2. Реакция агглютинации.

АГ в виде частиц (микробные клетки, эритроциты) склеиваются с АТ. Проявляется образованием хлопьев или осадка. Компоненты: 1. АГ (агглютиноген); 2. АТ (агглютинин); 3. Электролит (изотонический раствор NaCl).

Варианты РА: развернутая, ориентировочная, непрямая. Реакция агглютинации

РА используют для: 1. Определения АТ в сыворотке крови больных (бруцеллез - реакции Райта, Хеддельсона; брюшной тиф и паратифы - реакция Видаля); 2. Определения возбудителя, выделенного от больного; 3. Определения групп крови с использованием моноклональных АТ против алло-АГ эритроцитов.

Развернутая реакция агглютинации для определения АТ: к разведениям сыворотки крови больного добавляют диагностикум (взвесь убитых микробов,) и через несколько часов инкубации при 37С отмечают наибольшее разведение сыворотки (титр сыворотки), при котором произошла агглютинация (образование осадока).

Реакция агглютинации с О-диагностикумом (бактерии, убитые нагреванием, сохранившие термостабильный О-АГ) - мелкозернистая агглютинация. Реакция агглютинации с Н-диагностикумом (бактерии, убитые формалином, сохранившие термолабильный жгутиковый Н-АГ) - крупнохлопчатая и протекает быстрее.

Ориентировочная реакция агглютинации для определения возбудителя: применяют диагностические АТ (агглютинирующую сыворотку), т.е. проводят серотипирование возбудителя. Проводят на предметном стекле. К капле диагностической агглютинирующей сыворотки в разведении 1:10 или 1:20 добавляют чистую культуру возбудителя. Рядом ставят контроль: вместо сыворотки наносят каплю раствора натрия хлорида. При появлении в капле с сывороткой и микробами хлопьевидного осадка ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках с увеличивающимися разведениями агглютинирующей сыворотки, к которым добавляют по 2-3 капли взвеси возбудителя. Агглютинацию учитывают по количеству осадка и степени просветления жидкости. Реакция (+), если агглютинация отмечается в разведении, близком к титру диагностической сыворотки. Одновременно учитывают контроли: сыворотка, разведенная изотоническим раствором NaCl, должна быть прозрачной, взвесь микробов в том же растворе - равномерно мутной, без осадка.

Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА): 1. Для обнаружения полисахаридов, белков, экстрактов бактерий, риккетсий и вирусов, комплексы которых с агглютининами в обычных РА увидеть не удается; 2. Для выявления АТ в сыворотках больных к этим высокодисперстным веществам и мельчайшим микроорганизмам. РНГА - реакция, в которой АТ взаимодействуют с АГ, предварительно адсорбированными на инертных частицах (латекс, целлюлоза, полистерол, оксид бария). В РНГА в качестве носителя используют нагруженные АГ эритроциты, которые склеиваются в присутствии специфических АТ к данному АГ и выпадают в осадок. Сенсибилизированные АГ эритроциты используют в РНГА как эритроцитарный диагностикум для обнаружения АТ (серодиагностика).

3. Спирохеты: борелии, лептоспиры.

Спирохеты - тонкие, спирально завитые бактерии длиной до сотен микрометров, подвижные, грам-, хемоорганотрофы. Медицинское значение - род Treponema, Borrelia, Leptospira, Spirillum.

Род Borrelia. Возбудители возвратных тифов (рекуррентных лихорадок) и боррелиозов.

Морфология и классификация: Имеют до 10 неправильной формы крупных завитков, с вращательно-поступательным характером движений. Анаэробы, требующие сложных сред для культивирования.

B.recurrens передается человеку вшами (эпидемический или вшивый возвратный тиф). 2 группы боррелиозов человека: Аргасовые клещевые боррелиозы (12 видов боррелий); Иксодовые клещевые боррелиозы (B.burgdorferi, B.garinii, B.afzelii).

Культуральные свойства: Необходимы факультативно-анаэробные условия, температура 33С, специальные среды (BSK-2), содержащие среду 199, глюкозу, альбумин, цистеин, кроличью сыворотку, желатин.

