Докум по группе крови / гр кр / иммуногематологические исследования путем применения гелевой технологии Диамед

Джебраилов Р.В., Сизова И.М. Повышение качества проведения иммуногематологических исследований путем применения гелевой технологии Диамед // Трансфузиология.- 2006.- Т.7, №2.- С. 63-67

Повышение качества проведения иммуногематологических исследований путем применения гелевой технологии Диамед

Р.В. Джебраилов, И.М.Сизова ОСПК г. Великий Новгород

Повышение уровня качества иммуногематологических исследований в настоящее время является важной задачей, актуальность которой постоянно растет. В последние годы при обследовании доноров и реципиентов, в частности, большое внимание уделяется выявлению антиэритроцитарных антител.

По данным литературы частота выявления аллоантител в нашей стране у доноров и реципиентов в 3-5 раз ниже цифр, указываемых зарубежными авторами. Основной причиной этого является использование малочувствительных методов исследования – тестов с использованием желатина и полиглюкина, а также применение пулированных эритроцитов [3], в то время как зарубежные лаборатории используют антиглобулиновый тест и панели из 2-3 образцов эритроцитов. Другие авторы также отмечают, что исследование антиэритроцитарных антител методом конглютинации с 10% раствором желатина не всегда обеспечивает должный уровень диагностики [2,6].

Низкая выявляемость антител приводит к тому, что индивидуальный подбор компонентов крови для трансфузий используется редко, благодаря чему вероятность отсроченных посттрансфузионных осложнений резко возрастает.

По заключению Жибурта Е.Б. с соавторами [2] оптимальным для проведения скрининга антиэритроцитарных антител является гелевый тест (непрямой тест Кумбса). Высокая чувствительность теста позволяет значительно повысить выявляемость клинически значимых антител, хотя его стоимость и не позволяет использовать его для обследования всех доноров.

Следующая проблема состоит в том, чтобы проводить подбор компонентов крови для сенсибилизированных реципиентов максимально эффективно. Для этого необходимо иметь регистр доноров, фенотипированных по нескольким системам антигенов эритроцитов – Резус, Келл, Даффи, Кидд, MNSs, P. Целесообразность создания подобной базы данных, также обосновывалась в литературе [7].

Лаборатория стандартных сывороток ОСПК г. Великий Новгород занимается тестированием образцов крови, присылаемых на ОСПК для консультации, индивидуальным подбором крови для трансфузии, а также обследованием доноров в случаях каких-либо затруднений при определении у них группы крови, Резус-принадлежности и антиэритроцитарных антител.

В настоящей работе представлены данные, полученные с ноября 2005 года по июнь 2006 года, т.е. за 7 месяцев. Причиной выбора данного периода наблюдений послужило то, что с сентября 2005 года в нашей лаборатории для проведения консультативных иммуногематологических исследований активно применяется гелевая диагностическая система Диамед (Швейцария).

Скрининг антиэритроцитарных антител проводился в непрямом тесте Кумбса с использованием панели из трех образцов стандартных эритроцитов (ID-DiaCell I-II-III). При обнаружении антител проводилось дальнейшее исследование с целью установления их специфичности, для этого использовалась панель из 11 образцов стандартных эритроцитов ID-DiaPanel. В последующем при наличии показаний к гемотрансфузии проводился подбор эритроцитсодержащих сред от фенотипированных доноров, у которых отсутствовали антигены, соответствующие выявленным антителам.

За этот период проведен скрининг антиэритроцитарных антител у 631 реципиента, при этом антитела выявлены в 29 случаях. Дальнейшее исследование показало, что выявленные антитела имели следующие специфичности:

анти-D	10 образцов (35%)
анти-K	6 образцов (20,7%)
анти-E	3 образца
анти-D+E	1 образец
анти-D+C	2 образца (7%)
анти-D+C+E	1 образец
анти-Cw	1 образец
анти-E+Cw	1 образец
анти-E+K	1 образец
анти-c	1 образец

В двух случаях специфичность антител установить не удалось.

Обращает на себя внимание, что раннее, когда мы использовали для скрининга антител метод конглютинации в желатине, структура выявляемости антител заметно отличалась от представленной выше. Например, анти-D выявлялись примерно в 55-60% от общего количества выявленных антител, анти-D+C – в 7-10%, анти-К – в 5-7%. Антитела других специфичностей выявлялись редко, например, анти-Е за предшествовавший год были выявлены лишь в одном случае (против 7 случае в нашем наблюдении). Кроме того, значительно чаще не удавалось установить специфичность выявленных антител. В дальнейшем мы планируем проводить скрининг антиэритроцитарных антител параллельно в гелевом тесте и желатиновом методе с целью уточнения особенностей выявления антител различных специфичностей в указанных методиках.

