Инструкция

По изготовлению консервированных стандартных

Эритроцитов и их применению в

Изосерологических исследованиях

Стандартные эритроциты, содержащие определенные сочетания аллоантигенов, предназначены для выявления антиэритроцитарных антител в сыворотке исследуемой крови, при определении групп крови АВО перекрестным способом, при определении резус-принадлежности крови, а также для проведения контроля специфичности и активности стандартных изогемагглютинирующих сывороток АВО, сывороток антирезус; тест-сывороток и реактивов, предназначенных для определения антигенов различных систем эритроцитов крови человека. Стандартные эритроциты группы О(I) должны содержать в эритроцитах клинически значимые антигены: D, C, Cw, c, E, e, K, k, Fy, Jk, M, N, S, s, Le.

С целью увеличения срока годности стандартных эритроцитов можно производить их консервирование специально изготовленными консервирующими растворами.

I. Требования, предъявляемые к стандартным эритроцитам

Стандартные эритроциты для исследований по системе АВО должны давать четкую, хорошо видимую агглютинацию при взаимодействии со стандартными сыворотками соответствующей специфичности и не давать агглютинации с сыворотками, не содержащими антител против данного антигена эритроцитов.

Стандартные эритроциты группы А(II), предназначенные для выявления агглютинина анти-А, должны иметь титр не ниже 1:64, эритроциты группы В(III), предназначенные для выявления агглютинина анти-В, также должны иметь титр не ниже 1:64.

Титр антигенов А и В устанавливается с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток группы Абета(II) (анти-В) и Вальфа(III) (анти-А) или соответствующих моноклональных антител, удовлетворяющих требованиям действующих инструкций.

Время наступления агглютинации эритроцитов А1 и В со стандартными изогемагглютинирующими реактивами должно составлять не более десяти секунд; эритроцитов подгруппы А3, В2 - не более двух минут.

Стандартные эритроциты группы крови О(I) не должны давать агглютинации со стандартными сыворотками групп крови Оальфа бета(I), Абета(II), Вальфа(III) в течение двадцати минут.

Стандартные резус-положительные эритроциты группы крови О(I), содержащие антиген D, а также антигены С, Cw, c и E, e в различных сочетаниях, предназначенные для выявления антител системы резус, должны давать соответственно со стандартными сыворотками анти-D, анти-C, анти-Cw, анти-c, анти-E и анти-e четкую агглютинацию при определении методом конглютинации с желатином, экспресс-методом в пробирках или на плоскости без подогрева или непрямой пробе Кумбса в зависимости от того, для какого метода исследования предназначена данная стандартная сыворотка антирезус.

Стандартные резус-отрицательные эритроциты О(I) фенотипа ccddee не должны давать агглютинации с реактивами антирезус, содержащими антитела анти-D, анти-С, анти-Е во всех методах исследования, для использования в которых предназначены указанные реактивы антирезус.

Время наблюдения за отрицательной реакцией должно соответствовать времени, установленному для каждой из этих реакций.

II. Приготовление консервированных стандартных эритроцитов

Приготовление стандартных эритроцитов производится в условиях строгого соблюдения асептики и состоит из изготовления консервирующего раствора, получения взвеси эритроцитов в консервирующем растворе, розлива эритроцитов, маркировки продукции и контрольных исследований.

1. Изготовление консервирующего раствора для стандартных эритроцитов.

Консервирующей средой для приготовления стандартных эритроцитов могут служить растворы следующего состава:

Консервант N 1:

сорбит 40,0 г

глюкоза 6,0 г

Na2HPO4x12H20 2,0 г

KH2PO4 0,9 г

левомицетин 0,06 г

этиловый спирт 96 град. 100 мл

вода бидистиллированная до 1000 мл

рН раствора 6,8-6,9

В случае необходимости доведения рН до требуемой величины добавляется несколько кристаллов аскорбиновой кислоты или Na2HPO4x12H20.

Консервант N 2:

аденин 0,03 г

инозин 0,06 г

лимонная кислота 1,5 г

глюкоза 3,0 г

Na3PO4 0,4 г

NaOH 1н 20 мл

вода дистиллированная до 100 мл

рН раствора 6,3-6,4

Консервирующие растворы (консерванты) представляют собой прозрачную бесцветную жидкость без запаха. Стерилизация консервантов производится путем фильтрования их через соответствующие стерилизующие фильтры. Розлив производят в стерильные флаконы емкостью 250 мл или 500 мл, которые немедленно закрывают резиновыми пробками и завальцовывают металлическими колпачками. Срок годности консервантов - шесть месяцев. В случае помутнения консервирующего раствора или появления желтого окрашивания применение его для работы недопустимо.