1. Морфологические и тинкториальные свойства бактерий. Методы окраски.

Бактерии - микроорганизмы, не имеющие оформленного ядра (прокариоты). Они имеют разнообразную форму и довольно сложную структуру, определяющую многообразие их функциональной деятельности.

Бактерии шаровидной формы (кокки) в зависимости от плоскости деления и расположения относительно друг друга отдельных особей подразделяются на микрококки (отдельно лежащие), диплококки (парные), стрептококки (цепочки), стафилококки (виноградные грозди), тетракокки (четырех кокка) и сарцины (пакеты из 8 или 16 кокков).

Палочковидные (цилиндрические) бактерии располагаются в виде одиночных клеток, дипло- или стрептобактерий.

Извитые формы бактерий - вибрионы и спириллы, спирохеты. Вибрионы имеют вид слегка изогнутых палочек, спириллы - извитую форму с несколькими спиральными завитками.

Размеры бактерий от 0,1 до 10 мкм. Состав бактериальной клетки: капсула, клет стенка, цитоплазматическая мембрана и цитоплазма (содержатся нуклеоид), рибосомы и включения. Некоторые снабжены жгутиками и ворсинками. Некоторые образуют споры, которые располагаются терминально, субтерминально, центрально; превышая поперечный размер клетки, споры придают ей веретенообразную форму.

Методы окраски. Окраска мазка простым методом - окраска препарата одним красителем; сложным методом (по Граму, Цилю – Нильсену, Ауески, Нейссера, Бури-Гинса) включает последовательное использование нескольких красителей и имеет дифференциально-диагностическое значение. Отношение микроорганизмов к красителям - тинкториальные свойства. Специальные методы - для выявления жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических включений.

При простых методах мазок окрашивают одним красителем, используя красители анилинового ряда (основные или кислые). Если красящий ион (хромофор) - катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромофор - анион, то краситель имеет кислые свойства. Кислые красители - эритрозин, кислый фуксин, эозин. Основные красители - генциановый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин. Основные красители более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Из сухих красителей, в виде порошков, готовят насыщенные спиртовые растворы, а из них - водно-спиртовые, которые и служат для окрашивания микробных клеток. Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим - 5-7 мин. Затем мазок промывают водой, высушивают промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки окрашены.

Сложные методы окраски применяют для изучения структуры клетки и дифференциации микроорганизмов. Окрашенные мазки микроскопируют в иммерсионной системе. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту.

2. Реакция антиген - антитело.

Специфическое связывание АГ с соответствующим АТ, приводящее к образованию иммунного комплекса. АГ-АТ реакция обусловлена комплементарностъю взаимодействующих структур и осуществляется под действием гидрофобных, водородных, электростатических связей и сил Ван-дер-Ваальса (АГ при этом соединяется так называемой АГ детерминантой, а АТ - активным центром). Основа формы проявления АГ-АТ реакции - агглютинация, преципитация, нейтрализация токсинов, специфическая опсонизация и иммобилизация бактерий, цитолитические реакции с участием комплемента. АГ-АТ реакция - основа гуморального иммунитета. С неё начинается обезвреживание токсинов, устранение болезнетворных микроорганизмов и собственных клеток с изменённой поверхностной мембраной. В то же время образование иммунных комплексов - это патогенетический механизм анафилаксии, сывороточной болезни и аутоиммунных заболеваний. АГ-АТ реакции, проводимые in vitro, используются в иммунодиагностике - для выявления возбудителя инфекционных заболеваний, типирования АГ гистосовместимости, определения специфичности и интенсивности иммунного ответа, для стандартизации иммунобиологических препаратов.

Серологическая реакция - исследуется реакция АГ (микроба, вируса, чужеродного белка) с АТ сыворотки крови. Серологические реакции используют при переливании крови, для определения групп крови, установления видовой и индивидуальной специфичности белков.

Основная задача серологии - разработка методов получения специфических диагностических и лечебных сывороток, оценка их активности и выяснение механизма действия.