1. Морфологические и тинкториальные свойства бактерий. Методы окраски.

Бактерии - микроорганизмы, не имеющие оформленного ядра (прокариоты). Они имеют разнообразную форму и довольно сложную структуру, определяющую многообразие их функциональной деятельности.

Бактерии шаровидной формы (кокки) в зависимости от плоскости деления и расположения относительно друг друга отдельных особей подразделяются на микрококки (отдельно лежащие), диплококки (парные), стрептококки (цепочки), стафилококки (виноградные грозди), тетракокки (четырех кокка) и сарцины (пакеты из 8 или 16 кокков).

Палочковидные (цилиндрические) бактерии располагаются в виде одиночных клеток, дипло- или стрептобактерий.

Извитые формы бактерий - вибрионы и спириллы, спирохеты. Вибрионы имеют вид слегка изогнутых палочек, спириллы - извитую форму с несколькими спиральными завитками.

Размеры бактерий от 0,1 до 10 мкм. Состав бактериальной клетки: капсула, клет стенка, цитоплазматическая мембрана и цитоплазма (содержатся нуклеоид), рибосомы и включения. Некоторые снабжены жгутиками и ворсинками. Некоторые образуют споры, которые располагаются терминально, субтерминально, центрально; превышая поперечный размер клетки, споры придают ей веретенообразную форму.

Методы окраски. Окраска мазка простым методом - окраска препарата одним красителем; сложным методом (по Граму, Цилю – Нильсену, Ауески, Нейссера, Бури-Гинса) включает последовательное использование нескольких красителей и имеет дифференциально-диагностическое значение. Отношение микроорганизмов к красителям - тинкториальные свойства. Специальные методы - для выявления жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических включений.

При простых методах мазок окрашивают одним красителем, используя красители анилинового ряда (основные или кислые). Если красящий ион (хромофор) - катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромофор - анион, то краситель имеет кислые свойства. Кислые красители - эритрозин, кислый фуксин, эозин. Основные красители - генциановый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин. Основные красители более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Из сухих красителей, в виде порошков, готовят насыщенные спиртовые растворы, а из них - водно-спиртовые, которые и служат для окрашивания микробных клеток. Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим - 5-7 мин. Затем мазок промывают водой, высушивают промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки окрашены.

Сложные методы окраски применяют для изучения структуры клетки и дифференциации микроорганизмов. Окрашенные мазки микроскопируют в иммерсионной системе. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту.

2. ГЗТ.

Аллергические реакции: ГНТ - реакции, проявляющиеся через 20-30 мин после повторной встречи с АГ; ГЗТ - реакции, возникающие через 24-48 ч. ГНТ - выработка АТ; ГЗТ - клеточные реакции.

ГЗТ - клеточные механизмы с участием Т-лимфоцитов.

ГЗТ возникает при сенсибилизации организма:

1. Микроорганизмами и микробными АГ (бактериальными, грибковыми, протозойными, вирусными); 2. Гельминтами; 3. Природными и искусственно синтезированными гаптенами (лекарственные препараты, красители); 4. Некоторыми белками.

ГЗТ вызывается всеми АГ. Ярко проявляется на введение полисахаридов, низкомолекулярных пептидов (малоиммуногенных АГ). Реакцию вызывают малые дозы АГ при внутрикожном введении.

Механизм - сенсибилизация Т-лимфоцитов-хелперов АГ. Сенсибилизация лимфоцитов вызывает выделение медиаторов (интерлейкина-2), которые активируют макрофаги и вовлекают их в процесс разрушения АГ, вызвавшего сенсибилизацию лимфоцитов. Т-лимфоциты проявляют цитотоксичность. Роль лимфоцитов в возникновении аллергий клеточного типа - возможность передачи аллергии от сенсибилизированного животного несенсибилизированному с помощью введения лимфоцитов, подавление реакции при помощи антилимфоцитарной сыворотки.

Морфологическая картина - воспалительный характер, обусловленный реакцией лимфоцитов и макрофагов на образующийся комплекс АГ с сенсибилизированными лимфоцитами.

Формы проявления:

Туберкулиновая реакция возникает через 5-6 ч после внутрикожного введения сенсибилизированным туберкулезной палочкой животным или человеку туберкулина, т.е. АГ туберкулезной палочки. Выражается реакция в виде покраснения, припухлости, уплотнения на месте введения туберкулина. Повышение температуры, лимфопения. Достигает максимума через 24-48 ч. Туберкулиновая реакция используется с диагностической целью для выявления заболеваний туберкулезом или контактов организма с туберкулезной палочкой.

Замедленная аллергия возникает при сенсибилизации малыми дозами белковых АГ с адъювантом, а также конъюгатами белков с гаптенами. В этих случаях аллергическая реакция возникает через 5 дней и длится 2-3 нед.

Контактная аллергия возникает, если АГ являются низкомолекулярные органические и неорганические вещества, которые в организме соединяются с белками, образуя конъюга-ы. Конъюгированные соединения, выполняя роль гаптенов, вызывают сенсибилизацию. Возникает при контакте с химическими веществами (фармацевтическими препаратами, красками, косметикой). Проявляется в виде дерматитов.

Значение: Механизмы лежат в основе воспаления, которое способствует локализации инфекционного агента или АГ в пределах определённых тканей и формированию полноценной иммунной реакции защитного характера.

Аллергопроба - метод диагностики аллергических заболеваний. Кожные - количественные и качественные пробы, прямые и непрямые пробы, провокационные пробы. Аллерген (возбудитель заболевания) вводится в организм пациента и наблюдается реакция организма пациента на аллерген. Пробы выполняют в период улучшения состояния через 2-3 недели после перенесенной аллергической реакции, т.к. чувствительность организма к аллергену в течение этого времени снижается.

Прямая кожная проба - аллерген контактирует с кожей больного при повреждении (укол, царапина, внутрикожное введение), либо наносится на неповрежденную кожу в виде капли или аппликации. При положительной реакции на месте внедрения аллергена развивается покраснение или волдырь. Немедленная реакция развивается через 20 минут, замедленная - через 24-48 часов. Степень чувствительности проб увеличивается: капельная, аппликационная, укол, через царапину, внутрикожная.

Непрямая кожная проба - человеку внутрикожно вводится сыворотка крови больного, через 24 часа в то же место вводят аллерген. По развитию местной кожной реакции судят о наличии АТ в сыворотке.

Провокационные пробы показаны при несоответствии данных аллергологического анамнеза и результатов кожных проб. Основаны на воспроизведении аллергических реакций путем введения аллергена в орган или ткань, поражение которых является ведущим в картине заболевания. Различают конъюктивальные (аллергический конъюнктивит), назальные (аллергический ринит и поллиноз) и ингаляционные (бронхиальная астма).