Подготовка у универсиаде 2012 / 2009 МолБиол Малыгин

аМЛˆЛ‡ˆЛfl ·ВОНУ‚У„У ТЛМЪВБ‡ (Ъ ‡МТОflˆЛЛ) ‚ ˝Ы- Н‡ ЛУЪЛ˜ВТНУИ НОВЪНВ – ТОУКМУ У „‡МЛБУ‚‡ММ˚И, ПМУ„УТЪЫФВМ˜‡Ъ˚И Ф УˆВТТ, ‚ НУЪУ УП Ы˜‡ТЪ‚ЫВЪ ·УО¸¯УИ М‡·У ·ВОНУ‚˚ı Щ‡НЪУ У‚ (ТП. [1]). З УТМУ‚МУП М‡ ˝ЪУИ ТЪ‡‰ЛЛ Ф УЛТıУ‰ЛЪ В„ЫОflˆЛfl ˝НТ- Ф ВТТЛЛ Пкзд, НУЪУ ‡fl УТЫ˘ВТЪ‚ОflВЪТfl ‚ БМ‡˜Л- ЪВО¸МУИ ТЪВФВМЛ ˜В ВБ НВФ-ТЪ ЫНЪЫ Ы, ‡ТФУОУКВММЫ˛ М‡ 5'-НУМˆВ НОВЪУ˜М˚ı Пкзд ˝ЫН‡ ЛУЪ. ЗПВТЪВ Т ЪВП ЫТЪ‡МУ‚ОВМУ, ˜ЪУ ПМУ„ЛВ кзд-ТУ‰В К‡˘ЛВ ‚Л ЫТ˚ У·ıУ‰flЪ ˝ЪЛ НУМЪ УО¸М˚В ПВı‡МЛБП˚ ·О‡- „У‰‡ fl ЪУПЫ, ˜ЪУ ‚ 5'-МВЪ ‡МТОЛ ЫВПУИ У·О‡ТЪЛ (5'-знй) Лı „ВМУП‡ М‡ıУ‰flЪТfl УТУ·˚В ‚˚ТУНУТЪ ЫНЪЫ Л У‚‡ММ˚В Ы˜‡ТЪНЛ, Ъ‡Н М‡Б˚‚‡ВП˚В IRES-˝ÎÂ- ÏÂÌÚ˚ (ÓÚ ‡Ì„Î. Internal Ribosome Entry Site) (ТП., М‡- Ф ЛПВ [2–4]). щЪЛ ТЪ ЫНЪЫ М˚В ˝ОВПВМЪ˚ ФУБ‚УОfl- ˛Ъ Ъ ‡МТОЛ У‚‡Ъ¸ МВНВФЛ У‚‡ММ˚В ‚Л ЫТМ˚В кзд ФУ ПВı‡МЛБПЫ ‚МЫЪ ВММВИ ЛМЛˆЛ‡ˆЛЛ ‚ УЪТЫЪТЪ‚ЛВ ПМУ„Лı Н‡МУМЛ˜ВТНЛı Щ‡НЪУ У‚ ЛМЛˆЛ‡ˆЛЛ Ъ ‡МТОflˆЛЛ. д М‡ТЪУfl˘ВПЫ ‚ ВПВМЛ ‚ ·УО¸¯ВИ ТЪВФВМЛ ЛБЫ- ˜ВМ‡ IRES-Б‡‚ЛТЛП‡fl ЛМЛˆЛ‡ˆЛfl Ъ ‡МТОflˆЛЛ „ВМУПМУИ кзд ‚Л ЫТ‡ „ВФ‡ЪЛЪ‡ л (HCV, Hepatitis C Virus) [5, 6], IRES-˝ОВПВМЪ НУЪУ УИ (‚ ‰‡О¸МВИ¯ВП HCV IRES) У·О‡‰‡ВЪ ЫМЛН‡О¸МУИ ТФУТУ·МУТЪ¸˛ Ф У˜МУ Т‚flБ˚‚‡Ъ¸Тfl Т 40S ТЫ·˜‡ТЪЛˆВИ Л·УТУП˚ ˜ВОУ‚ВН‡, У·ВТФВ˜Л‚‡fl Ф ‡‚ЛО¸МУВ ‡ТФУОУКВМЛВ ТЪ‡ ЪУ‚У„У AUG-НУ‰УМ‡ ‚Л ЫТМУИ кзд ‚·ОЛБЛ к-Т‡ИЪ‡ ·ВБ Ы˜‡- ТЪЛfl Щ‡НЪУ У‚ ЛМЛˆЛ‡ˆЛЛ Ъ ‡МТОflˆЛЛ [7].

л ФУПУ˘¸˛ Н ЛУ˝ОВНЪ УММУИ ПЛН УТНУФЛЛ (Н ЛУ-ще) НУПФОВНТУ‚ HCV IRES Ò 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ‡- ÏË Ë 80S Ë·ÓÒÓχÏË ÔÓ͇Á‡ÌÓ, ˜ÚÓ ‡Á΢Ì˚ ÒÚ ÛÍÚÛ Ì˚ ‰ÓÏÂÌ˚ HCV IRES ÔÓÍ ˚‚‡˛Ú Ó·¯Ë - Ì˚È Û˜‡ÒÚÓÍ 40S ТЫ·˜‡ТЪЛˆ˚ ‚ У·О‡ТЪЛ “„УОУ‚˚” Л “ФО‡ЪЩУ П˚” [8, 9]. йФ В‰ВОВМЛВ НУПФУМВМЪУ‚ 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ˚, ү˂‡˛˘ËıÒfl Ò HCV IRES [10] ЛОЛ Т В„У Ф УЛБ‚У‰М˚П, ТУ‰В К‡˘ЛП УТЪ‡ЪНЛ 4-ЪЛУЫ Л‰Л- М‡, ТЪ‡ЪЛТЪЛ˜ВТНЛ Б‡ПВ˘‡˛˘ЛВ УТЪ‡ЪНЛ Ы Л‰ЛМ‡ [11], ‚˚fl‚ЛОУ НУМЪ‡НЪ˚ HCV IRES Т Л·УТУПМ˚ПЛ ·ВОН‡ПЛ S2, S3, S5, S10, S15, S16/S18 Ë S27. зВНУЪУ-˚В ЛБ ˝ЪЛı ·ВОНУ‚ ‚ıУ‰ЛОЛ ‚ ˜ЛТОУ Л·УТУПМ˚ı ·ВОНУ‚, ТФУТУ·М˚ı Т‚flБ˚‚‡Ъ¸Тfl Т HCV IRES ‚ ˆЛЪУФО‡БП‡ЪЛ˜ВТНУП ˝НТЪ ‡НЪВ (S3, S5, S7, S18 Ë 40 (‡Î¸Ú ̇ÚË‚ÌÓ ̇Á‚‡ÌË – SA)) [12]. ç‡ÍÓ̈, ÌÂ- ‰‡‚ÌÓ Ò ÔÓÏÓ˘¸˛ ү˂ÓÍ 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ Ë·ÓÒÓÏ ˜ÂÎÓ‚Â͇ Ò Ô ÓËÁ‚Ó‰Ì˚ÏË HCV IRES, МВТЫ˘ЛПЛ ФВ ЩЪУ ‡ ЛО‡БЛ‰У„ ЫФФ˚ ‚ Б‡‰‡ММ˚ı ФУОУКВМЛflı, ЫТЪ‡МУ‚ОВМУ, ˜ЪУ ТЫ·‰УПВМ IIIe IRES-˝ОВПВМЪ‡ ТУТВ‰ТЪ‚ЫВЪ Т ·ВОН‡ПЛ 40, S3a, S5 Ë S16 [13], ÒÛ·‰ÓÏÂÌ IIId – Ò ·ÂÎ͇ÏË S3a, S14 Ë S16 [14], ·ÂÎÍË S14 Ë S16 ТУТВ‰ТЪ‚Ы˛Ъ Ф Л ˝ЪУП Ъ‡НКВ Т ТЫ·‰УПВМУП IIb [14]. ëÛ·‰ÓÏÂÌ˚ IIId Ë IIIe, ‚ ÓÚ΢ˠÓÚ ‰ÓÏÂ̇ II, Ë„ ‡- ˛Ú Íβ˜Â‚Û˛ Óθ ‚ Ò‚flÁ˚‚‡ÌËË HCV IRES Ò 40S ТЫ·˜‡ТЪЛˆ‡ПЛ [15–17]. лОВ‰У‚‡ЪВО¸МУ, НУМЪ‡НЪЛ Ы- ˛˘ЛВ Т МЛПЛ Л·УТУПМ˚В ·ВОНЛ ПУ„ЫЪ Ы˜‡ТЪ‚У‚‡Ъ¸ ‚ ˝ЪУП Т‚flБ˚‚‡МЛЛ. кВБЫО¸Ъ‡Ъ˚ ЛБЫ˜ВМЛfl Т¯Л‚УН 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ Ò Ô ÙÚÓ ‡ Ë·ÁˉÓ-ÒӉ ʇ˘ËÏË Ô ÓËÁ‚Ó‰Ì˚ÏË HCV IRES [13, 14] ıУ У¯У ТУ„О‡ТЫ- ˛ЪТfl Т ‰‡ММ˚ПЛ Н ЛУ-ще ‰Оfl ·ЛМ‡ МУ„У НУПФОВНТ‡ 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ Ò HCV IRES [8].

