Вопрос 75. Возбудитель сапа

1. Морфология возбудителя сапа

2. Биология, кульгпуральные свойства

3. Патогенность и вирулентность

4. Устойчивость во внешней среде

5. Лабораторная диагностика сапа

1. Сап — заразное заболевание цельнокопытных (лошадь, осел, мул), протекающее преимущественно в хронической форме и пе­редающееся человеку. В органах (лимфатические узлы, легкие, печень и др.) изменения возникают в виде типичных санных узелков различной величины.

Морфология возбудителя (Pseudomonas mallei) — палочка с за­кругленными концами, длиной 1—5 мкм, с характерным зерни­стым строением. Бактерия полиморфна: может иметь коккооб-разные, вздутые формы; микроб часто располагается нитями, принимает вид палочек с неправильными контурами. Нити из бактерий средней длины, состоят обычно из 4—8 члеников. Обнаружены фильтрующиеся формы, которые при пассаже на животных восстанавливаются в типичные формы. Палочка са­па грамотрицательна, окрашивается водно-спиртовыми раствора­ми анилиновых красок со щелочными растворами, со щелоч­ными протравами. Наблюдаются биполярные и неравномерно окрашенные палочки. При электронной микроскопии видны светлые участки протоплазмы и плотные гранулы. Спор и кап­сул палочка не образует. Является факультативным аэробом. 2. Биология, культуральные свойства. Микроб неприхотлив к пи­тательным средам. Его выращивают на мясо-пептонном агаре и бульоне, картофеле. Рост на средах значительно усиливается при прибавлении к ним до 5% глицерина. Температурный оп­тимум 37 "С, ниже 20 и выше 45 °С сапная палочка не развивается. Микроб хорошо растет при слабокислой, нейтральной и слабощелочной реакции среды.

Картофельная среда считается дифференцирующей. Рост возбу­дителя сапа особенно характерен: к 3-му дню образуется рав­номерной слизистый янтарно-коричневый, медообразный на­лет, матовый или часто блестящий. К 6—8-му дню янтарная просвечивающая культура приобретает красноватый оттенок, прозрачность налета теряется. На мясо-пептонном агаре с 2% глицерина рост микроба обычно начинается через сутки. Сен­ная культура на агаре представляет собой вначале просвечи­вающий серовато-белого цвета налет с перламутровым блеском. В мясо-пептонном бульоне с 2—4% глицерина сначала возни­кает равномерная муть, затем выпадает слизистый серо-белый осадок, поднимающийся при легком встряхивании пробирки. К 10-му дню на поверхности появляется сероватая слизистая пленка. Сенный микроб свертывает молоко медленно, чаще на 6—8-й день. Желатин не разжижает, протеолитическое дейст­вие выявляется лишь при малых концентрациях желатина. Сапная палочка развивается также на безбелковых синтетиче­ских средах, в которых источниками азота и углерода служат аммонийные соли органических и угольной кислот. Индол не образуется. Лактозу и глюкозу расщепляет с выделением ки­слоты без газообразования.

3. Палочки патогенны для цельнокопытных животных. Лошадей удается заражать подкожно и путем скармливания малыми ко­личествами сапной культуры. Лошади часто болеют хрониче­ской формой сапа. Крупный рогатый скот, овцы и козы в ес­тественных условиях сапом не болеют.

Весьма резистентны к сапу свиньи, птицы, крысы. Из лабора­торных животных сапом заражаются морские свинки, при подкожном заражении они гибнут спустя 10—15 дней, иногда даже через 2—3 мес. В качестве лабораторного животного мож­но использовать кошку, которая очень чувствительна к зара­жению. Сап у нее протекает в форме септицемии. Кролики маловосприимчивы, несколько более чувствительны молодые животные. Белая мышь сапом не заражается.

4. Палочка сапа во внешней среде довольно устойчива: в воде, поч­ве сохраняется до 1,5 мес, в выделениях больных, трупах жи­вотных, павших от сапа, — несколько недель.

В замороженных материалах сапный микроб весьма устойчив. Быстро гибнет при нагревании (при температуре 55 °С в тече­ние 10 мин, при кипячении - через несколько минут). Высу­шивание ведет к гибели микроба через 1—2 недели, губительно действуют на него ультрафиолетовые лучи. Палочка чувстви­тельна к воздействию дезинфицирующих веществ (хлорная из­весть, формалин, щелочи, марганцево-кислый калий, сулема).

5. Лабораторная диагностика сапа: материалом для исследования могут служить:

• стерильно взятые носовые выделения;

• гнойное отделяемое язв;

• пунктаты подкожных абсцессов;

• кусочки органов из трупа;

• лимфатические узлы.

Консервирование материала возможно 30%-ным стерильным глицерином.

Микроскопическое исследование: микроскопия мазков из пато­логического материала ввиду отсутствия специфических мето­дов окраски бактерии сапа имеет ограниченное диагностиче­ское значение, но важна для исключения других возбудителей. Мазок окрашивают по Граму и по Романовскому-Гимзе. Бактериологическое исследование: посевы материала произво­дят на глицеринизированный картофель, мясо-пептонный агар и бульон. На картофельно-глицериновой среде через 3—4 дня наблюдается характерный рост возбудителя сапа в виде янтар-но-коричневого цвета слизистого налета. К 6-8-му дню куль­тура становится мутной, красноватого оттенка. Чистую культу­ру получить не всегда удается, так как посторонняя флора препятствует росту палочки сапа. При хроническом сапе бак­териологическое исследование часто дает отрицательный резуль­тат. Для идентификации возбудителя учитывают его:

• биохимические свойства;

• агглютинабельность;

• патогенность для лабораторных животных.

Биологической пробой заражаются морские свинки (самцы), хо­мяки, кошки. Исследуемый материал можно вводить подкожно (если он не загрязнен), но более надежно внутрибрюшное за­ражение. Через 3—5 дней у зараженного самца развивается орхит. Через 8—15 дней большая часть свинок погибает. На высоте заболеваний свинок забивают и производят бактериологиче­ское исследование органов и тканей.

Серологическое исследование: основным методом исследования служит реакция связывания комплемента (РСК); используют также реакцию пассивной гемагглютинации. РСК более чувстви­тельна. Исследование проводят в динамике с учетом нараста­ния титра антител. При хроническом сапе РСК нередко бывает отрицательной.

Аллергическая проба имеет важное значение для подтверждения диагноза сапа. Внутрикожно или накожно на предплечье вво­дят 0,1 мл маленна (фильтрат 4-недельной бульонной культуры палочки сапа, разведенной в 100 раз). В положительном случае через 24—48 ч на месте введения маленна появляется гипере­мия, припухлость, болезненность. При этом может наблюдаться общая реакция в виде недомогания, повышение температуры тела. Проба становится положительной с 10—15-го дня болезни.