Добавил:

Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.

Вуз:

Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина

Предмет:

[НЕСОРТИРОВАННОЕ]

Файл:

posobie_po_veterinarnoy_virusologii

.pdf

Скачиваний:

151

Добавлен:

28.05.2015

Размер:

644.94 Кб

Скачать

☆

<<< < Предыдущая 1 2 3 45 / 75 6 7 > Следующая >>>

лезней, в том числе вызванных возбудителями, трудно культивируемыми и медленно растущими, а также требующими особых условий культивирования;

при генотипировании, оценке вирулентности и определении устойчивости к ан-

тибиотикам различных микроорганизмов и вирусов; в генодиагностике и гене-

тической дактилоскопии; в пренатальной диагностике и биологическом кон-

троле препаратов крови; для контроля бактериемии и вирусемии; для оценки стадии болезни, прогноза и эффективности проводимого лечения. С помощью ПЦР в одной пробе можно определять неограниченное количество возбудите-

лей острых, хронических, персистирующих и латентных инфекций, а также ва-

рианты возбудителей, которые трудно диагностировать другими методами.

Полимеразная цепная реакция обладает значительными преимущества-

ми по сравнению с классическими методами лабораторного исследования. В

случаях, когда традиционные методы лабораторной диагностики оказываются фактически неэффективными или принципиально неприемлемыми, единствен-

ными методами становятся методы, основанные на прямой идентификации ге-

нетического материала возбудителя.

Однако ПЦР имеет и существенные недостатки: получение ложнополо-

жительных и ложноотрицательных результатов.

Причиной получения ложноположительных результатов является кон-

таминация (загрязнение) проб или помещений лаборатории. Различают два ос-

новных вида контаминации:

от пробы к пробе на этапах отбора и подготовки проб;

ампликонами (при попадании ампликонов в реакционную смесь,

они будут являться мишенью для реамплификации)

Получение ложноотрицательных результатов связано в основном с пре-

аналитическими процедурами: не правильный отбор проб без учёта патогенеза болезни (отсутствие возбудителя в исследуемом материале), хранение и транс-

портировка материала в лабораторию, многократная дефростация материала;

возможны потери или разрушения нуклеиновых кислот в процессе их выделе-

ния, присутствие в пробе большого количества ингибиторов ПЦР и т.д.

Высокая чувствительность метода ПЦР определяет очень строгие тре-

бования, предъявляемые к организации ПЦР-лаборатории: разделение лабора-

тории на отдельные зоны (зона пробоподготовки и выделения нуклеиновых ки-

слот, зона проведения ПЦР и зона детекции продуктов ПЦР), в которых долж-

ны работать отдельные сотрудники, закрепление за зонами лабораторного обо-

рудования, расходных материалов, одноразового пластика, спецодежды, убо-

рочного инвентаря.

Движение персонала и исследуемых проб должно проходить строго в одном направлении: от зоны пробоподготовки и выделения нуклеиновых ки-

слот к зоне постановки ПЦР и детекции продуктов ПЦР.

Так как многие инфекционные болезни различной этиологии (вирусные,

бактериальные, грибковые, паразитарные и др.) имеют сходные эпизоотологиче-

ские данные, клинические признаки и патологоанатомические изменения, то для постановки окончательного диагноза необходимо провести лабораторные исследо-

вания. Студентам предлагается рассматривать лабораторную диагностику вирус-

ных болезней согласно принципам, изложенным в таблице.

№

Название

Последовательность этапов лабораторной диагностики

п/

болезни

Патмате-

Обнаружение

Выделение

Иденти-

Ретро-

риал

вируса (ин-

вируса (изо-

фикация

спектив-

дикация)

ляция)

выделен-

ная ди-

ного виру-

агности-

са

ка

Бешенство

От трупов

го-

Световая

мик-

Биопроба

на

Световая

лова

двумя

роскопия

белых мышах

микроско-

шейными

по-

(тельца

Бабе-

(+ клиника, ги-

пия (тельца

звонками

от

ша–Негри)

бель)

Бабеша-

крупного

жи-

РИФ

Негри)

вотного

или

РДП

РИФ

труп

мелкого

Биопроба

на

РДП

животного цели-

белых мышах

ком.

Болезнь

От

больных –

ПЦР

Биопроба

в.

ПЦР

ИФА

Ауэски

кровь на парные

ИФА

культуре

кле-

ИФА

РН

(псевдобе-

сыворотки.