кЛ·УТУПМ˚И ·ВОУН p40, ТУТВ‰ТЪ‚Ы˛˘ЛИ Т ТЫ·‰У- ПВМУП IIIe HCV IRES, – Ò‡Ï˚È Í ÛÔÌ˚È ·ÂÎÓÍ 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ˚. 片‚ÌÓ Ï˚ ÔÓ͇Á‡ÎË, ˜ÚÓ Ô ÂÔ‡ ‡Ú˚ 40S ТЫ·˜‡ТЪЛˆ Л·УТУП ЛБ ФО‡ˆВМЪ˚ ˜ВОУ‚ВН‡ ПУ„ЫЪ УЪОЛ˜‡Ъ¸Тfl ФУ ТУ‰В К‡МЛ˛ ‚ МЛı ·ВОН‡ 40. лЫ·˜‡- ТЪЛˆ˚ Т ‰ВЩЛˆЛЪУП ˝ЪУ„У ·ВОН‡ У·О‡‰‡ОЛ ТФУТУ·МУТЪ¸˛ Т‚flБ˚‚‡Ъ¸ Ф ‡НЪЛ˜ВТНЛ ˝Н‚ЛПУОfl МУВ НУОЛ˜В- ТЪ‚У ВНУП·ЛМ‡МЪМУ„У 40 [18]. щЪУ ФУБ‚УОflВЪ ЛТФУО¸БУ‚‡Ъ¸ Ъ‡НЛВ ТЫ·˜‡ТЪЛˆ˚ Л ВНУП·ЛМ‡МЪМ˚И40 ‰Оfl ЛБЫ˜ВМЛfl УОЛ ·ВОН‡ 40 ‚ Т‚flБ˚‚‡МЛЛ HCV IRES Ò 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ‡ÏË.

З М‡ТЪУfl˘ВИ ‡·УЪВ Т ЛТФУО¸БУ‚‡МЛВП ПУМУНОУ- М‡О¸М˚ı ‡МЪЛЪВО (еД) Ф УЪЛ‚ ·ВОН‡ 40 Л ·ВТНОВЪУ˜МУИ ТЛТЪВП˚ Ъ ‡МТОflˆЛЛ ЛБЫ˜ВМ‡ УО¸ 40 ‚ Т‚fl- Б˚‚‡МЛЛ HCV IRES Ò 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ‡ÏË Ë·ÓÒÓÏ˚ ˜ÂÎÓ‚Â͇ Ë ‚ Ú ‡ÌÒÎflˆËË Ïêçä, ÒӉ ʇ˘Ëı ‡Á- ΢Ì˚ 5'-çíé.

щдлиЦкаеЦзнДгъзДь уДлнъ

З ‡·УЪВ ЛТФУО¸БУ‚‡ОЛ Л·УМЫНОВУБЛ‰Ъ ЛЩУТ- Щ‡Ъ˚, ТФВ ПЛ‰ЛМ Л DTT Ô ÓËÁ‚Ó‰ÒÚ‚‡ “Fluka”; ‡Í Ë- ·Ïˉ, N,N'-ПВЪЛОВМ·ЛТ‡Н Ë·Ïˉ, Ô ÒÛÎ¸Ù‡Ú ‡Ï- ÏÓÌËfl Ë N,N,N',N'-ÚÂÚ ‡ПВЪЛО˝ЪЛОВМ‰Л‡ПЛМ – “Serva” ËÎË “Reanal”; ТПВТ¸ ‡ПЛМУНЛТОУЪ – “Promega”. йТЪ‡О¸М˚В В‡НЪЛ‚˚ ·˚ОЛ УТТЛИТНУ„У Ф УЛБ‚У‰- ТЪ‚‡ П‡ НЛ ı.˜. ЛОЛ УТ.˜.

кзд-ФУОЛПВ ‡Б‡ Щ‡„‡ н7 ·˚О‡ Ф УЛБ‚У‰ТЪ‚‡ ЩЛ П˚ “Fermentas” (ãËÚ‚‡) ËÎË Î˛·ÂÁÌÓ Ô Â‰ÓÒÚ‡‚- ÎÂ̇ I. Eperon (гВТЪВ ТНЛИ ЫМЛ‚В ТЛЪВЪ, ЗВОЛНУ· Л- Ъ‡МЛfl); ЛМ„Л·ЛЪУ Л·УМЫНОВ‡Б – Ф УЛБ‚У‰ТЪ‚‡ “Fermentas” (ãËÚ‚‡) ËÎË “Promega”; У· ‡·УЪ‡ММ˚И МЫНОВ‡БУИ ОЛБ‡Ъ ВЪЛНЫОУˆЛЪУ‚ Н УОЛН‡ – ЩЛ П˚ “Promega”; [α-32P]GTP (1000 дЛ/ППУО¸) ТЛМЪВБЛ У- ‚‡М ‚ О‡·У ‡ЪУ ЛЛ ·ЛУЪВıМУОУ„ЛЛ апЕое лй кДз; еД 4F6 Ф УЪЛ‚ Ы˜‡ТЪН‡ 263–278 ‚ л-НУМˆВ- ‚УП ‡ИУМВ Л·УТУПМУ„У ·ВОН‡ 40 ФУОЫ˜‡ОЛ, Н‡Н УФЛТ‡МУ ‚ [19].

ë‚flÁ˚‚‡ÌË HCV IRES c 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ‡ÏË Ë- ·ÓÒÓÏ. кЛ·УТУПМ˚В ТЫ·˜‡ТЪЛˆ˚ ‚˚‰ВОflОЛ ЛБ ФУТОВ-У‰У‚УИ Ô·ˆÂÌÚ˚ Òӄ·ÒÌÓ [20]. å˜ÂÌÌ˚È 32ê êçä-Ú ‡ÌÒÍ ËÔÚ, ÒÓÓÚ‚ÂÚÒÚ‚Û˛˘ËÈ HCV IRES, ТЛМЪВБЛ У‚‡ОЛ Т ФУПУ˘¸˛ í7-Ú ‡МТН ЛФˆЛЛ, Н‡Н УФЛТ‡МУ ‚ [16]. кВНУП·ЛМ‡МЪМ˚И Л·УТУПМ˚И ·ВОУН40 ˜ВОУ‚ВН‡, ТУ‰В К‡˘ЛИ М‡ N-ÍÓ̈ ¯ÂÒÚ¸ ÓÒÚ‡Ú- ÍÓ‚ „ËÒÚˉË̇, ÔÓÎÛ˜‡ÎË Òӄ·ÒÌÓ [18]. 40S ТЫ·˜‡- ТЪЛˆ˚ М‡Т˚˘‡ОЛ ВНУП·ЛМ‡МЪМ˚П ·ВОНУП 40, Н‡Н УФЛТ‡МУ ‚ [18]. аТФУО¸БУ‚‡ОЛ ТЫ·˜‡ТЪЛˆ˚ ‚ НУМˆВМ- Ъ ‡ˆЛЛ 0.2 ПНе Л 20-Í ‡ÚÌ˚È ËÁ·˚ÚÓÍ ·ÂÎ͇. ÑÎfl Ò‚flÁ˚‚‡ÌËfl 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ (Ò ‰ÂÙˈËÚÓÏ ·ÂÎ͇ 40 ËÎË Ì‡Ò˚˘ÂÌÌ˚ı ÂÍÓÏ·Ë̇ÌÚÌ˚Ï 40) Ò HCV IRES ËÌÍÛ·Ë Ó‚‡ÎË 1 ÙÏÓθ ϘÂÌÓ„Ó Ú ‡ÌÒÍ ËÔÚ‡ ‚ 20 ÏÍÎ 20 Ïå ·ÛÙ ‡ í ËÒ-çël, pH 7.5, ÒӉ ʇ- ˘Â„Ó 100 ÏM KCl, 2.5 Ïå MgCl2, 0.25 Ïå ÒÔ ÏˉËÌ, 2 Ïå DDT (·ЫЩВ Д) Л УЪ 4 ЩПУО¸ ‰У 4 ФПУО¸ ТЫ·˜‡- ТЪЛˆ Ф Л 30°л ‚ ЪВ˜ВМЛВ 30 ПЛМ. лЪВФВМ¸ Т‚flБ˚‚‡- МЛfl кзд Т ТЫ·˜‡ТЪЛˆ‡ПЛ УФ В‰ВОflОЛ ЩЛО¸Ъ У‚‡МЛВП НУПФОВНТУ‚ М‡ МЛЪ УˆВОО˛ОУБМ˚ı ЩЛО¸Ъ ‡ı,

