
- •Молекулярные основы наследственности: структура ДНК и гена
- •Молекулярная биология
- •Генетическая информация
- •Принципы передачи информации
- •За некоторым исключением ДНК служит генетическим материалом всех живых организмов. Благодаря структуре молекул
- •Генетическая информация, содержащаяся в генах, определяет признаки потомства, процессы дифференцировки и развития организмов.
- •Характеристика генетического материала
- •Экспрессия генетической информации – это часть информационного потока в клетках.
- •Центральная догма молекулярной биологии –
- •Центральная догма Молекулярной Генетики
- •Центральная догма
- •Матричные синтезы, разрешенные по центральной догме
- •Центральная догма
- •Запрещенные
- ••По матричному принципу синтезируются все
- •Второй принцип матричных синтезов – принцип усиления
- •Из-за принципа усиления изменения в молекуле ДНК реализуются на макроуровне
- •Генетический материал служит источником изменчивости организмов, обусловленной мутациями. Меняется химический состав ДНК –
- •Первые исследования генетического материала
- •Доказательство ведущей роли ДНК
- •Опыты по трансформации
- •Вирулентные штаммы Diplococcus pneumoniae обладают капсулой, которая
- •Гриффит показал, что когда мышам вводили смесь живых авирулентных бактерий, смешанных с убитых
- •Далее было показано, что этот процесс происходит и in vitro. Эвери, Маклеод и
- •Эйвери, Маклеод и Маккарти изолировали трансформирующий фактор путем центрифугирования, чтобы собрать клетки, а
- •Т-четный фаг, такой как T2 и T4, адсорбируется на клеточной стенке своего хозяина
- •Эксперимент Херши-Чейз
- •Hershey (Nobel 1969) и Chase
- •После заражения, встряхиванием отделяют меченые фаговые оболочки от бактерий и разделяют оба компонента
- •Прямые и непрямые доказательства значения ДНК у эукариот
- •У эукариот известно, что хромосомы содержат генетический материалl. Таким
- •Непрямое доказательство - мутагенез
- •Прямое доказательство – анализ рекомбинантных ДНК
- •РНК в качестве генетического материала некоторых вирусов
- •РНК сердцевины и белковая оболочка вируса табачной мозаики (TMV) и вируса мозаики подорожникa
- •Химия нуклеиновых кислот
- •Нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК) состоят из повторяющихся единиц
- •Азотистые основания могут быть пуринами или пиримидинами; каждому
- •Каждому атому углерода в сахаре пентозе присваивается номер со знаком (').
- •Связь двух
- •Нуклеотид - нуклеозидмонофосфат (NMP), с одной фосфатной
- •Молекула РНК содержит 100-100 000 нуклеотидов, ДНК
- •Химический состав оснований
- •Чаргафф использовап бумажную хроматографию для сбора данных по составу оснований в ДНК многих
- •Модель Уотсона-Крика
- •Две цепи имеют антипараллельный сахаро-фосфатный остов, соединенный ступенями азотистых пар оснований, число которых
- •Специфичность спаривания между соответствующими пуриновыми и пиримидиновыми основаниями обусловлена комплементарностью – химическим сродством,
- •Две цепи ДНК проходят в
- •Альтернативные формы ДНК
- •A-DNA немного более компактна чем
- •Структура РНК
- •В РНК пентозный сахар – рибоза и урацил (U) вместо тимина (T) образует
- •Водородные связи и анализ структуры нуклеиновых кислот
- •Двухцепочечная ДНК
- •Методы молекулярной гибридизации
- •Двуцепочечная ДНК транскрибирует с образованием одноцепочечного транскрипта РНК, комплементарного одной из двух цепей
- •Кинетика реассоциации и повторяющаяся ДНК
- •Денатурированные, одноцепочечные фрагменты ДНК могут реассоциировать в комплементарные двойные цепи. Кривая концентрации
- •Геном фага Т4 больше генома MS2, геном E. coli больше генома Т4 При
- •Электрофорез нуклеиновых кислот
- •Репликация и синтез ДНК
- ••Универсальный биологический процесс передачи генетической информации в поколениях клеток и организмов, благодаря созданию
- •Место репликации в клеточном цикле
- •Способ репликации ДНК
- •ДНК синтезируется раскручиванием спирали, а затем повторением каждой цепи с помощью правила спаривания
- •Эксперимент Мезелсона-Сталя
- •Ожидаемые результаты
- •Полуконсервативная репликация у эукариот
- •Точки начала репликации, репликационные вилки и единицы репликации
- •Двунаправленная репликация хромосомы E. coli стартует в фиксированной точке начала репликации (oriC).
- •Синтез ДНК у микроорганизмов
- •ДНК-полимераза I
- •Энергия для реакции получается при энерговыделяющем гидролизе dNTP, освобождающим неорганический пирофосфат.
- •Элонгация ДНК.
- •ДНК-полимеразы II и III
- •Эти ДНК полимеразы не могут инициировать синтез ДНК, но могут удлинять существующую цепь
- •ДНК-полимеразы – ферменты с 3’-5’-экзонуклеазной активностью, позволяющей достраивать нуклеотиды в одном направлении, а
- •Активная форма ДНК-полимеразы III называется холоферментом, это димер из 10 различных полипептидных субъединиц.