От

РИФ

ток

почек и

РН

РНГА

шенство)

трупов

РНГА

щитовидной

РИФ

РСК

головной

мозг

Биопроба

на

железы свиней,

РДП

миндалины,

лёг-

кроликах

семенников

РНГА

РЛА

кие,

паренхима-

клиника:

зуд,

телят,

переви-

тозные органы,

расчёсы,

нерв-

ваемых: РК-15,

абортплоды.

ные явления)

ВНК-21.

Чума КРС

От

трупов

ПЦР

Биопроба

на

ПЦР

РН

лимфоузлы,

се-

ИФА

культуре

кле-

ИФА

РСК

лезёнка.

РИФ

ток

РН

ИФА

РСК

(+ ЦПД, обра-

РИФ

РДП

зование телец-

РНГА

включений)

										44

1	2		3			4	5		6	7

6.	Аденови-	От	больных		–	ПЦР	Биопроба	на	ПЦР	РНГА
	русная ин-	смывы носовые,				ИФА	культуре	кле-	ИФА	ИФА
	фекция КРС	глазные,		рек-		РИФ	ток (+ЦПД)		РСК
		тальные,		кровь
		на парные сыво-
		ротки. От трупов
		- паренхиматоз-
		ные	органы		и
		регионарные
		лимфоузлы.

7.	Вирусная	От	больных		-	ПЦР	Биопроба	на	ПЦР	РНГА
	диарея КРС	смывы носовые,				РИФ	культуре	кле-	ИФА	ИФА
		глазные,		рек-		ИФА	ток (+ ЦПД)		РН
		тальные,		кровь
		на парные сыво-
		ротки; от трупов
		– паренхиматоз-
		ные органы, ку-
		сочки кишечни-
		ка,	регионарные
		лимфоузлы.
8.	Парагрипп-	От	больных		-	ПЦР	Биопроба	на	РТГАд	РНГА
	3 крупного	смывы носовые,				ИФА	культуре	кле-	РН	ИФА
	КРС	глазные,		рек-		РИФ	ток (+ ЦПД, +
		тальные,		кровь			РГАд с эритро-
		на парные сыво-					цитами	мор-
		ротки; от трупов					ской свинки)
		– паренхиматоз-
		ные органы, ку-
		сочки кишечни-
		ка,	регионарные
		лимфоузлы.
9.	Респиратор-	От	больных		-	ИФА	Биопроба	на	РН	ИФА
	но-синцити-	смывы носовые,				РИФ	культуре	кле-
	альная ин-	глазные,		рек-			ток (+ ЦПД)
	фекция КРС	тальные,		кровь
		на парные сыво-
		ротки; от трупов
		– паренхиматоз-
		ные органы, ку-
		сочки кишечни-
		ка,	регионарные
		лимфоузлы.
10	Лейкоз КРС	От	инфициро-			ПЦР			ПЦР	ИФА
		ванных –		кровь						РИД
		цельная и на сы-
		воротку; от тру-
		пов	– паренхи-
		матозные		орга-
		ны	и лимфоуз-
		лы.

Катараль-

От

больных

–

ПЦР

Биопроба

на.

РИФ

РСК

ная лихо-

кровь цельная и

КЭ (на ХАО +

ПЦР

радка овец

на

сыворотку;

фокусы);

куль-

РСК

от трупов – селе-

туре клеток .

зёнка,

лимфоуз-

лы.

Болезнь

От

больных

–

РИФ

Биопроба

на

ИФА

РН

Тешена

кровь на парные

культуре

кле-

РН

ИФА

сыворотки,

фе-

ток (+ ЦПД)

калии,

мазки

со

слизистой

пря-

мой

кишки;

от

трупов - голов-

ной

спинной

мозг,

кусочки

слизистой

обо-

дочной кишки.

Классиче-

От

больных

–

ПЦР

Биопроба

на

ПЦР

ская чума

кровь. Труп по-

ИФА

культуре

кле-

РНГА

свиней

росят

целиком

РИФ

ток РK-15 (±

РН

или

от

трупа

РНГА

ЦПД

с поста-

селезёнка,

лим-

Биопроба

на

новкой РИФ)

фоузлы, минда-

интактных

лины,

почки,

(неиммунных)

лёгкие.

подсвинках

Африкан-

От

больных

–

ПЦР

Биопроба

на

ПЦР

ская чума

кровь. Труп по-

ИФА

культуре

кле-

РТГАд

свиней

росят

целиком

Биопроба

на

ток

ЦПД,

или

от

трупа

иммунных

РГАд с эритро-

селезёнка,

лим-

подсвинках

цитами свиньи)

фоузлы, минда-

против КЧС и

лины,

почки,

не иммунных

лёгкие.