Н‡Н УФЛТ‡МУ ‚ [21]. д‡КЫ˘Ы˛Тfl НУМТЪ‡МЪЫ ‰ЛТТУˆЛ- ‡ˆЛЛ УФ В‰ВОflОЛ Н‡Н НУМˆВМЪ ‡ˆЛ˛ ТЫ·˜‡ТЪЛˆ, Ф Л НУЪУ УИ ТЪВФВМ¸ Т‚flБ˚‚‡МЛfl кзд Т ТЫ·˜‡ТЪЛˆ‡ПЛ‡‚М‡ ФУОУ‚ЛМВ П‡НТЛП‡О¸МУИ ‚ВОЛ˜ЛМ˚.

ë‚flÁ˚‚‡ÌË HCV IRES c 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ‡ÏË Ë- ·ÓÒÓÏ, Ô Â‰˚ÌÍÛ·Ë Ó‚‡ÌÌ˚ÏË Ò åÄ 4F6 Ô ÓÚË‚ ·ÂÎ͇ 40. ëÏÂÒ¸ 2 ÔÏÓθ 40S ТЫ·˜‡ТЪЛˆ Т 5 ПН„ еД Ф УЪЛ‚ 40 ЛМНЫ·Л У‚‡ОЛ ‚ 200 ПНО ·ЫЩВ ‡ Д Ф Л 24°л ‚ ЪВ˜ВМЛВ 15 ПЛМ, Б‡ЪВП Н ТПВТЛ ‰У·‡‚ОflОЛ 30 ЩПУО¸ ПВ˜ВМУ„У HCV IRES Л ЛМНЫ·Л У‚‡ОЛ ‚ ЪВ˜ВМЛВ В˘В 30 ПЛМ Ф Л 30°л. дУПФОВНТ 40S ÒÛ·˜‡- ÒÚˈ Ò HCV IRES ‚˚‰ÂÎflÎË ˆÂÌÚ ËÙÛ„Ë Ó‚‡ÌËÂÏ ‚ 5–40%-ÌÓÏ Т‡ı‡ УБМУП „ ‡‰ЛВМЪВ М‡ УЪУ В Ti60 Ô Ë 52000 Ó·/ÏËÌ Ë 4°ë ‚ Ú˜ÂÌË 3 ˜. É ‡‰ËÂÌÚ Ù ‡ÍˆËÓÌË Ó‚‡ÎË Ë Ô ÓÒ˜ËÚ˚‚‡ÎË ‡‰ËÓ‡ÍÚË‚- ÌÓÒÚ¸ ‚Ó Ù ‡ÍˆËflı.

н ‡МТОflˆЛfl ‚ ОЛБ‡ЪВ ВЪЛНЫОУˆЛЪУ‚ Н УОЛН‡.

СОfl Ъ ‡МТОflˆЛЛ ЛТФУО¸БУ‚‡ОЛ У· ‡·УЪ‡ММ˚И МЫНОВ‡БУИ ОЛБ‡Ъ ВЪЛНЫОУˆЛЪУ‚ Н УОЛН‡. кВ‡НˆЛУММ‡fl ТПВТ¸ ТУ‰В К‡О‡ 5 ПНО ОЛБ‡Ъ‡, ‰УФУОМВММУ„У ТПВ- Т¸˛ ‡ПЛМУНЛТОУЪ ТУ„О‡ТМУ ВНУПВМ‰‡ˆЛflП ЩЛ П˚ “Promega”, Л 1 ПНО ‚У‰МУ„У ‡ТЪ‚У ‡ Пкзд. кВ‡НˆЛУММЫ˛ ТПВТ¸ ФВ В‰ ‰У·‡‚ОВМЛВП ‡ТЪ‚У ‡ Пкзд ЛМНЫ·Л У‚‡ОЛ Т ‡МЪЛЪВО‡ПЛ. и У‰ЫНЪ˚ Ъ ‡МТОflˆЛЛ ‡М‡ОЛБЛ У‚‡ОЛ, ЛБПВ flfl ‡НЪЛ‚МУТЪ¸ Ъ ‡МТОЛ У‚‡М- МУИ О˛ˆЛЩВ ‡Б˚ Т‚ВЪОfl˜Н‡ М‡ О˛ПЛМУПВЪ В ЩЛ - П˚ “Turner Biosystems” Т ЛТФУО¸БУ‚‡МЛВП ТЫ·ТЪ ‡Ъ‡

LarII (ËÁ ̇·Ó ‡ Dual-Luciferase Reporter Assay, “Promega”).

30

2

1

0

êËÒ. 1. ë‚flÁ˚‚‡ÌˠϘÂÌÌÓ„Ó 32ê HCV IRES Ò 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ‡ÏË Ë·ÓÒÓÏ ˜ÂÎÓ‚Â͇. 1 – аБУЪВ П‡ ‡‰- ТУ ·ˆЛЛ Т 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ‡ÏË Ò ‰ÂÙˈËÚÓÏ ·ÂÎ͇ 40. 2 – аБУЪВ П‡ ‡‰ТУ ·ˆЛЛ Т 40S ТЫ·˜‡ТЪЛˆ‡ПЛ, М‡Т˚- ˘ВММ˚ПЛ ВНУП·ЛМ‡МЪМ˚П ·ВОНУП 40. йЪМУТЛЪВО¸- М‡fl У¯Л·Н‡ ЛБПВ ВМЛИ – 15%.

èÓÎË(U)-Б‡‚ЛТЛПУВ Т‚flБ˚‚‡МЛВ Phe-ÚêçäPhe Ò

80S Ë·ÓÒÓχÏË Ô Ó‚Ó‰ËÎË, Í‡Í ÓÔËÒ‡ÌÓ ‚ [20]. ÑÎfl Ó· ‡ÁÓ‚‡ÌËfl 80S Л·УТУП ЛТФУО¸БУ‚‡ОЛ 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ˚ Ò 50%-Ì˚Ï ÒӉ ʇÌËÂÏ ·ÂÎ͇ 40, Ò‚Ó·Ó‰Ì˚ ÎË·Ó Ò‚flÁ‡ÌÌ˚Â Ò åÄ 4F6 Ô ÓÚË‚ ·ÂÎ- ͇ 40, Ë 60S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ˚ ‚ 1.3-Í ‡ÚÌÓÏ ËÁ·˚ÚÍ ÔÓ ÓÚÌÓ¯ÂÌ˲ Í 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ‡Ï. ÑÎfl Ò‚flÁ˚‚‡- ÌËfl 40S ТЫ·˜‡ТЪЛˆ Т ‡МЪЛЪВО‡ПЛ 30 ФПУО¸ ТЫ·˜‡- ТЪЛˆ ЛМНЫ·Л У‚‡ОЛ Т 30 ПН„ еД Ф Л 24°л ‚ ЪВ˜В- МЛВ 15 ПЛМ. дУМˆВМЪ ‡ˆЛfl 80S Ë·ÓÒÓÏ ‚ ‡͈ËÓÌÌ˚ı ÒÏÂÒflı – 0.14 ÏÍå.

