Иммунохимические методы анализа. Радиоиммунный, иммуноэлектрофоретический и иммунодиффузный методы.

Иммунохимические методы исследований – методы, основанные на специфической реакции взаимодействия антигена с антителом. Cфера применения - показаны в ситуациях, когда необходимо количественно определить концентрации химических веществ, содержащихся в очень низких концентрациях в биологическом материале.

Белки сыворотки крови: Иммуноглобулины, липопротеины Опухолевые маркёры: Раково-эмбриональный антиген (РЭА), альфа-фетопротеин и др.

Гормоны.

Инфекционные маркёры: Нbs Ag,Anti-HIV

Маркеры воспаления: Ревматоидный Фактор, С- Реактивный Белок Лекарственные вещества: Теофиллин, Дигоксин, Фенитоин и др.

Специфичность и чувствительность иммунохимических методов

Специфичность:

иммунохимические методы высокоспецифичны (95-98%), можно легко и точно дифференцировать в биологической пробе химические вещества, имеющие очень схожую молекулярную структуру (например, Тироксин и Трийодтиронин).

Чувствительность:

При помощи иммунологических методов исследования в биологической пробе можно определить химические вещества в концентрациях вплоть до 10 - 23 моль/л.

Принцип иммунологических методов исследования

Основа технологии любого иммунологического метода исследования – реакция между антигеном и антителом.

Антиген - вещество, распознающееся иммунной системой. Антитела (иммуноглобулины) - белки, специфически реагирующие с антигенами.

Антиген подходит к определенному антителу как «ключ к замку».

Схема взаимодействия антиген-антитело:

Схема строения иммуноглобулина:

Методы иммунохимического тестирования Ag + At = Комплекс AgAt.

1.Детекция антигена - тест-система должна иметь в своём составе соответствующее антитело (для определения концентрации дигоксина надо иметь в тест- системе антитела к нему) 2.Детекция антител - тест-система должна содержать в своём составе соответствующий антиген (для определении антител к НbSAg в тест системе должен содержаться синтетический HbSAg) 3.Детекция иммунного комплекса (т.е. связанных между собой

Антигена и Антитела) – реакция преципитации, агглютинации и т.д. ( в зависимости от молекулярной массы и концентрации в сыворотке крови исследуемого антигена

Классификация:

1) по типу проводимых на каждой из иммунохимических стадий реакций:

-Гомогенные ( об образовании комплекса АГ-АТ судят по появлению новых свойств метки ( потеря активности). Нет необходимости в этапе их физического разделения)

-Гетерогенные ( одна из фракций прикрепляется к твердой фазе, покрытой АГ или АТ, поэтому другие фракции должны быть удалены.)

-Смешанные (Если же на первой стадии анализа образование специфических иммунных комплексов происходит в растворе, а лишь затем для целей разделения используют твердую фазу с иммобилизованным реагентом .)

2)по типу иммунохимического взаимодействия на первой стадии анализа:

-конкурентный (если на первой стадии в системе одновременно присутствует анализируемое соединение и его аналог, конкурирующие за ограниченное количество центров специфического связывания)

-неконкурентный (если в системе присутствуют только анализируемое соединение и соответствующие ему центры связывания (антиген и специфические антитела)).

3) По применению общих антивидовых антител: -Прямой -Непрямой

Радиоиммунный метод, или анализ (РИА).

- высокочувствительный метод, основанный на реакции антиген - антитело с применением антигенов или антител, меченных радионуклидом (125J,14C, 3Н, 51Сr и др.). После их взаимодействия отделяют образовавшийся радиоактивный иммунный комплекс и определяют его радиоактивность в соответствующем счетчике (бета- или гамма-излучение). Интенсивность излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.