Трансмис-

От

больных

–

ПЦР

Биопроба

на

ПЦР

ИФА

сивный

кровь на парные

РИФ

культуре

кле-

РН

РНГА

гастроэнте-

сыворотки.

От

ИФА

ток (+ ЦПД) .

рит свиней

трупов - кишеч-

ник

содержи-

мым, мезентери-

альные

лимфо-

узлы,

паренхи-

матозные

орга-

ны.

Грипп

От

больных

ПЦР

Биопроба

на

ПЦР

РТГА

свиней

носовые смывы;

ИФА

белых мышах,

ИФА

от

трупов

–

КЭ

(+РГА),

РТГА

лёгкие,

трахея,

культуре

кле-

РТГАд

лимфоузлы.

ток

(+ЦПД,

РГАд с эритро-

цитами кур)

Оспа свиней

От больных жи-

Световая

ви-

Биопроба на 2-

Световая

вотных

стенки

русоскопия

3 мес. порося-

вирусоско-

папул и корочки.

(окраска

по

тах

пия (окра-

Морозову).

ска по Мо-

Биопроба на 2-

розову).

3 мес. порося-

тах

Инфекци-

От

больных

–

ПЦР

Биопроба

на

ПЦР

РДП

онная

кровь;

от трупов

РСК

культуре

кле-

РТГАд

ИФА

анемия

паренхиматоз-

РДП

ток (+ ЦПД, +

ИФА

РТГА

лошадей

ные

органы

Параллельно с

РГАд

с эрито-

лимфоузлы.

индикацией

роцитами

мор-

проводят

ге-

ской свинки)

матологиче-

ские

и гисто-

логические

исследования.

Ринопнев-

От больных жи-

РИФ

Биопроба

на

РТГАд

ИФА

мония

вотных – смывы

ИФА

КЭ (+ РГА с

ИФА

РТГА

лошадей

со

слизистых

РСК

эритроцитами

ПЦР

носа,

конъюнк-

ПЦР

лошадей

или

тивы,

парные

Световая

мик-

морских

сви-

пробы

сыворо-

роскопия

те-

нок);

культура

ток; от трупов –

лец-

клеток

(+ЦПД,

кусочки

голов-

включений.

+ РГАд с эрит-

ного и спинного

роцитами

ло-

мозга,

абортиро-

шадей

мор-

ванные плоды.

ских свинок)

Вирусный

От

больных

РСК

Культура

кле-

РН

артериит

смывы

носовые

ток (+ЦПД)

РСК

лошадей

глазные,

кровь

ИФА

(«розовый

на парные сыво-

глаз»)

ротки;

от трупов

– лёгкие, парен-

химатозные

ор-

ганы,

лимфоуз-

лы, абортплоды.

Миксоматоз

Клинически

ИФА

Биопроба

на

ИФА

кроликов

больных

кроли-

Параллельно

крольчатах

ков (участки ко-

проводят

гис-

клиника и

ги-

жи)

свежие

тологические

бель)

трупы.

исследования

Заражение

КЭ

на ХАО (+ фо-

кусы)

Геморраги-

Свежие

трупы

РГА

(+)

(с

Биопроба

на

РТГА

ческая бо-

или

от

трупов

эритроцитами

кроликах,

за-

ИФА

лезнь кро-

паренхиматоз-

овец,

птиц и

ражение

в/м,

РДСК

ликов

ные

органы

человека

и/н. Через 12-

(особенно

пе-

группы);

72 ч. появля-

чень)

РДСК, ИФА

ются

клин.

признаки.

Грипп птиц

От больной пти-

ПЦР

Заражение

КЭ

РТГА

цы

- мазки

из

ИФА

(гибель

±,

ИФА

трахеи и клоаки,

РИФ

РГА+)

ПЦР

кровь на парные

сыворотки и ви-

русовыделение,

помёт. От тру-

пов – селезёнка,

головной

мозг,

трахея,

лёгкие,

участки

кишеч-

ника.

Ньюкасл-

От

больных

ПЦР

Заражение

КЭ

РТГА

ская болезнь

парные

пробы

РИФ

(гибель

±,

ИФА

сыворотки

кро-

РГА+)

ви,

смывы

из

трахеи и клоаки;

от трупов – го-

лова,

лёгкие,

трахея,

селезён-

ка.

Инфекци-

От

больных

–

РИФ

Заражение КЭ

РИФ

ИФА

онный

смывы

горта-

( гибель ±, кар-

РДП

РНГА

бронхит

ни, трахеи, кровь

ликовость

или

птиц

на парные сыво-

мумификация

ротки;

от

тру-

зародыша)

пов

–

лёгкие,

почки, яйцеводы

Инфекци-

От

больных

–

РИФ

Биопроба

на

ИФА

онный ла-

кровь на парные

Световая мик-

КЭ (+ фокусы

РН

ринготрахе-

сыворотки;

от

роскопия

на ХАО).

