Специальные носители используются для присоединения некоторой функциональной или репортерной группы к 3'- положению синтетических олигонуклеотидов.

•Ненуклеозидные амидофосфиты это амидофосфитные реагенты, разработанные для введения разнообразных функциональных групп в концевое положение олигонуклеотида или между нуклеотидными остатками посреди последовательности. Чтобы быть пригодным для введения в середину цепи, амидофосфит должен содержать, по крайней мере, две гидроксильные группы, одна из которых защищается DMT-группой, а вторая несёт реакционноспособную амидофосфитную группировку.

•Ненуклеозидные амидофосфиты применяются для введения в олигонуклеотид различных групп, которые не встречаются в природных нуклеозидах. Синтезирован широкий спектр подобных реагентов, служащих, например, для введения 5'-фосфата, аминогруппы, меркаптогруппы, альдегидной и карбоксильной групп, алкиновых фрагментов, флуоресцентных красителей и тушителей, гидрофильных и гидрофобных модификаций, биотина.

Химический синтез олигонуклеотидов. Основы H-фосфонатного и фосфотриэфирного методов синтеза олигонуклеотидов в растворе (Тодд, 1950 г.г)

(MeO)2TrO O B

O

-O P O

H

•Спустя 30 лет адаптировали H-фосфонатную конденсацию к твердофазному синтезу. Использовали нуклеозидные H-фосфонаты в качестве строительных блоков. В качестве

активаторов – пивалоилхлорид (CH3)3CC(O)Cl, 2,4,6-триизопропилбензолсульфонилхлорида (TIPS-Cl)

Cинтез Н-фосфонатного синтона из нуклеозида и салицилхлорфосфита

H

Н-фосфонаты активируют обработкой пивалоилхлоридом

•Конденсация приводит к образованию Н-фосфонат- диэфирной связи, которые достаточно стабильны и могут подвергаться окислению до фосфата не постадийно, как в фосфитамидном методе, а после завершения образования полинуклеотидной цепи.

Две стадии синтетического цикла :

1) удаление диметокситритильной защиты и 2) конденсация