Метод инкорпорации 5-бромдезоксиуридина.

•Используется для выявления пролиферирующих клеток в живых тканях. 5-Бромдезоксиуридин способен заменить тимидин в процессе репликации ДНК. Иммуногистохимическое окрашивание с антителами к бромдезоксиуридину позволяет обнаружить включенный модифицированный нуклеозид, тем самым выявляя пролиферирующие клетки.

•ИНКОРПОРАЦИЯ – включение тест молекул в природные макромолекулы.

32

Метод инкорпорации 5-бромдезоксиуридина. Слева - направо: Проявление с помощью анти- бромдезоксиуридиновых антител бромдезоксиуридиновой метки в клетках гладкомышечной опухоли; лейомиосаркомы низкой (6.1%) и высокой (17.4%) степени злокачественности

33

Дифференциальная окраска сестринских хроматид

•При культивировании клеток в присутствии 5- бромдезоксиуридина в течении двух клеточных циклов обеспечивается разное его содержание в сестринских хроматидах и, соответственно, их дифференциальное окрашивание, позволяющее выявлять обмены между ними, которые возникают спонтанно или под воздействием мутагенных факторов.

34

Что нужно знать после лекций

•Реакции присоединения и замещения по атомам углерода в гетероциклических основаниях. Реакции свободно-радикального замещения по СН3-группе тимидина. Галоидирование в неводной среде как пример реакций электрофильного замещения по положению С5. Реакция присоединения-отщепления по двойной связи С5-С6 пиримидинов: галоидирование. Модификация пуринов по С8- положению.

•Спектральные и кислотно-основные характеристики нуклеозидных производных урацила и его галоидзамещенных. 5-бромдезоксиуридин как мутаген и в методе инкорпорации. Другие примеры использования галогенпроизводных.

•Биосинтез пиримидинов. Тимидилат-синтаза – фермент-мишень для химиотерапии рака.

38