Докум по группе крови / гр кр / Инструкция 4851

DIAMED-ID MICRO TYPING SYSTEM (инструкция по применению)

Проведение прямой реакции Кумбса при помощи

ID-карты «DC-Screening I» IgG-IgA-IgM-C3c-C3d-ctl

1.ВВЕДЕНИЕ

Реагенты, содержащие полиспецифический антиглобулиновый реагент (АГР) к иммуноглобулинам крови человека используются для выявления антител, проведения проб на совместимость и прямой реакции Кумбса (прямого антиглобулинового теста (ПАГТ)). Полиспецифический АГР содержит антитела к иммуноглобулинy G (IgG) и к С3с компоненту системы комплемента человека, а также может реагировать с IgA и IgM молекулами.

Наиболее важной функцией АГР является определение присутствия IgG. Важность антикомплементарной активности АГР вызывает неоднозначные мнения, так как антитела выявляемые по их способности связывать комплемент чрезвычайно легки. Однако, анти-С3d активность важна для ПАГТ при исследовании аутоиммунной гемолитической анемии. Положительный ПАГТ с полиспецифическим АГР показывает, что эритроциты in vivo покрыты иммуноглобулинами и (или) комплементом. Для дифференциации класса иммуноглобулинов и (или) компонентов комплемента используются моноспецифические АГР, такие как: анти-IgG, -IgA, -IgM, -C3, -C3b, -C3c, -C3d и -С4.

Конфигурация ID-карты “DC-Screening I” подобрана таким образом, чтобы выявлять клинически значимые антитела. ID-карта содержит анти-IgG, -IgA, -IgM, -C3c и С3d, что позволяет проводить эти важные исследования одновременно за один этап.

2. РЕАГЕНТЫ

ID-карты «DC-Screening I» №004851 упаковка 1х12 карт

ID-карты «DC-Screening I» №004857 упаковка 24х12 карт

ID-карты «DC-Screening I» №004856 упаковка 60х12 карт

ID-карты «DC-Screening I» №004855 упаковка 112х12 карт

Предназначены только для диагностических целей in vitro.

ID-карта «DC-Screening I» состоит из пяти микропробирок, содержащих моноспецифические реагенты, в составе которых имеется АГР: анти-IgG, -IgA, -IgM, -C3c ( кроличьи) и анти-C3d (моноклональные № С 139-9), суспензированные в геле, и микропробирки отрицательного контроля.

Хранить при комнатной температуре (18-25⁰ С)

Срок годности указан на упаковке

3.ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ РЕАГЕНТЫ

ID-Раствор для разведения 2 (ID-Diluent 2): модифицированный раствор низкой ионной силы (РНИС/LISS) для приготовления суспензии эритроцитов.

Хранить при температуре 2-8^оС

Срок годности указан на флаконе.

4.НЕОБХОДИМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ

ID-диспенсер

ID-пипетка FP-1, FP-2 или EP-3

ID-наконечники (для пипетки)

Суспензионные пробирки

ID-рабочий столик

ID-центрифуга 6, 12, 24S с фиксированным временем

5.ОБРАЗЦЫ

Для сбора образцов крови не требуется проводить предварительную подготовку пациентов. Образцы крови берутся посредством современных флеботомических методик. Образцы следует стабилизировать консервантами (EDTA, цитрат, гепарин или CPDA). Использование свежесобранной крови дает больше гарантий получения достоверных результатов, в то время как свернувшаяся кровь образует сгустки в суспензии клеток и мешает реакции.

6.ПРИГОТОВЛЕНИЕ ОБРАЗЦА КРОВИ (взвеси эритроцитов)

Перед приготовлением взвеси эритроциты отмывать не нужно(см. Примечание 1).

Приготовьте 0,8% суспензию красных клеток в растворе ID-Diluent 2 :

Перед использованием дайте раствору ID-Diluent 2 нагреться до комнатной температуры.

6.1. Накапайте 1мл раствора ID-Diluent 2 в чистую пробирку.

6.2. Добавьте 10мкл крови; осторожно перемешайте.

6.3. Полученная взвесь может быть использована сразу после приготовления.

7. ПРОЦЕДУРА ПРОВЕДЕНИЯ ТЕСТА

Не используйте высохшие, с пузырьками воздуха или плохо запечатанные ID-карты.

7.1.Промаркируйте ID-карту «DC-Screening I», указав имя или номер пациента; снимите защитную фольгу.

7.2.Добавьте 50 мкл суспензии красных клеток во все микропробирки.

7.3.Центрифгируйте ID-карту в течение 10 мин.

7.4.Определяйте результаты реакции.

8.ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

А. Общий принцип:

Положительная реакция: Агглютинированные клетки образуют красный слой

на поверхности или в толще геля.

Отрицательная реакция: Клетки образуют компактный осадок на дне микропробирки.

Б. Моноспецифическая реакция

Важно: Микропробирка отрицательного контроля (ctl) должна показывать отрицательную реакцию.

Если все шесть микропробирок ID-карты показывают положительный результат, следует учесть возможность присутствия сильных IgM антител (см примечание 1).

Некоторые IgM антитела (возможно существующие в виде мономеров) не ведут себя как агглютинины. Они могут быть идентифицированы с помощью специфической реакции в анти-IgM микропробирке, когда контроль (ctl) остается отрицательным.

Положительная реакция против анти-IgG с отрицательным анти-C3c и анти-C3d определяет возможное присутствие тепловых аутоантител на красных клетках (возможность внесосудистого гемолиза).

Положительные реакции с анти-IgG, анти-C3c и анти-C3d могут также определить возможное присутствие IgG аутоантител (хотя любой гемолиз будет иметь тенденцию стать внутрисосудистым).

Положительная реакция против только анти-IgA определяет возможное присутствие IgA аутоантител. Правда, клетки, покрытые in vivo IgA без IgG встречаются чрезвычайно редко.

Положительная реакция против анти-C3c и анти-C3d может определить присутствие холодовых аутоантител.

Положительная реакция против анти-C3c, в то время как анти-C3d отрицательно, показывает, что клетки могут быть покрыты C3b.

Для определения IgG аутоантител необходимо прибегнуть к методу элюирования и тестировать элюент против соответствующих панелей красных клеток (ID-DiaPanel).

9.ПРИМЕЧАНИЯ

В случае получения положительной реакции в микропробирке отрицательного контроля (ctl) необходимо выполнить следующее:

• Отмыть эритроциты теплым (37^оС) 0.9% физиологическим раствором NaCl

(или ID-Раствор 2),

• Затем приготовить вновь 0.8% суспензию эритроцитов, как указано выше, и

Повторить тест.

Известно, что лекарства могут быть причиной положительного ПАГТ.

10.ОГРАНИЧЕНИЯ

- Бактериальное или другое загрязнение используемого материала может вызвать ложноположительную или ложноотрицательную реакцию.

- Остатки фибрина во взвеси эритроцитов могут захватить неаглютинированные клетки и представляют собой тонкую розовую линию на поверхности геля, тогда как большинство клеток после центрифугирования локализуется на дне микропробирки.

- Необходимо строго следовать описанной технике выполнения процедуры и использовать рекомендуемое оборудование. Важно регулярно проверять оборудование в соответствии с процедурами GLP .

- Использование других суспензионных растворов для эритроцитов вместо раствора ID-Diluent может изменить результаты реакции.

- Слишком концентрированная суспензия красных клеток может стать причиной получения ложноположительных реакций.