1. Культивирование бактерий. Питательные среды.

Бактериальная петля - инструмент для посевов. Бактериальная игла - для посевов уколом. Металлические (стеклянные) шпатели - для посевов на чашках Петри. Пастеровские и градуированные пипетки - для посевов жидких материалов.

При пересеве бактериальной культуры берут пробирку, пронося её над пламенем горелки. Набирают посевной материал. В пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом, опуская ее до конденсата в нижней части среды, и зигзагообразным движением распределяют по скошенной поверхности агара. Пробирки с посевами подписывают, указывая дату посева и характер посевного материала.

Посевы газоном производят шпателем на питательный агар в чашке Петри. Приоткрыв крышку, петлей наносят посевной материал на поверхность питательного агара. Затем проводят шпатель через пламя горелки, остужают его о внутреннюю сторону крышки и растирают материал по всей поверхности среды. После инкубации посева появляется равномерный сплошной рост бактерий.

Ростовые факторы питательных сред, которые катализируют метаболические процессы микробной клетки - витамины группы В, никотиновая кислота.

Искусственные среды готовят по рецептам из различных настоев или отваров животного происхождения с добавлением неорганических солей, углеводов и азотистых веществ.

В бактериологической практике используют сухие питательные среды. Для приготовления используют: кровезаменители (гидролизин - кислотный гидролизат крови животных, аминопептид - ферментативный гидролизат крови); продукты биотехнологии (кормовые дрожжи, кормовой лизин, виноградная мука, белколизин).

Консистенция. Плотные среды готовят добавляя к жидкой среде 1,5-2% агара, полужидкие - 0,3-0,7 % агара. Агар - продукт переработки морских водорослей, плавится при 80-86С, затвердевает при 40С.

По целевому назначению. Основные среды - триптические гидролизаты мясных продуктов, крови животных или казеина, из которых готовят жидкую (питательный бульон) и плотную (питательный агар) среды.

Элективные среды - для выделения и накопления микробов определенного вида из материалов, содержащих постороннюю микрофлору (рост стафилококков - при повышенной концентрации NaCl, холерного вибриона - в щелочной среде).

Дифференциально-диагностические среды - для разграничения отдельных видов микробов. Разные виды бактерий различаются между собой по биохимической активности (неодинаковый набор ферментов).

Синтетические среды - химически чистые вещества: аминокислоты, минеральные соли, углеводы, витамины. Полусинтетические среды - пептон, дрожжевой экстракт. Эти среды применяют при получении антибиотиков, вакцин.

2. Дисбактериоз -

Нарушения под влиянием факторов окружающей среды, стрессовых воздействий, бесконтрольного применения антимикробных препаратов, лучевой и химиотерапии, нерационального питания, оперативных вмешательств. В результате нарушается колонизационная резистентность. Размножившиеся транзиторные микроорганизмы продуцируют токсичные продукты метаболизма - индол, скатол, аммиак, сероводород.

Дисбиоз и дисбактериоз - состояния, развивающиеся в результате утраты нормальных функций микрофлоры.

При дисбактериозе происходят стойкие количественные и качественные изменения бактерий, входящих в состав нормальной микрофлоры. При дисбиозе изменения происходят и среди других групп микроорганизмов (вирусов, грибов). Дисбиоз и дисбактериоз приводят к эндогенным инфекциями.

Дисбиозы классифицируют по этиологии (грибковый, стафилококковый, протейный) и по локализации (дисбиоз рта, кишки, влагалища). Изменения в составе и функциях нормальной микрофлоры сопровождаются нарушениями: развитием инфекций, диарей, запоров, синдрома мальабсорбции, гастритов, колитов, язвенной болезни, злокачественных новообразований, аллергий, мочекаменной болезни, гипо- и гиперхолестеринемии, гипо- и гипертензии, кариеса, артрита, поражений печени.

Нарушения нормальной микрофлоры определяются:

1. Выявление видового и количественного состава представителей микробиоценоза определенного биотопа (кишки, рта, влагалища, кожи) - путем высева из разведений исследуемого материала или путем отпечатков, смыва на соответствующие питательные среды (среда Блаурокка - для бифидобактерий; среда МРС2 - для лактобактерий; анаэробный кровяной агар - для бактероидов; среда Левина или Эндо - для энтеробактерий; желчно-кровяной агар - для энтерококков; кровяной агар - для стрептококков и гемофилов; мясопептонный агар с фурагином - для синегнойной палочки; среда Сабуро - для грибов).

2. Определение в исследуемом материале микробных метаболитов - маркеров дисбиоза (жирных кислот, гидроксижирных кислот, жирнокислотных альдегидов, ферментов). Обнаружение в фекалиях бета-аспартилглицина и бета-аспартиллизина свидетельствует о нарушении кишечного микробиоценоза, так как в норме эти дипептиды метаболизируются кишечной анаэробной микрофлорой.

Для восстановления нормальной микрофлоры: 1.Проводят селективную деконтаминацию; 2.Назначают препараты пробиотиков, полученные из лиофильно высушенных живых бактерий - представителей нормальной микрофлоры кишечника - бифидобактерий (бифидумбактерин), кишечной палочки (колибактерин), лактобактерий (лактобактерин).

Пробиотики - препараты, оказывающие при приеме per os нормализирующее действие на организм человека и его микрофлору.