. Большинство анти-Rh-антител являются IgG, особенно IgG1 и IgG3 (неполные агглютинины), хотя некоторые могут быть IgM и обычно не активируют комплемент. Агглютинирующие антитела типа IgM являются обычно транзиторными и появляются в начале иммунизации. Наиболее распространенными являются анти-D-антитела, которые могут провоцировать гемолитическую болезнь новорожденных и тяжелые гемолитические трансфузионные реакции. Их частота значительно снизилась сразу с анти-D профилактикой у Rh-отрицательных беременных с резус положительным плодом. Aнти-C-, C-, E-антитела связаны с гемолитической болезнью новорожденных и легкими гемолитическими трансфузионными реакциями. Типирование резус-фактора эритроцитов производится с помощью анти-D моноклональных сывороток, которые взаимодействуют в соленой среде и содержат как человеческие IgM (которые не являются категорией DVI), так и поликлональные IgG-антитела, которые могут быть использованы и в антиглобулиновом тесте на D-рецессивный фактор. При подготовке анти-Rh-сыворотки добавляется человеческий или бычий сывороточный альбумин, который изменяет диэлектрическую константу среды и способствует агглютинации резус-положительных эритроцитов.

Подготовка пациента: натощак.

Материал: венозная кровь.

Пробирка: вакутайнер без консервантов.

Условия обработки и стабильность пробы: образец хранится 48 часов при температуре 2-8 °C.

Метод: гелевая методика с моноклональными антителами-D.

Анализатор: гелевые карты.

Тест-системы: Diagnostic Grifols (Швейцария).

Основные показания к назначению анализа:

1. Перед гемотрансфузией.

2. Перед некоторыми инвазивными или хирургическими процедурами с возможными геморрагическими осложнениями, которые могут потребовать переливания крови.

3. Дородовой и послеродовой иммуногематологический мониторинг матери и ребенка.

4. Доноры крови.

Интерпретация результатов: полное определение фенотипа Rh назначается донорам крови, его следует учитывать при переливании крови у девочек и женщин в период менопаузы, у больных, постоянно подвергающихся трансфузиям и у реципиентов несоответствующих антиэритроцитарных антител.

• Rh(D)-положительные, если получены результаты, ясно положительные с обеими анти-D тест-сыворотками, а аутоконтроль – негативный;

• Rh(D)-отрицательны, если получены явно негативные результаты с обеими анти-D тест-сыворотками, независимо от результатов аутоконтроля.

Дополнительное тестирование является обязательным, если получены слабо положительные результаты или противоречивые результаты с тест-сыворотками, а самоконтроль – негативный, а также и если получены положительные результаты с обеими тест-сыворотками, а аутоконтроль – положительный. У доноров, в случае если первичный тест на Rh D является отрицательным, необходимо проводить второе тестирование для выявления рецессивного D-фактора (это не является обязательной процедурой для реципиентов крови, которым нужно провести переливание крови с резус-отрицательным фактором). К тому же, определение наличия рецессивного D-фактора у беременных женщин исключает ненужное лечение анти-D иммуноглобулином. Перед тем, как определить пациента как D-рецессивного, необходимо установить факт, что больному не проводилось за последнее время переливание крови с Rh+ эритроцитами.

Интерферирующие факторы:

Ложноположительные реакции

• Эритроциты в виде столбика монет.

• Полиагглютинация.

• Гемолитические анемии с тепловыми аутоантителами (наличие антител IgG на поверхности эритроцитов) – повторное определение группы с реагентом, из которого удален альбумин, который содержит анти-D агглютинирующие антитела, способные агглютинировать с эритроцитами в солевой суспензии (анти-D солевой).

Ложноотрицательные реакции

• Гемолитическая анемия новорожденных (блокировка D-антигенных ситусов материнскими антителами).

• У лиц с рецессивным Rh D геном возможна слабая и поздняя агглютинация.