кЦбмгънДнх аллгЦСйЗДзаь

ë‚flÁ˚‚‡ÌË HCV IRES Ò 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ‡ÏËË·ÓÒÓÏ Ò ‡Á΢Ì˚Ï ÒӉ ʇÌËÂÏ ·ÂÎ͇ 40

ЗОЛflМЛВ Л·УТУПМУ„У ·ВОН‡ 40 М‡ Т‚flБ˚‚‡МЛВ HCV IRES Ò 40S ТЫ·˜‡ТЪЛˆ‡ПЛ Л·УТУП˚ ˜ВОУ‚ВН‡ ЛБЫ˜‡ОЛ Т ЛТФУО¸БУ‚‡МЛВП ТЫ·˜‡ТЪЛˆ ОЛ·У Т ‰ВЩЛˆЛЪУП 85% ˝ЪУ„У ·ВОН‡ [17], ОЛ·У Ф В‰‚‡ ЛЪВО¸МУ М‡- Т˚˘ВММ˚ı ВНУП·ЛМ‡МЪМ˚П 40 ‰У ˝Н‚ЛПУОfl МУ„У ТУУЪМУ¯ВМЛfl. аБ Ф В‰ТЪ‡‚ОВММ˚ı М‡ ЛТ. 1 ЛБУЪВ П ‡‰ТУ ·ˆЛЛ ‡ТТ˜ЛЪ˚‚‡ОЛ Н‡КЫ˘ЛВТfl НУМТЪ‡МЪ˚ ‡Т- ТУˆЛ‡ˆЛЛ (ä‡) HCV IRES Ò 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ‡ÏË. Ç ÒÎÛ- ˜‡Â ÒÛ·˜‡ÒÚˈ Ò ‰ÂÙˈËÚÓÏ ·ÂÎ͇ 40 ä‡ ÒÓÒÚ‡‚Ë· (1.6 ± 0.3) × 107 å–1, ÚÓ„‰‡ Í‡Í Û ÒÛ·˜‡ÒÚˈ, ̇Ò˚˘ÂÌ- Ì˚ı ÂÍÓÏ·Ë̇ÌÚÌ˚Ï 40, ‚Â΢Ë̇ ä‡ Ó͇Á‡Î‡Ò¸ ‚ 5 ‡Á ‚˚¯Â ((8.8 ± 1.6) × 107 å–1). З НУМЪ УО¸МУП УФ˚ЪВ ФУН‡Б‡МУ, ˜ЪУ ‚ НУМˆВМЪ ‡ˆЛflı, ЛТФУО¸БУ‚‡М-

Ì˚ı ‰Îfl ̇Ò˚˘ÂÌËfl 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ, ÂÍÓÏ·Ë̇ÌÚ- Ì˚È ·ÂÎÓÍ 40 Ì ҂flÁ˚‚‡ÎÒfl Ò HCV IRES. í‡ÍËÏ Ó·-‡ÁÓÏ, 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ˚ Ë·ÓÒÓÏ, ÒӉ ʇ˘Ë ·ÂÎÓÍ40 ‚ ˝Í‚ËÏÓÎfl ÌÓÏ ÍÓ΢ÂÒÚ‚Â Í ÒÛ·˜‡ÒÚˈ‡Ï, Ò‚fl- Á˚‚‡ÎËÒ¸ Ò HCV IRES БМ‡˜ЛЪВО¸МУ ˝ЩЩВНЪЛ‚МВВ, ˜ВП ТЫ·˜‡ТЪЛˆ˚ Т МЛБНЛП ТУ‰В К‡МЛВП ˝ЪУ„У ·ВОН‡, Ф Л˜ВП ТВПЛН ‡ЪМУВ ЫПВМ¸¯ВМЛВ ТУ‰В К‡МЛfl p40 Ф Л‚У‰ЛОУ Н ФflЪЛН ‡ЪМУПЫ ТМЛКВМЛ˛ ‚ВОЛ˜ЛМ˚ ä‡ HCV IRES Ò ÒÛ·˜‡ÒÚˈ‡ÏË.

ÇÎËflÌË åÄ 4F6 Ô ÓÚË‚ ·ÂÎ͇ 40 ̇ Ú ‡ÌÒÎflˆË˛ HCV IRES-ТУ‰В К‡˘ВИ Пкзд ‚ ОЛБ‡ЪВ ВЪЛНЫОУˆЛЪУ‚

м˜‡ТЪЛВ Л·УТУПМУ„У ·ВОН‡ 40 ‚ Ъ ‡МТОflˆЛЛ Пкзд, ТУ‰В К‡˘ВИ HCV IRES, Ф У‚В flОЛ Т ЛТФУО¸- БУ‚‡МЛВП Ъ ‡МТН ЛФЪ‡ „ВМ‡ О˛ˆЛЩВ ‡Б˚ Т‚ВЪОfl˜Н‡, МВТЫ˘В„У М‡ 5'-НУМˆВ HCV IRES, ·ВТНОВЪУ˜МУИ ТЛТЪВП˚ Ъ ‡МТОflˆЛЛ М‡ УТМУ‚В ОЛБ‡Ъ‡ ВЪЛНЫОУˆЛЪУ‚ Н УОЛН‡ Л еД 4F6, ТФВˆЛЩЛ˜М˚ı Н Ы˜‡ТЪНЫ 263–278 ‚ л-НУМˆВ‚УП ‡ИУМВ 40. аБ Ф В‰ТЪ‡‚ОВММ˚ı М‡ЛТ. 2 ‰‡ММ˚ı ‚Л‰МУ, ˜ЪУ Ф Л Ы‚ВОЛ˜ВМЛЛ ‚ ОЛБ‡ЪВВЪЛНЫОУˆЛЪУ‚ НУМˆВМЪ ‡ˆЛЛ еД 4F6 НУОЛ˜ВТЪ‚У У· ‡БЫ˛˘В„УТfl ВФУ ЪВ МУ„У ·ВОН‡ (О˛ˆЛЩВ ‡Б˚) ТМЛК‡ВЪТfl, ‡ ‚ Ф ЛТЫЪТЪ‚ЛЛ 1000 М„ еД М‡ 10 ПНО В- ‡НˆЛУММУИ ТПВТЛ ТЛМЪВБ О˛ˆЛЩВ ‡Б˚ Ф ‡НЪЛ˜ВТНЛ ФУОМУТЪ¸˛ Ф ВН ‡˘‡ВЪТfl. и Л ЛТФУО¸БУ‚‡МЛЛ ‚ Н‡- ˜ВТЪ‚В П‡Ъ Лˆ˚ кзд-Ъ ‡МТН ЛФЪ‡, НУЪУ ˚И ‚ПВТЪУ HCV IRES ÒӉ ʇΠ5'-çíé Ïêçä ‡ÍÚË̇, Û‚Â΢Â-

ÇÎËflÌË åÄ 4F6 Ф УЪЛ‚ Л·УТУПМУ„У ·ВОН‡ 40 М‡ Т‚flБ˚‚‡МЛВ IRES-˝ОВПВМЪ‡ HCV Ò 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ‡ÏË