У эукариот известно, что хромосомы содержат генетический материалl. Таким
образом, если генетический материал – это ДНК, должна быть корреляция между количеством ДНК и плоидностью клетки.
Экспериментальные данные ДНК в гаплоидной сперме и диплоидных соматических клетках показывают такую корреляцию, а для белка нет.

Непрямое доказательство - мутагенез
Ультрафиолет (UV) может индуцировать мутации в генетическом материале бактерий,
мутагенность максимальна при 260 nm.
Измерение спектров поглощения показывают, что и ДНК, и РНК абсорбируют ультрафиолет
наиболее сильно при 260 nm, тогда как белки - при 280 nm.
Это подтверждает, что
генетический материал –
нуклеиновые кислоты.
Прямое доказательство – анализ рекомбинантных ДНК
Выделенные фрагменты ДНК, соответствующие специфическим генам эукариот, можно встраивать в бактериальную хромосому и затем наблюдать за экспрессией этих генов в бактерии. Наличие в бактериальной клетке эукариотического продукта – доказательство присутствия и функционирования данного гена в клетке.
РНК в качестве генетического материала некоторых вирусов
У некоторых вирусов носитель генетической информации – РНК.
Пример - вирус табачной мозаики (ВТМ). У этих вирусов репликация генетического материала зависит от наличия РНК- репликазы.
Существует особая группа РНК-содержащих вирусов или ретровирусов. Их РНК служит матрицей для синтеза
комплементарной молекулы ДНК. Это происходит во время обратной транскрипции с участием РНК-зависимой ДНК-полимеразы,
называемой обратной транскриптазой. После этого вирусная ДНК встраивается в геном клетки-хозяина и ранскрибируется с образованием множества копий ретровирусной РНК. Пример ретровирусов – ВИЧ, а также некоторые онкогенные вирусы.

РНК сердцевины и белковая оболочка вируса табачной мозаики (TMV) и вируса мозаики подорожникa (HR) могут быть выделены и реконструированы в «гибриды". Эти гибриды продуцируют листовые поражения, характерные для донора РНК, и потомство вируса также наследует этот фенотип. Таким образом, РНК – генетический материал этих вирусов.
Химия нуклеиновых кислот
Основа нуклеиновых кислот – нуклеотиды, состоящие из 3 компонентов – азотистых оснований, сахара пентозы и фосфатной группы. Азотистых оснований два типа – пурины (аденин и гуанин) – девятичленные бициклические соединения и пиримидины (цитозин, тимин, урацил) – шестичленные моноциклические. Тимин в ДНК соответствует урацилу в РНК.
Сахар в РНК – рибоза, в ДНК – дезоксирибоза.
Нуклеозиды – это азотистое основание и сахар, нуклеотиды – нуклеозиды плюс фосфатная группа. По количеству фосфатных групп различают нуклеозидмонофосфаты (НМФ), нуклеозиддифосфаты (НДФ) и нуклеозидтрифосфаты (НТФ). Трифосфаты – это молекулы- предшественники в синтезе нуклеиновых кислот. АТФ и ГТФ – обеспечивают энергией многие метаболические процессы за счет макроэргических фосфатных связей.

Нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК) состоят из повторяющихся единиц
нуклеотидов.
Каждый нуклеотид состоит из фосфатной группы, сахара, и азотистого основания. 4 типа азотистых оснований в ДНК - аденин (A), тимидин (T),
гуанин (G), и цитозин (C).

Азотистые основания могут быть пуринами или пиримидинами; каждому
атому в кольце присваивается номер.
Пурины с двойным кольцом - аденин (A) и гуанин (G).
Пиримидины с одним кольцом - цитозин (C), тимидин (T), и урацил (U). ДНК и РНК содержат A, C, и G;
только ДНК содержит T, только РНК содержит U.

Каждому атому углерода в сахаре пентозе присваивается номер со знаком (').
Рибонуклеиновые кислоты (RNA) содержат рибозу, 5-углеродный сахар. Дезоксирибонуклеиновые кислоты (DNA) содержат дезоксирибозу, у которой в
положении 2' водород вместо гидроксильной группы.
Сахар рибоза или дезоксирибоза с пуриновым или пиримидиновым основанием в положении 1' называется нуклеозидом.
Нуклеозид с фосфатной группой в положении 5' называется нуклеотидом.
Нуклеозиды и нуклеотиды именуют соответственно специфическому азотистому основанию (A, T, G, C, и U) – части блока.