АГ свойства: Имеют перекрестно- реагирующие АГ с другими спирохетами, родо - и видоспецифические АГ. Выделяют H- (жгутиковые) флагеллиновые АГ (слабая специфичность) и поверхностные белковые АГ (OspA, OspC, более специфичны, используют для межвидовой и внутривидовой идентификации).

Патогенез: После присасывания клеща со слюной попадают в макроорганизм, размножаются во входных воротах инфекции, поражая кожу (эритема) и ближайшие лимфоузлы (фаза первичной адаптации). Преодолев кожный и лимфатический барьеры, попадают в кровь (спирохетемия), проявляющаяся общетоксическим синдромом (стадия первичной диссеминации). Затем проникают в гематотканевые барьеры (через гематоэнцефалитический барьер) и вызывают поражение различных органов и систем.

Эпидемиология: ИКБ - облигатно-трансмиссивные природноочаговые инфекции, распространенные в умеренном климатическом поясе северного полушария, связанные с присасыванием клещей Ixodes. Переносчики - клещи I.reticulatus (таежный клещ), I.ricinus (европейский лесной клещ).

Лабораторная диагностика: Выделяют с использованием среды BSK2 у больных из очагов кожных поражений, из крови и спинно-мозговой жидкости, при исследовании переносчиков и теплокровных хозяев (из мочевого пузыря) в природных очагах.

Выявляют световой (окраска по Романовскому-Гимзе), темнопольной, люминесцентной микроскопиями и ПЦР.

Серологическая диагностика: Реакция непрямой иммунофлюоресценции с корпускулярным АГ B.afzelii, позволяющим выявлять АТ к боррелиям группы ИКБ.

Лечение: Предупредительная терапия (при положительных результатах исследования присосавшегося клеща) и лечение больных ИКБ тетрациклинами, пенициллинами и цефалоспоринами.

Род Leptospira. Возбудители зоонозной острой бактериальной инфекции, характеризующейся волнообразной лихорадкой, интоксикацией, поражением капилляров печени, почек, ЦНС.

Возбудитель - L. Interrhogans,семейство Leptospiraceae, poд Leptospira.

Морфология: Тонкие спирохеты, с изогнутыми концами. Двигательный аппарат - фибриллы. Различимы при микроскопии в темном поле и фазово-контрасте. Цист не образуют.

Культуральные и биохимические свойства: Аэробы. Источник углерода и энергии - липиды. Каталаза-и оксидазаположительны. Культивируются на питательных средах, содержащих сыворотку или сывороточный альбумин, при температуре 30С. На жидкой питательной среде - отсутствие помутнения. Делятся поперечным делением. Растут медленно.

АГ структура: Содержат общеродовой АГ белковой природы, выявляемый в PCК, а также вариантоспецифический поверхностный АГ липополисахаридной природы, выявляемый в РА. Основной таксон - серовар. Серовары объединены в серогруппы (25 серогрупп).

Резистентность: Чувствительны к высыханию, нагреванию, низким значениям рН, дезинфицирующим веществам. Кипячение убивает микроб мгновенно.

Эпидемиология. Природно-очаговый зооноз. Передача - фекально-орально. Источник - грызуны, домашние животные.

Патогенез и клиника заболевания: Инкубационный период 7-10 дней. Входные ворота - слизистые оболочки пищеварительного тракта, поврежденная кожа. Проникнув в организм, микроб с кровью разносится к органам ретикулоэндотелиальной системы (печень, почки), где размножается и вторично поступает в кровь.

Поражает капилляры печени, почек, ЦНС.

Иммунитет: Стойкий, гуморальный, серовароспецифический.

Микробиологическая диагностика. Материал - кровь, спинномозговая жидкость, моча, сыворотка крови. Бактериоскопический (обнаружение лептоспир в темнопольном микроскопе), бактериологический и серологические методы (РА, РСК), ПЦР.

Профилактика и лечение: Вакцинация по эпидемическим показаниям убитой нагреванием, корпускулярной вакциной, содержащей 4 серогруппы возбудителя. Для лечения - антибиотики (пенициллин, тетрациклин) в сочетании с лептоспирозным гетерологичным Ig.

-

-

Б21