иУТНУО¸НЫ ˝ЩЩВНЪЛ‚МУТЪ¸ Т‚flБ˚‚‡МЛfl HCV IRES Ò 40S ТЫ·˜‡ТЪЛˆ‡ПЛ Б‡‚ЛТВО‡ УЪ ТУ‰В К‡МЛfl ‚ МЛı ·ВОН‡ 40, Ф В‰ТЪ‡‚ОflОУ ЛМЪВ ВТ ‚˚flТМЛЪ¸, ТФУТУ·М˚ ОЛ еД 4F6 Ô ÓÚË‚ ˝ÚÓ„Ó ·ÂÎ͇ Ô ÂÔflÚÒÚ‚Ó- ‚‡Ú¸ Ò‚flÁ˚‚‡Ì˲ IRES-˝ОВПВМЪ‡ Т ТЫ·˜‡ТЪЛˆ‡ПЛ. л ˝ЪУИ ˆВО¸˛ Л·УТУПМ˚В 40S ТЫ·˜‡ТЪЛˆ˚ ЛМНЫ·Л У- ‚‡ОЛ Т еД Л ‰‡ОВВ Т‚flБ˚‚‡ОЛ Т ПВ˜ВМ˚П кзд-Ъ ‡М- ТН ЛФЪУП, ТУУЪ‚ВЪТЪ‚Ы˛˘ЛП HCV IRES. дУПФОВН- Т˚ 40S ТЫ·˜‡ТЪЛˆ УЪ‰ВОflОЛ УЪ МВТ‚flБ‡‚¯ВИТfl кзд ˆВМЪ ЛЩЫ„Л У‚‡МЛВП ‚ Т‡ı‡ УБМУП „ ‡‰ЛВМЪВ, „ ‡- ‰ЛВМЪ Щ ‡НˆЛУМЛ У‚‡ОЛ Л Ф УТ˜ЛЪ˚‚‡ОЛ ‡‰ЛУ‡Н- ЪЛ‚МУТЪ¸ ‚У Щ ‡НˆЛflı. и УЩЛОЛ ТВ‰ЛПВМЪ‡ˆЛЛ Ф В‰ТЪ‡‚ОВМ˚ М‡ ЛТ. 3. ЗЛ‰МУ, ˜ЪУ ‡‰ЛУ‡НЪЛ‚М‡fl ПВЪН‡ Ф ЛТЫЪТЪ‚ЫВЪ ЪУО¸НУ ‚ ЪВı Щ ‡НˆЛflı, НУЪУ-˚В ТУ‰В К‡Ъ 40S ТЫ·˜‡ТЪЛˆ˚, МВ Т‚flБ‡ММ˚В Т еД, ЪУ„‰‡ Н‡Н ФУТОВ У· ‡·УЪНЛ еД ‚У Щ ‡НˆЛflı 40S ТЫ·˜‡ТЪЛˆ ПВЪН‡ Ф ‡НЪЛ˜ВТНЛ УЪТЫЪТЪ‚ЫВЪ.

Ç ÍÓÌÚ ÓθÌ˚ı ÓÔ˚Ú‡ı ‚ÎËflÌË åÄ Ô ÓÚË‚ ·ÂÎ- ͇ SA Ô Ó‚Â flÎË Ò ÔÓÏÓ˘¸˛ ÔÓÎË(U)-Б‡‚ЛТЛПУ„У Т‚flБ˚‚‡МЛfl Phe-ÚêçäPhe Ò 80S Ë·ÓÒÓχÏË. êË·ÓÒÓ-

йЕлмЬСЦзаЦ кЦбмгънДнйЗ

кЛ·УТУПМ˚И ·ВОУН 40 ˜ВОУ‚ВН‡ „УПУОУ„Л˜ВМЛ·УТУПМ˚П ·ВОН‡П ТВПВИТЪ‚‡ S2 Ф УН‡ ЛУЪ, ıУЪfl ‚ Т В‰МВИ В„У ˜‡ТЪЛ МВЪ Ф УЪflКВММУ„У Щ ‡„ПВМЪ‡, ı‡ ‡НЪВ МУ„У ‰Оfl Ф УН‡ ЛУЪ, ‡ л-НУМˆВ‚‡fl ˜‡ТЪ¸ ‰ОЛМУИ ·УОВВ 100 ‡ПЛМУНЛТОУЪМ˚ı УТЪ‡ЪНУ‚ (Ъ‡Н М‡Б˚‚‡ВП˚И О‡ПЛМЛМ-Т‚flБ˚‚‡˛˘ЛИ ‰УПВМ, LBD- ‰УПВМ) ТФВˆЛЩЛ˜М‡ ‰Оfl ˝ЫН‡ ЛУЪ [22]. кВМЪ„ВМУТЪ ЫНЪЫ М˚И ‡М‡ОЛБ Щ ‡„ПВМЪ‡ ·ВОН‡ 40 ·ВБ C-НУМˆВ‚УИ ˜‡ТЪЛ ФУН‡Б‡О, ˜ЪУ В„У Ф УТЪ ‡МТЪ‚ВМ- М‡fl ТЪ ЫНЪЫ ‡ ТУУЪ‚ВЪТЪ‚ЫВЪ ТЪ ЫНЪЫ В Ф УН‡ ЛУЪЛ˜ВТНУ„У Л·УТУПМУ„У ·ВОН‡ S2 [23]. ùÚË ‰‡ÌÌ˚Â, ̇ fl‰Û Ò ‰‡ÌÌ˚ÏË Í ËÓ-ùå ˝Û͇ ËÓÚ˘ÂÒÍËı Ë·Ó- ÒÓÏ [24], ÔÓÁ‚ÓÎfl˛Ú Ûڂ ʉ‡Ú¸, ˜ÚÓ ‚ 40S ТЫ·˜‡ТЪЛˆВ ˝Ъ‡ ˜‡ТЪ¸ ·ВОН‡ 40 Б‡МЛП‡ВЪ ФУОУКВМЛВ, ТУУЪ- ‚ВЪТЪ‚Ы˛˘ВВ ФУОУКВМЛ˛ ·ВОН‡ S2 ‚ 30S ТЫ·˜‡ТЪЛˆВ [25]. ЗПВТЪВ Т ЪВП, ТЪ ЫНЪЫ ‡ LBD-‰УПВМ‡ ·ВОН‡ 40 Л В„У ‡ТФУОУКВМЛВ ‚ 40S ТЫ·˜‡ТЪЛˆВ МВ ЫТЪ‡МУ‚ОВ- М˚. и Л ЛБЫ˜ВМЛЛ ТЪ ЫНЪЫ ˚ Л·УТУП˚ ПОВНУФЛЪ‡- ˛˘Лı Т ФУПУ˘¸˛ Н ЛУ-ще [26] ˝ОВНЪ УММЫ˛ ФОУЪМУТЪ¸ М‡ ФУ‚В ıМУТЪЛ 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ˚ ‚·ÎËÁË ÒÔË ‡- ÎÂÈ H38 Ë H40 18S кзд УЪМВТОЛ Н LBD-‰УПВМЫ ·ВОН‡ 40 ( ЛТ. 5), У‰М‡НУ ·ЛУıЛПЛ˜ВТНЛВ ‰‡ММ˚В,

‚‡ÎË ÓÚ Ò‚flÁ˚‚‡ÌËfl Ò HCV IRES Ì ÚÓθÍÓ Û˜‡ÒÚÓÍ 263–278 ‚ LBD-‰УПВМВ ·ВОН‡ 40, Н НУЪУ УПЫ УМЛ ТФВˆЛЩЛ˜М˚, МУ Л ТУТВ‰МЛВ Т МЛП Ы˜‡ТЪНЛ ТЫ·˜‡ТЪЛ- ˆ˚, ТЫ˘ВТЪ‚ВММ˚В ‰Оfl ВВ Т‚flБ˚‚‡МЛfl Т HCV IRES, ЛБ-Б‡ ˜В„У ТЫ·˜‡ТЪЛˆ‡ ФУОМУТЪ¸˛ ЪВ flО‡ ТФУТУ·- МУТЪ¸ Н ˝ЪУПЫ Т‚flБ˚‚‡МЛ˛. иУ ˝ЪУИ КВ Ф Л˜ЛМВ МВО¸Бfl ЫЪ‚В К‰‡Ъ¸, ˜ЪУ ЛПВММУ Ы˜‡ТЪУН 263–278 ·ВОН‡ 40 Ф ЛМЛП‡ВЪ Ы˜‡ТЪЛВ ‚ Т‚flБ˚‚‡МЛЛ Т HCV IRES. н‡Н, ‚ НОВЪН‡ı ‰ УККВИ HCV IRES ТФУТУ·ВМ ЛМЛˆЛЛ У‚‡Ъ¸ Ъ ‡МТОflˆЛ˛ ФУ НВФ-МВБ‡‚ЛТЛПУПЫ ПВı‡МЛБПЫ [30], ıУЪfl ‚ ‰ УККВ‚УП „УПУОУ„В ·ВОН‡40 УЪТЫЪТЪ‚ЫВЪ Ы˜‡ТЪУН, ТУУЪ‚ВЪТЪ‚Ы˛˘ЛИ Щ ‡„- ПВМЪЫ 263–278 ‚ ·ВОНВ ˜ВОУ‚ВН‡.

