1. Культивирование бактерий. Питательные среды.

Бактериальная петля - инструмент для посевов. Бактериальная игла - для посевов уколом. Металлические (стеклянные) шпатели - для посевов на чашках Петри. Пастеровские и градуированные пипетки - для посевов жидких материалов.

При пересеве бактериальной культуры берут пробирку, пронося её над пламенем горелки. Набирают посевной материал. В пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом, опуская ее до конденсата в нижней части среды, и зигзагообразным движением распределяют по скошенной поверхности агара. Пробирки с посевами подписывают, указывая дату посева и характер посевного материала.

Посевы газоном производят шпателем на питательный агар в чашке Петри. Приоткрыв крышку, петлей наносят посевной материал на поверхность питательного агара. Затем проводят шпатель через пламя горелки, остужают его о внутреннюю сторону крышки и растирают материал по всей поверхности среды. После инкубации посева появляется равномерный сплошной рост бактерий.

Ростовые факторы питательных сред, которые катализируют метаболические процессы микробной клетки - витамины группы В, никотиновая кислота.

Искусственные среды готовят по рецептам из различных настоев или отваров животного происхождения с добавлением неорганических солей, углеводов и азотистых веществ.

В бактериологической практике используют сухие питательные среды. Для приготовления используют: кровезаменители (гидролизин - кислотный гидролизат крови животных, аминопептид - ферментативный гидролизат крови); продукты биотехнологии (кормовые дрожжи, кормовой лизин, виноградная мука, белколизин).

Консистенция. Плотные среды готовят добавляя к жидкой среде 1,5-2% агара, полужидкие - 0,3-0,7 % агара. Агар - продукт переработки морских водорослей, плавится при 80-86С, затвердевает при 40С.

По целевому назначению. Основные среды - триптические гидролизаты мясных продуктов, крови животных или казеина, из которых готовят жидкую (питательный бульон) и плотную (питательный агар) среды.

Элективные среды - для выделения и накопления микробов определенного вида из материалов, содержащих постороннюю микрофлору (рост стафилококков - при повышенной концентрации NaCl, холерного вибриона - в щелочной среде).

Дифференциально-диагностические среды - для разграничения отдельных видов микробов. Разные виды бактерий различаются между собой по биохимической активности (неодинаковый набор ферментов).

Синтетические среды - химически чистые вещества: аминокислоты, минеральные соли, углеводы, витамины. Полусинтетические среды - пептон, дрожжевой экстракт. Эти среды применяют при получении антибиотиков, вакцин.

2. Неспецифические факторы защиты.

Механические факторы. Кожа и слизистые оболочки механически препятствуют проникновению микробов и АГ в организм. АГ могут попадать в организм при заболеваниях и повреждениях кожи (травмы, ожоги, воспалительные заболевания, укусы насекомых, животных), и через нормальную кожу и слизистую оболочку, проникая между клетками или через клетки эпителия (вирусы). Механическую защиту осуществляет реснитчатый эпителий верхних дыхательных путей, т.к. движение ресничек постоянно удаляет слизь вместе с попавшими в дыхательные пути инородными частицами и микробами.

Физико-химические факторы. Антимикробные свойства: уксусная, молочная, муравьиная кислоты, выделяемые потовыми и сальными железами кожи; соляная кислота желудочного сока; протеолитические ферменты в жидкостях и тканях организма.

Фермент лизоцим - протеолитический фермент мурамидаза, разрушает клеточную стенку бактерий и других клеток, вызывая их гибель и способствуя фагоцитозу. Лизоцим вырабатывают макрофаги и нейтрофилы. Содержится во всех секретах, жидкостях и тканях организма (кровь, слюна, слезы, молоко, кишечная слизь, мозг). Снижение уровня фермента - возникновение инфекционных воспалительных заболеваний.

Иммунобиологические факторы.

Гуморальные факторы неспецифической резистентности - белки, содержащиеся в крови и жидкостях организма. К ним относятся белки системы комплемента, интерферон, трансферрин, β-лизины, белок пропердин, фибронектин.

Белки системы комплемента неактивны, но приобретают активность в результате последовательной активации и взаимодействия компонентов комплемента. Интерферон оказывает иммуномодулирующий, пролиферативный эффект и вызывает в клетке, инфицированной вирусом, состояние противовирусной резистентности. β -Лизины вырабатываются тромбоцитами и обладают бактерицидным действием. Трансферрин конкурирует с микроорганизмами за необходимые для них метаболиты, без которых возбудители не могут размножаться. Пропердин участвует в активации комплемента и других реакциях. Сывороточные ингибиторы крови (р-липопротеины) инактивируют многие вирусы в результате неспецифической блокады их поверхности.

Фибронектин вместе с АТ взаимодействуют с поверхностью микроорганизмов, способствуя их фагоцитозу, играя роль опсонинов.

NK-клетки - популяция лимфоцитоподобных клеток (большие гранулосодержащие лимфоциты), обладающие цитотоксическим действием против чужеродных клеток (раковых, клеток простейших и клеток, пораженных вирусом).