1. Открытие вирусов ивановским.

Вирус - субклеточный инфекционный агент, который может воспроизводиться только внутри живых клеток организма. Они поражают все типы организмов, от растений и животных до бактерий и архей. Вирусы бактерий -бактериофаги.

Со времени опубликования в 1892 г статьи Ивановского, описывающей небактериального патогена растений табака, и открытия в 1898 г Бейеринком вируса табачной мозаики, более 5 тысяч вирусов были детально описаны, хотя существуют ещё миллионы вирусов различных типов. Вирусы обнаружены почти в каждой экосистеме на Земле, являясь одной из наиболее многочисленных форм жизни. Изучает вирусы - вирусология, раздел микробиологии.

2. Иммуноферментный анализ. Иммуноблотинг.

ИФА - выявление АГ с помощью соответствующих им АТ, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой, бета-галактозидазой или щелочной фосфатазой). После соединения АГ с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции - интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул АГ и АТ. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, в частности для диагностики ВИЧ-инфекций, гепатита В, а также определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов.

Твердофазный ИФА - вариант теста, когда один из компонентов иммунной реакции (АГ или АТ) сорбирован на твердом носителе (в лунках планшеток из полистирола). Компоненты выявляют добавлением меченых АТ или АГ. При положительном результате изменяется цвет хромогена. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путем промывания.

I. При определении АТ в лунки планшеток с сорбированным АГ последовательно добавляют сыворотку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом, и субстрат/хромоген для фермента.

II. При определении АГ в лунки с сорбированными АТ вносят АГ (сыворотку крови с искомым АГ), добавляют диагностическую сыворотку против него и вторичные АТ (против диагностической сыворотки), меченные ферментом, а затем субстрат/хромоген для фермента.

Конкурентный ИФА для определения АГ: Искомый АГ и меченный ферментом АГ конкурируют друг с другом за связывание ограниченного количества АТ иммунной сыворотки.

Конкурентный ИФА для определения АТ: Искомые АТ и меченные ферментом АТ конкурируют друг с другом за АГ, сорбированные на твердой фазе.

Иммуноблоттинг - высокочувствительный метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА. Иммуноблоттинг используют для диагностики ВИЧ-инфекции.

АГ возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их из геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. На полоски с блотами АГ наносят сыворотку больного. Затем, после инкубации, отмывают от несвязавшихся АТ больного и наносят сыворотку против Ig человека, меченную ферментом. Образовавшийся на полоске комплекс (АГ + АТ больного + АТ против Ig человека) выявляют добавлением хромогенного субстрата, изменяющего окраску под действием фермента.