д‡Н ЫКВ ЫФУПЛМ‡ОУТ¸, 40 ‚ıУ‰ЛЪ ‚ ТУТЪ‡‚ „ ЫФ- Ф˚ ·ВОНУ‚, ТФУТУ·М˚ı Т‚flБ˚‚‡Ъ¸Тfl Т HCV IRES ‚ ˆЛЪУФО‡БП‡ЪЛ˜ВТНУП ˝НТЪ ‡НЪВ НОВЪУН Huh7 [12], ıÓÚfl, Òӄ·ÒÌÓ Ì‡¯ËÏ ‰‡ÌÌ˚Ï, ÂÍÓÏ·Ë̇ÌÚÌ˚È 40 Ì ҂flÁ˚‚‡ÎÒfl Ò IRES-˝ОВПВМЪУП. лОВ‰ЫВЪ УЪПВЪЛЪ¸, ˜ЪУ Ф ЛТЫЪТЪ‚ЛВ 40 ‚ ТУТЪ‡‚В ·ВОНУ‚У„У ФЫО‡ [12] МВ УБМ‡˜‡ВЪ ЪУ„У, ˜ЪУ Т‡П ·ВОУН ТФУТУ·ВМ Т‚fl- Б˚‚‡Ъ¸Тfl Т HCV IRES. ЗФУОМВ ‚УБПУКМУ, ˜ЪУ ˝ЪУ Т‚flБ˚‚‡МЛВ УФУТ В‰У‚‡МУ У· ‡БУ‚‡МЛВП НУПФОВНТ‡40 Т Н‡НЛП-ОЛ·У ·ВОНУ‚˚П НУПФУМВМЪУП, У·О‡‰‡- ˛˘ЛП Т У‰ТЪ‚УП Н HCV IRES. í‡Í, Ì‡Ô ËÏ , ‚ ˝ÚÓÏ ÔÛΠӷ̇ ÛÊÂÌ˚ ÔÓ˜ÚË ‚Ò ÒÛ·˙‰ËÌˈ˚ eIF3, ‡ ˝ЪУЪ Щ‡НЪУ , Н‡Н ЛБ‚ВТЪМУ, ТФУТУ·ВМ Т‚flБ˚- ‚‡Ъ¸Тfl Т HCV IRES [31]. пУЪfl ‰‡ММ˚В У Т У‰ТЪ‚В Л- ·УТУПМУ„У ·ВОН‡ 40 ПОВНУФЛЪ‡˛˘Лı Н eIF3 ФУН‡ УЪТЫЪТЪ‚Ы˛Ъ, У‰М‡НУ, Ф ЛМЛП‡fl ‚У ‚МЛП‡МЛВ ТФУТУ·МУТЪ¸ ‰ УККВ‚У„У „УПУОУ„‡ 40 Т‚flБ˚‚‡Ъ¸Тfl Т ‰‚ЫПfl ТЫ·˙В‰ЛМЛˆ‡ПЛ eIF3 ‰ УККВИ [32], Ъ‡НЫ˛ ‚УБПУКМУТЪ¸ МВО¸Бfl ЛТНО˛˜ЛЪ¸. иУ˝ЪУПЫ ПУКМУ Ф В‰ФУОУКЛЪ¸, ˜ЪУ ‚ ‡·УЪВ [12] Т HCV IRES Т‚flБ˚- ‚‡ОТfl МВ Т‡П ·ВОУН 40, ‡ В„У НУПФОВНТ c eIF3.

оЫМНˆЛЛ Л·УТУПМУ„У ·ВОН‡ 40 ‚ Ъ ‡МТОflˆЛЛ ˝ЫН‡ ЛУЪЛ˜ВТНЛı Пкзд УТЪ‡˛ЪТfl ‚У ПМУ„УП МВЛБ- ‚ВТЪМ˚ПЛ, ıУЪfl ‰‡ММ˚В У ЪУП, ˜ЪУ ˝ЪУЪ ·ВОУН ‡ТТУˆЛЛ У‚‡М Т Л·УТУП‡ПЛ ‚ ‡НЪЛ‚МУ ‡ТЪЫ˘Лı НОВЪ- Н‡ı Л, М‡У·У УЪ, ‰ЛТТУˆЛЛ ЫВЪ ЛБ МЛı Ф Л ТМЛКВМЛЛ Ы У‚Мfl Ъ ‡МТОflˆЛЛ [33, 34], Т‚Л‰ВЪВО¸ТЪ‚Ы˛Ъ У В„У ‚‡КМУИ УОЛ ‚ ·ВОНУ‚УП ТЛМЪВБВ. лФУТУ·МУТЪ¸ л-НУМˆВ‚УИ ˜‡ТЪЛ ‰ УККВ‚У„У „УПУОУ„‡ ·ВОН‡ 40 (S0A) Ò‚flÁ˚‚‡Ú¸Òfl Ò ‰‚ÛÏfl ÒÛ·˙‰ËÌˈ‡ÏË ‰ ÓÊÊÂ- ‚Ó„Ó Ù‡ÍÚÓ ‡ ËÌˈˇˆËË eIF3 ‚МВ Л·УТУП˚ ФУБ‚У- ОЛО‡ Ф В‰ФУОУКЛЪ¸, ˜ЪУ ˝ЪУЪ ‡ИУМ ·ВОН‡ S0A Û˜‡ÒÚ‚ÛÂÚ ‚ Ò‚flÁ˚‚‡ÌËË 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ Ò Ù‡ÍÚÓ ÓÏ eIF3 [32]. л ˝ЪЛП Ф В‰ФУОУКВМЛВП ТУ„О‡ТЫ˛ЪТfl ФУОЫ˜ВММ˚В Т ФУПУ˘¸˛ Н ЛУ-ще ВБЫО¸Ъ‡Ъ˚ ВНУМТЪ ЫНˆЛЛ НУПФОВНТ‡ 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ Ë·ÓÒÓÏ Í ÓÎË- ͇ Ò eIF3 ˜ВОУ‚ВН‡, ТУ„О‡ТМУ НУЪУ ˚П ˝ЪУЪ Щ‡НЪУ Ф ЛП˚Н‡ВЪ МВФУТ В‰ТЪ‚ВММУ Н У·О‡ТЪЛ ТЫ·˜‡ТЪЛˆ˚, Б‡МЛП‡ВПУИ ·ВОНУП 40 [35]. ЗУБПУКМУВ Ы˜‡ТЪЛВ40 ‚ Т‚flБ˚‚‡МЛЛ 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ c eIF3 ıÓ Ó¯Ó Ó·˙- flÒÌflÂÚ Ì‡·Î˛‰‡ÂÏÓ ̇ÏË ËÌ„Ë·Ë Ó‚‡ÌËÂ Ú ‡ÌÒÎflˆËË Ïêçä, ÒӉ ʇ˘ÂÈ 5'-çíé ‡ÍÚË̇, åÄ 4F6 Ф УЪЛ‚ Ы˜‡ТЪН‡ 263–278 ‚ л-НУМˆВ‚УП ‰УПВМВ ·ВОН‡40. ЕВОУН 40 М‡ıУ‰ЛЪТfl ‚ Л·УТУП‡ı ‡НЪЛ‚МУ ‡Т- ЪЫ˘Лı НОВЪУН Л ‰ЛТТУˆЛЛ ЫВЪ ЛБ МЛı Ф Л ТМЛКВМЛЛ Ы У‚Мfl Ъ ‡МТОflˆЛЛ [33, 34]. м˜ЛЪ˚‚‡fl ˝ЪУ, ПУКМУ

Ф В‰ФУОУКЛЪ¸, ˜ЪУ ·ВОУН 40 У·О‡‰‡ВЪ В„ЫОflЪУ - МУИ ЩЫМНˆЛВИ. н‡Н, МВ ·Ы‰Ы˜Л ФУТЪУflММ˚П НУПФУМВМЪУП Л·УТУП˚, ˝ЪУЪ ·ВОУН ПУКВЪ ЫТЛОЛ‚‡Ъ¸ ЛОЛ НУУ ‰ЛМЛ У‚‡Ъ¸ Т‚flБ˚‚‡МЛВ Щ‡НЪУ ‡ eIF3 Ë ÚÂÏ Ò‡- Ï˚Ï ‡ÍÚË‚Ë Ó‚‡Ú¸ ËÌˈˇˆË˛ Ú ‡ÌÒÎflˆËË. è Ë ‰ËÒÒӈˇˆËË 40 ËÁ 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ, Ì‡Ô ÓÚË‚, Ò Ó‰- ÒÚ‚Ó eIF3 Н ТЫ·˜‡ТЪЛˆ‡П ТМЛК‡ВЪТfl, Л У·˘‡fl ˝ЩЩВНЪЛ‚МУТЪ¸ Ъ ‡МТОflˆЛЛ Ф‡‰‡ВЪ.

