
- •Модель синтеза ДНК включает несколько этапов:
- •Раскручивание
- •Белки геликазы DnaB и
- •Инициация синтеза ДНК
- •Инициация синтеза ДНК начинается, когда праймаза строит короткий РНК праймер в направлении 5'
- •Прерывистый и непрерывный синтез ДНК
- •Поскольку полимеризация с участием ДНК полимеразы III происходит только в
- •Конкурентный синтез ведущей и отстающей цепей ДНК
- •Полимеризация происходит одновременно на обеих цепях одним холоферментом ДНК-полимеразы III. Отстающая матричная цепь
- •Проверка и коррекция ошибок в процессе репликации ДНК
- •ДНК-полимераза исправляет ошибки
- •Основные этапы синтеза ДНК в бактериях.
- •Синтез ДНК у эукариот
- •Эукариотические ДНК-полимеразы
- •Полимеразы и особенно важны для синтеза ядерной ДНК. Две из 4 субъединиц -полимеразы
- •Множество репликонов у эукариот – больше молекул ДНК- полимераз. У E coli 15
- •Три эукариотических ДНК полимеразы катализируют реакцию репликации ДНК,
- •Репликация ДНК, теломеры и теломераза
- •Полуконсервативный синтез лидирующей цепи в линейной
- •Теломерная ДНК на концах линейных хромосом эукариот состоит из коротких тандемных повторов: последовательность
- •В дальнейшем показано, что теломераза добавляет TTGGGG даже к концам хромосом, не несущим
- •При старении клеток происходит укорачивание теломер. В 1961 г. Л. Хейфлик обнаружил, что
- •Теломераза
- ••Теломераза активна в клетках
- •Рекомбинация ДНК
- •Гомологичная рекомбинация в течение мейоза.
- •Гомологичная рекомбинация.
- •После разделения дуплексов и поворота их по отношению друг к
- •Генная конверсия
- •Генная конверсия – следствие рекомбинации, в процессе которой основания спариваются ошибочно. Неправильно спаренные
- •Несоответствие пар оснований происходит в одном из двух гомологов во время образования гетеродуплекса
- •Если пара Г-С на одном из гомологов относится к мутантному аллелю, а пара
- •Генетический код
- •Центральная догма
- •Центральная догма
- •Генетический код
- •Первые представления о генетическом коде
- •Обоснование триплетности кода Гамовым
- •Мутация одиночной нуклеотидной вставки в ген фага T4 вызывает сдвиг рамки считывания всех
- •Расшифровка кода
- •Неклеточный синтез белков
- •В качестве первого шага в расшифровке генетического кода были использованы короткие искусственные последовательности
- •Смесь кополимеров
- •Расчет частоты возможных кодонов, полученных с использованием
- •Метод связывания триплетов
- •Инкубация меченой аминоацил-тРНК с синтезированными триплетами РНК и рибосомами на фильтре, задерживающем только
- •Анализ связывания триплетов.
- •Около 50 из 64 кодонов были установлены с использованием анализа связывания триплетов.
- •Повторяющиеся кополимеры
- •Корана (Nobel 1968) разработал методику для синтеза длинных молекул РНК, состоящих из коротких
- •Повторяющиеся кополимеры дают предсказуемые триплеты кодонов.
- •Почти универсальный генетический код служит словарем для перевода с языка мРНК на язык
- •Во многих случаях первые две буквы генетического кода более критичны для определения аминокислоты.
- •Гипотеза качания предполагает, что для кодирования аминокислот 61 триплетом требуется не менее 30
- •Инициация и терминация синтеза белка
- •Универсальность генетического кода
- •Отклонения от универсального кода в митохондриях разных организмов
- •1985 г. – у бактерий Mycoplasma и некоторых простейших жгутиковых – еще несколько
- •Некоторые исключения из генетического кода находятся в митохондриальной ДНК (mtDNA), а также в
- •Свойства кода
- •Свойства кода
- •Свойства кода
- •Свойства кода
- •Следствие отсутствия знаков препинания между кодонами – мутации сдвига рамки считывания
- •Свойства кода
- •Свойства кода
- •5. Однозначность
- •Следствие вырожденности кода – синонимические мутации
- •Свойства кода
- •Свойства кода
- •Свойства кода
- •Свойства кода

Несоответствие пар оснований происходит в одном из двух гомологов во время образования гетеродуплекса в мейозе.
Во время эксцизионной репарации, одно из двух несоответствий удаляется и синтезируется комплементарное основание, что приводит к возможной конверсии генов.
Если пара Г-С на одном из гомологов относится к мутантному аллелю, а пара А-Т к аллелю дикого типа. Конверсия пары Г-С в А-Т приведет к реверсии дикого типа
Генная конверсия позволяет объяснить явление у грибов – при скрещивании штаммов дикого типа и мутантных по этому же гену штаммов образуются равные количества нормальных и мутантных спор, но иногда бывает 3 к 1 или 1 к 3. Генная конверсия встречается также в процессе митоза у грибов и дрозофилы
Генетический код

Центральная догма
репликация
транскрипция трансляция
ДНК
РНК
белок
Передача |
Реализация информации |
информации |
в одной клетке |
в поколениях |
|
делящихся |
|
клеток |
|

Центральная догма
репликация
транскрипция трансляция
ДНК
РНК
белок
Принцип |
Компле- |
Генетический |
копирования |
ментарность |
код |
Генетический код
•Способ записи информации о первичной структуре белков через последовательность нуклеотидов ДНК и РНК.
•«Словарь» перевода с языка нуклеиновых кислот на язык белков.
•Полностью расшифрован к 1966
Первые представления о генетическом коде
Еще в 50-х гг. считалось, что ДНК кодирует белки в процессе своего синтеза без посредников.
Предполагалось, что информация из ДНК в ядре переносится к рибосомам, РНК которых и служит матрицей для синтеза белков, однако было показано, что имеется нестабильная молекула-посредник, а рРНК - стабильная молекула.
В 1961 г. Ф. Жакоб и Ж. Моно доказали существование матричной РНК или РНК-посредника. После открытия мРНК стало ясно, что генетический код из ДНК транслируется в аминокислотную последовательность посредством РНК.
Обоснование триплетности кода Гамовым
Моноплетный
Дуплетный
Триплетный
н. а.к. |
Сколько а.к. можно |
|
закодировать |
1 → 1 |
4 |
2 → 1 |
16 |
3 → 1 |
64 |

Мутация одиночной нуклеотидной вставки в ген фага T4 вызывает сдвиг рамки считывания всех последующих кодонов, и потенциально неправильные аминокислоты.
В результате белки, как правило, нефункциональны, и фаг T4 с такой мутацией рамки считывания не может репродуцироваться в E. coli.
Если три вставки происходят вместе, рамка считывания восстанавливается после вставки.
Такая мутация производит белок с достаточной функциональностью, чтобы
восстановить способность фага к заражению E. coli.
Триплетность кода подтверждена экспериментально – делеция или вставка трех нуклеотидов не сдвигает рамку считывания последовательности ДНК во время транкрипции у фага T4 , если нуклеотидов один или два, то возникает мутация

Расшифровка кода
Ниренберг и Маттеи (Nobel 1968) производили последовательности РНК с высокой концентрацией рибонуклеозид дифосфатов. В эксперименте использовалась неклеточная система синтеза белков in vitro вместе с ферментом полинуклеотид фосфорилазой, участвующей в синтезе иРНК, которая стала матрицей для синтеза белков
Продуцированную последовательность нуклеотидов можно регулировать путем изменения концентрации rNDPs, и она служит как бы "посредником« для синтеза полипептидных цепей in vitro..