Краткие методические рекомендации к проведению занятия

В начале занятия проводятся тестовый контроль исходного уровня знаний студентов и его коррекция. Проверяется выполнение домашнего задания. Затем студенты приступают к выполнению лабораторной работы, используя при этом инструкцию.

После выполнения лабораторной работы необходимо оформить протокол,сделать выводы к работе, которые проверяет и контролирует преподаватель. В конце занятия проводится итоговый контроль, подводятся итоги занятия.

Инструкция к проведению практического занятия по теме «Исследование нормальных и патологических компонентов мочи»

Работа 1. Количественное определение белка в моче по методу Брандберга – Робертса – Стольникова

Принцип методаоснован на реакции Геллера с концентрированной азотной кислотой. Установлено, что в растворах, содержащих 0,033 % белка, т.е. 0,033 г/л, через 2 или 3 минуты образуется характерное белое кольцо после наслаивания мочи на азотную кислоту.

Материальное обеспечение: моча, 50% раствор азотной кислоты, пипетки, штативы, пробирки.

Ход работы.

1. Приготовьте пять пробирок с мочой, разведенной в 10, 20, 30, 40 и 50 раз. Это будет первый ряд пробирок. Объем мочи в каждой пробирке – по 1 мл.

2. Приготовьте пять других пробирок, содержащих по 1 мл 50% раствора азотной кислоты. Это будет второй ряд пробирок.

3. В каждую из пробирок второго ряда осторожно наслаивайте по стенке слегка наклоненной пробирки мочу определенного разведения. Моча в результате меньшей относительной плотности наслаивается на кислоту. На границе двух жидкостей при наличии белка образуется белое кольцо, толщина и быстрота появления которого зависят от концентрации белка.

4. Результат учитывайте по пробирке с максимальным разведением мочи, при котором в пробирке появилось едва заметное кольцо между 2-й и 3-й минутой после наслаивания мочи на азотную кислоту. Например, кольцо появилось после второй минуты при разведении мочи в 30 раз. Следовательно, содержание белка в ней составляет: 0,033 х 30 = 0,099г/л.

Работа 2. Обнаружение кетоновых тел (ацетона) с помощью пробы Люголя

Принцип метода. Ацетон и ацетоуксусная кислота в щелочной среде образуют с нитропруссидом натрия соединение оранжево-красной окраски, которое после подкисления уксусной кислотой приобретает вишневый цвет.

Материальное обеспечение: моча, 10% раствор гидроксида натрия, 10% раствор нитропруссида натрия, концентрированная уксусная кислота.

Ход работы.

1. Налейте в пробирку 2 мл мочи.

2. Добавьте 3 – 4 капли 10% раствора нитропруссида натрия и 2 – 3 капли раствора 10% гидроксида натрия. Появляется оранжево-красное окрашивание.

3. Далее добавляйте в пробирку по каплям концентрированную уксусную кислоту. Окрашивание станет вишневым. Если ацетон в моче отсутствует, то при подкислении уксусной кислотой оранжево-красное окрашивание переходит в желтое (реакция на креатинин в моче).

Работа 3. Обнаружение ацетоуксусной кислоты в моче по реакции Герхарда

Принцип метода: ацетоацетат образует с треххлористым железом соединение, окрашенное в вишневый цвет.

Материальное обеспечение: моча, 5% раствор хлорного железа (ІІІ), пробирки, пипетки, штативы.

Ход работы.

1. Налейте в пробирку 5 мл мочи.

2. Далее по каплям добавляйте в пробирку 5% раствор хлорного железа, выпадает осадок фосфатов железа._,. При наличии ацетоацетата от дальнейшего добавления хлорного железа появляется вишнево-красное окрашивание (реакция на енолы), постепенно бледнеющее при стоянии вследствие самопроизвольного декарбоксилирования ацетоуксусной кислоты.

Работа 4. Обнаружение сахара в моче

0. Проба Троммера.

Принцип метода основан на способности альдегидоспиртов восстанавливать металлы.

Материальное обеспечение: моча, 30% раствор едкого натра, 7% раствор сульфата меди, водяная баня, термометр, пробирки, пипетки, штативы.

Ход работы

К 1 мл мочи добавьте 5 капель 30% раствора едкого натра и несколько капель 7% раствора сульфата меди до появления неисчезающего помутнения раствора, вызванного наличием гидроокиси меди. При нагревании до кипения выпадает красный осадок закиси меди Си₂О.