аБ‚ВТЪМУ, ˜ЪУ У· ‡БУ‚‡МЛВ ·ЛМ‡ МУ„У НУПФОВН- Т‡ 40S ÒÛ·˜‡ÒÚˈ Ò IRES-˝ОВПВМЪУП fl‚ОflВЪТfl ФВ ‚УИ ТЪ‡‰ЛВИ ЛМЛˆЛ‡ˆЛЛ Ъ ‡МТОflˆЛЛ кзд HCV, Á‡ ÍÓÚÓ-ÓÈ ÒΉÛÂÚ Ò‚flÁ˚‚‡ÌËÂ Ò Ù‡ÍÚÓ ÓÏ eIF3 Л Ъ УИМ˚П НУПФОВНТУП (eIF2•Met-ÚêçäMet•GTP) [36]. кЛ·УТУП- М˚И ·ВОУН 40, Н‡Н ФУН‡Б‡ОЛ М‡¯Л ‰‡ММ˚В, МВФУ- Т В‰ТЪ‚ВММУ ‚У‚ОВ˜ВМ ‚ У· ‡БУ‚‡МЛВ ·ЛМ‡ МУ„У НУПФОВНТ‡. лОВ‰У‚‡ЪВО¸МУ, ПУКМУ Б‡НО˛˜ЛЪ¸, ˜ЪУ Ф ‡НЪЛ˜ВТНЛ ФУОМУВ ФУ‰‡‚ОВМЛВ Ъ ‡МТОflˆЛЛ Пкзд, ТУ‰В К‡˘ВИ HCV IRES, М‡·О˛‰‡ВПУВ ‚ Ф ЛТЫЪТЪ‚ЛЛ еД Ф УЪЛ‚ ·ВОН‡ 40, У·ЫТОУ‚ОВМУ МВ ЛМ„Л·Л У‚‡- МЛВП Т‚flБ˚‚‡МЛfl eIF3 Ò 40S ТЫ·˜‡ТЪЛˆВИ, Н‡Н ПУ„ОУ ·˚Ъ¸ ‚ ТОЫ˜‡В Пкзд, ТУ‰В К‡˘ВИ 5'-знй Пкзд ‡Н- ЪЛМ‡, ‡ ·ОУНЛ У‚‡МЛВП У· ‡БУ‚‡МЛfl ·ЛМ‡ МУ„У НУПФОВНТ‡. щЪЛ ‰‡ММ˚В, ФУ ТЫЪЛ, Ф В‰ТЪ‡‚Оfl˛Ъ ТУ·УИ ФВ ‚УВ Т‚Л‰ВЪВО¸ТЪ‚У Ы˜‡ТЪЛfl ·ВОН‡ 40 ‚ ЛМЛˆЛ‡- ˆЛЛ Ъ ‡МТОflˆЛЛ ФУ НВФ-МВБ‡‚ЛТЛПУПЫ ПВı‡МЛБПЫ.

Ä‚ÚÓ ˚ ‚˚ ‡Ê‡˛Ú ËÒÍ ÂÌÌ˛˛ ·Î‡„Ó‰‡ ÌÓÒÚ¸ I. Eperon Б‡ Ф ВФ‡ ‡Ъ н7-кзд-ФУОЛПВ ‡Б˚ Л а.е. нВ ВМЛМЫ Б‡ ФУПУ˘¸ Ф Л Ф У‚В‰ВМЛЛ ˝НТФВ Л- ПВМЪУ‚ ФУ Ъ ‡МТОflˆЛЛ.

к‡·УЪ‡ ФУОЫ˜ЛО‡ ФУ‰‰В КНЫ кУТТЛИТНУ„У ЩУМ‰‡ ЩЫМ‰‡ПВМЪ‡О¸М˚ı ЛТТОВ‰У‚‡МЛИ (08-04-00593-a, 09-04-00450-‡ Ë 08-04-00399-a), и У„ ‡ПП˚ “еУОВНЫОfl М‡fl Л НОВЪУ˜М‡fl ·ЛУОУ„Лfl” и ВБЛ‰ЛЫП‡ кУТТЛИТНУИ ‡Н‡‰ВПЛЛ М‡ЫН (Й.Й. д‡ ФУ‚‡) Л и У„ ‡ПП˚ и ВБЛ‰ВМЪ‡ кУТТЛИТНУИ о‰ ‡ˆЛЛ ‰Оfl „УТЫ‰‡ - ТЪ‚ВММУИ ФУ‰‰В КНЛ ‚В‰Ы˘Лı М‡Ы˜М˚ı ¯НУО (зт-387.2008.4).

лиалйд ганЦкДнмкх

1.Merrick W.C. 1992. Mechanism and regulation of eukaryotic protein synthesis. Microbiol. Rev. 56, 291–315.

2.Pestova T.V., Kolupaeva V.G., Lomakin I.B., Pilipenko E.V., Shatsky I.N., Agol V.I., Hellen C.U. 2001. Molecular mechanisms of translation initiation in eukaryotes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98, 7029–7036.

3.лНЫО‡˜fi‚ е.З. 2005. ЗМЫЪ ВММflfl ЛМЛˆЛ‡ˆЛfl Ъ ‡МТОflˆЛЛ – ‡БМУУ· ‡БЛВ ПВı‡МЛБПУ‚ Л ‚УБПУКМ‡flУО¸ ‚ КЛБМВ‰ВflЪВО¸МУТЪЛ НОВЪНЛ. ìÒÔ. ·ËÓÎ. ıËÏËË. 45, 123–172.

4.Pisarev A.V., Shirokikh N.E., Hellen C.U. 2005. Translation initiation by factor-independent binding of eukaryotic ribosomes to internal ribosomal entry sites.

C. R. Biol. 328, 589–605.

5.Lancaster A.M., Jan E., Sarnow P. 2006. Initiation fac- tor-independent translation mediated by the hepatitis C virus internal ribosome entry site. RNA. 12, 894–902.

6.Fraser C.S., Doudna J.A. 2007. Structural and mechanistic insights into hepatitis C viral translation initiation.

Nat. Rev. Microbiol. 5, 29–38.

7.Pestova T.V., Shatsky I.N., Fletcher S.P., Jackson R.J., Hellen C.U. 1998. A prokaryotic-like mode of cytoplasmic eukaryotic ribosome binding to the initiation codon during internal translation initiation of hepatitis C and classical swine fever virus RNAs. Genes Dev. 12, 67–83.

8.Spahn C.M., Kieft J.S., Grassucci R.A., Penczek P.A., Zhou K., Doudna J.A., Frank J. 2001. Hepatitis C virus IRES RNA-induced changes in the conformation of the 40S ribosomal subunit. Science. 291, 1959–1962.

9.Boehringer D., Thermann R., Ostareck-Lederer A., Lewis J.D., Stark H. 2005. Structure of the hepatitis C virus IRES bound to the human 80S ribosome: remodeling of the HCV IRES. Structure. 13, 1695–1706.

10.Fukushi S., Okada M., Stahl J., Kageyama T., Hoshino F.B., Katayama K. 2001. Ribosomal protein S5 interacts with the internal ribosomal entry site of hepatitis C virus.

J. Biol. Chem. 276, 20824–20826.

11.Otto G.A., Lukavsky P.J., Lancaster A.M., Sarnow P., Puglisi J.D. 2002. Ribosomal proteins mediate the hepatitis C virus IRES-HeLa 40S interaction. RNA. 8, 913–923.

12.Lu H., Li W., Noble W.S., Payan D., Anderson D.C. 2004. Riboproteomics of the hepatitis C virus internal ribosomal entry site. J. Proteome Res. 3, 949–957.