С целью создания регистра фенотипированных доноров проводилось определение антигенов С, с, Е, е. За описываемый период по данным антигенам обследован 471 донор, в случае наличия каких-либо затруднений также использовались гелевые карты Диамед. Это позволило значительно упростить индивидуальный подбор гемокомпонентов для больных, у которых были выявлены перечисленные выше антитела. Параллельно начата работа по углубленному фенотипированию доноров – в данном случае определялись антигены Fya, Fyb, Jka, Jkb, Lea, Leb, P1, M, N, S, s, Lua, Lub. Эти исследования также проводились в гелевых картах Диамед. Заметим, что использование данной технологии для фенотипирования доноров позволяет получать быстрые и достоверные результаты, в то время как определение т.н. минорных антигенов традиционными методами может вызывать затруднения.

Однако труднодиагностируемые случаи могу встречаться и при определении группы крови по системе АВО и Rh. Так, за рассматриваемый период в лабораторию поступило 16 образцов крови пациентов, определение группы крови которых по данным системам в ЛПУ вызвало затруднения. В нашей лаборатории данные образцы также исследовались в гелевой диагностической системе.

Как было показано выше, предпочтительность гелевой системы для скрининга антител сомнений не вызывает; кроме того, при определении группы крови данная система также имеет отчетливые преимущества. Во всех 16 случаях первоначальные трудности определения группы крови были связаны с явлением панагглютинации либо с предшествовавшими переливаниями крови. При исследовании данных образцов в гелевой системе во всех случаях удалось сразу получить достоверные результаты. Обращает на себя внимание то обстоятельство, что диагностика трансфузионных химер в гелевой системе не представляет сложности. Если в исследуемом образце присутствуют две популяции эритроцитов, имеющие различный набор антигенов, то в микропробирке, предназначенной для диагностики антигена, по которому имеется несовпадение, произойдет разделение эритроцитов на два хорошо заметных слоя.

В заключение хочется обратить внимание на еще один аспект. За рассматриваемый период в нашей лаборатории отмечено 107 случаев, когда определение антигена К при помощи реагента анти-Келл Супер (Эритротест цоликлон) давало трудно интерпретируемые результаты. При этом аналогичное определение в гелевой системе позволяло сделать достоверное заключение. Расхождения с результатами первичных определений наблюдались в обе стороны – были отмечены как ложноположительные, так и ложноотрицательные реакции, что, как мы считаем, обусловлено низким качеством реагента анти-Келл Супер. К сожалению, мы не вели подробного учета подобных расхождений, поэтому в настоящий момент у нас отсутствует возможность провести их анализ, который мы рассматриваем, как тему отдельного последующего исследования.

Таким образом, наш опыт работы показывает, что применение гелевой методики позволяет значительно повысить качество выполнения иммуногематологических исследований и тем самым способствовать поддержанию трансфузионной безопасности на современном уровне.

Литература

1. Дрождинин В.А., Строганова И.А. Совершенствование службы крови Мурманской области // Трансфузиология.-2004.-№2.-С.27-39

2. Жибурт Е.Б., Попова В.И., Иванова И.В., Рейзман П.В. Скрининг антиэритроцитарных антител и другие практические вопросы иммуносерологии // Трансфузиология.-2004.-№4.-С.72-80

3. Минеева Н.В., Трофимова С.А., Андреева А.В. Анализ деятельности лечебно-профилактических учреждений России по проведению иммуногематологических исследований доноров и реципиентов // Трансфузиология.-2000.-№1.-С.77-83

4. Минеева Н.В. Иммунологические посттрансфузионные осложнения // Трансфузиология.-2001.-№2.-С.40-51

5. Минеева Н.В. Механизмы развития гемолитических трансфузионных осложнений // Трансфузиология.-2002.-№1.-С.25-39

6. Скудицкий А.Е. Некоторые особенности гелевых диагностических систем в иммуногематологии // Трансфузиология.-2005.-№2.-С.80-83

7. Фатихова Р.Б., Скудицкий А.Е. Гемолитическое осложнение, обусловленное анти-Fya и анти-Jka антителами // Трансфузиология.-2004.-№3.-С.83-88