13.Laletina E., Graifer D., Malygin A., Ivanov A., Shatsky I., Karpova G. 2006. Proteins surrounding hairpin IIIe of the hepatitis C virus internal ribosome entry site on the human 40S ribosomal subunit. Nucleic Acids Res. 34, 2027–2036.

14.Babaylova E., Graifer D., Malygin A., Stahl J., Shatsky I., Karpova G. 2009. Positioning of subdomain IIId and apical loop of domain II of the hepatitis C IRES on the human 40S ribosome. Nucleic Acids Res. 37, 1141–1151.

15.Varaklioti A., Georgopoulou U., Kakkanas A., Psaridi L., Serwe M., Caselmann W.H., Mavromara P. 1998. Mutational analysis of two unstructured domains of the 5' untranslated region of HCV RNA. Biochem. Biophys. Res.

Commun. 253, 678–685.

16.е‡О˚„ЛМ Д.Д., Й ‡ИЩВ С.е., г‡ОВЪЛМ‡ Ц.л., т‡ЪТНЛИ а.з., д‡ ФУ‚‡ Й.Й. 2003. иУ‰ıУ‰ Н ‚˚fl‚- ОВМЛ˛ ЩЫМНˆЛУМ‡О¸МУ ‚‡КМ˚ı Ы˜‡ТЪНУ‚ кзд, УТМУ‚‡ММ˚И М‡ НУПФОВПВМЪ‡ ÌÓ-‡‰ ÂÒÓ‚‡ÌÌÓÈ ÏÓ‰Ë- ÙË͇ˆËË. еУОВНЫОfl . ·ЛУОУ„Лfl. 37, 1027–1034.

17.Lukavsky P.J., Otto G.A., Lancaster A.M., Sarnow P., Puglisi J.D. 2000. Structures of two RNA domains essential for hepatitis C virus internal ribosome entry site function. Nat. Struct. Biol. 7, 1105–1110.

18.дУТЛМУ‚‡ й.Д., е‡О˚„ЛМ Д.Д., Е‡·‡ИОУ‚‡ Ц.л., д‡ ФУ‚‡ Й.Й. 2008. л‚flБ˚‚‡МЛВ Л·УТУПМУ„У ·ВОН‡40 ˜ВОУ‚ВН‡ Л В„У ЫНУ У˜ВММ˚ı ЩУ П Т П‡ОУИ ТЫ·- ˜‡ТЪЛˆВИ Л·УТУП˚. еУОВНЫОfl . ·ЛУОУ„Лfl. 42, 1023–1029.

19.ЕУМ‰‡ ВМНУ Ц.а., и УЪУФУФУ‚‡ Ц.Е., зВН ‡ТУ‚ З.е., гУНЪВ‚ З.Е. 2004. еУМУНОУМ‡О¸М˚В ‡МЪЛЪВО‡ Н В- НУП·ЛМ‡МЪМУПЫ О‡ПЛМЛМТ‚flБ˚‚‡˛˘ВПЫ ·ВОНЫ ˜В- ОУ‚ВН‡. иУОЫ˜ВМЛВ Л ЛППЫМУıЛПЛ˜ВТН‡fl ı‡ ‡НЪВ-ЛТЪЛН‡. ЗВТЪМ. кДез. 8, 31–34.

20.Matasova N.B., Myltseva S.V., Zenkova M.A., Graifer D.M., Vladimirov S.N., Karpova G.G. 1991. Isolation of ribosomal subunits containing intact rRNA from human placenta: estimation of functional activity of 80S ribosomes. Anal. Biochem. 198, 219–223.

21.Graifer D.M., Malygin A.A., Matasova N.B., Mundus D.A., Zenkova M.A., Karpova G.G. 1997. Studying functional significance of the sequence 980–1061 in the central domain of human 18S rRNA using complementary DNA probes. Biochim. Biophys. Acta. 1350, 335–344.

22.Ardini E., Pesole G., Tagliabue E., Magnifico A., Castronovo V., Sobel M.E., Colnaghi M.I., Menard S. 1998. The 67-kDa laminin receptor originated from a ribosomal protein that acquired a dual function during evolution.

Mol. Biol. Evol. 15, 1017–1025.

23.Jamieson K.V., Wu J., Hubbard S.R., Meruelo D. 2008. Crystal structure of the human laminin receptor precursor. J. Biol. Chem. 283, 3002–3005.

24.Spahn C.M., Beckmann R., Eswar N., Penczek P.A., Sali A., Blobel G., Frank J. 2001. Structure of the 80S ribosome from Saccharomyces cerevisiae – tRNA-ribosome and subunit-subunit interactions. Cell. 107, 373–386.

25.Brodersen D.E., Clemons W.M., Jr., Carter A.P., Wimberly B.T., Ramakrishnan V. 2002. Crystal structure of the 30 S ribosomal subunit from Thermus thermophilus: structure of the proteins and their interactions with 16S RNA. J. Mol. Biol. 316, 725–768.

26.Chandramouli P., Topf M., Menetret J.F., Eswar N., Cannone J.J., Gutell R.R., Sali A., Akey C.W. 2008. Structure of the mammalian 80S ribosome at 8.7 A resolution. Structure. 16, 535–548.

27.СВПВ¯НЛМ‡ з.Д., г‡ОВЪЛМ‡ Ц.л., еВ˘‡МЛМУ‚‡ е.а., кВФНУ‚‡ е.з., ЗВМ¸flПЛМУ‚‡ Д.Й., Й ‡ИЩВ С.е., д‡ ФУ‚‡ Й.Й. 2003. йН ЫКВМЛВ НУ‰УМУ‚ Пкзд ‚ к Л Ц-Т‡ИЪ‡ı Л·УТУП ˜ВОУ‚ВН‡ ФУ ‰‡ММ˚П ЩУЪУТ¯Л- ‚УН Т Ф УЛБ‚У‰М˚ПЛ UUUGUU. еУОВНЫОfl . ·ЛУОУ„Лfl. 37, 147–155.

28.Graifer D., Molotkov M., Styazhkina V., Demeshkina N., Bulygin K., Eremina A., Ivanov A., Laletina E., Ven’yaminova A., Karpova G. 2004. Variable and conserved elements of human ribosomes surrounding the mRNA at the decoding and upstream sites. Nucleic Acids Res. 32, 3282–3293.

29.Molotkov M.V., Graifer D.M., Popugaeva E.A., Bulygin K.N., Meschaninova M.I., Ven’yaminova A.G., Karpova G.G. 2006. mRNA 3' of the A site bound codon is located close to protein S3 on the human 80S ribosome. RNA Biol. 3, 122–129.

30.Masek T., Vopalensky V., Horvath O., Vortelova L., Feketova Z., Pospisek M. 2007. Hepatitis C virus internal ribosome entry site initiates protein synthesis at the authentic initiation codon in yeast. J. Gen. Virol. 88, 1992–2002.

31.Sizova D.V., Kolupaeva V.G., Pestova T.V., Shatsky I.N., Hellen C.U. 1998. Specific interaction of eukaryotic translation initiation factor 3 with the 5' nontranslated regions of hepatitis C virus and classical swine fever virus RNAs. J. Virol. 72, 4775–4782.

32.Valasek L., Mathew A.A., Shin B.S., Nielsen K.H., Szamecz B., Hinnebusch A.G. 2003. The yeast eIF3 subunits TIF32/a, NIP1/c, and eIF5 make critical connections with the 40S ribosome in vivo. Genes Dev. 17, 786–799.

33.Auth D., Brawerman G. 1992. A 33-kDa polypeptide with homology to the laminin receptor: component of translation machinery. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89, 4368–4372.

34.Garcia-Hernandez M., Davies E., Baskin T.I., Staswick P.E. 1996. Association of plant p40 protein with ribosomes is enhanced when polyribosomes form during periods of active tissue growth. Plant Physiol. 111, 559–568.

35.Siridechadilok B., Fraser C.S., Hall R.J., Doudna J.A., Nogales E. 2005. Structural roles for human translation factor eIF3 in initiation of protein synthesis. Science.

310, 1513–1515.

36.Otto G.A., Puglisi J.D. 2004. The pathway of HCV IRES- mediated translation initiation. Cell. 119, 369–380.