ит птиц

трупов

–

гор-

телец-

(ИЛТ)

тань,

паренхи-

включений

матозные

орга-

Зейфрида

ны, лимфоузлы.

Биопроба

на

цыплятах

30-

90 дн.

Болезнь

От

больных

РДП

Биопроба

на

РДП

Марека

кровь,

очины

ИФА

КЭ ( + очаги

ИФА

вырванных

Параллельно

клеточной про-

перьев. От тру-

проводят

гис-

лиферации

на

пов

–

паренхи-

тологические

ХАО.

матозные

орга-

исследования.

ны,

опухолевые

Биопроба

на

образования,

суточных

цы-

нервные стволы,

плятах

лимфоузлы.

Оспа птиц

От

больных

–

Световая

ви-

Заражение

КЭ

Световая

Редко в

оспины и короч-

русоскопия на

на ХАО (обра-

вирусоско-

РДП

ки.

обнаружение

зование оспин)

пия

элементарных

РИФ

телец (вирио-

ны оспы)

Биопроба

на

цыплятах

(за-

ражают в ска-

рифицирован-

ную

кожу

гребня

или

фолликулы

бедра)

Чума плото-

От

больных

ПЦР

Биопроба

на

ПЦР

ИФА

ядных

смывы носовые,

ИФА

культуре

кле-

ИФА

глазные,

кровь

ток

(+ЦПД);

РТГА

на

вирусовыде-

КЭ

(+ гибель,

ление и парные

фокусы

на

сыворотки,

фе-

ХАО, РГА ± с

калии. От трупов

эритроцитами

– трахея, лёгкие,

кур

и морских

паренхиматоз-

свинок)

ные органы, го-

ловной

мозг,

мочевой пузырь,

лимфоузлы.

Аденови-

Инф. гепатит собак (болезнь Рубарта)

русная ин-

От

больных

ПЦР

Биопроба

на

ПЦР

ИФА

фекция со-

смывы с

конъ-

ИФА

культуре

кле-

ИФА

бак

юнктивы,

моча,

ток (+ ЦПД)

фекалии,

кровь

на парные сыво-

ротки, от трупов

– печень и моче-

вой пузырь, ас-

цитная

жид-

кость.

Аденовироз собак (инфекционный ларинготрахеит собак)

От

больных

ПЦР

Биопроба

на

ПЦР

ИФА

сыворотка

кро-

ИФА

культуре

кле-

ИФА

ви, смывы носо-

ток (+ ЦПД)

РН

вые, глазные.

Ринотрахеит

От

больных

ПЦР

Биопроба

на

ПЦР

ИФА

кошек

смывы носовые,

РИФ

культуре

кле-

РН

глазные,

кровь

ток (+ ЦПД)

на парыне сыво-

ротки; от трупов

паренхиматоз-

ные

органы

лимфоузлы.

									49

1	2		3	4	5			6	7

32	Панлейко-	От больных –		ПЦР	Биопроба	на	РН.		РН
	пения ко-	кровь, от трупов		ИФА	культуре	кле-	ИФА		РИФ
	шек	– селезёнка, го-			ток (+ЦПД)				ИФА
		ловной	мозг,
		участок	кишеч-
		ника.

Специфическая профилактика вирусных болезней

Специфическая профилактика занимает ведущее место в борьбе со многи-

ми вирусными болезнями человека и животных. Вакцинопрофилактика многих вирусных болезней животных достигла широких масштабов и стала неотъемле-

мой частью технологии ведения животноводства. Создание высокоэффективных вакцин и современных методов их производства позволили разработать нацио-

нальные и международные программы контроля и искоренения ряда вирусных болезней человека и животных.

На сегодняшний день отсутствует общепринятая научно обоснованная классификация вакцин. Предложено разделять вакцины по поколениям, техноло-

гии изготовления и по составу компонентов.

Вакцины I-го поколения (цельновирионные):

- живые вирус-вакцины готовят из вирусов (а) природно ослабленных, (б)

гетерологичных, (в) аттенуированных пассажами в гетерологичных организмах или в культурах клеток;

- инактивированные вакцины готовят из инактивированных целых вирио-

нов.

Живые вакцины обладают следующими преимуществами перед инакти-

вированными вакцинами:

создают высокую напряжённость и длительность иммунитета;

большинство из них используют в малых дозах при однократном вве-

дении;

возможно применение перорально и интраназально;

иммунитет вырабатывается в более короткий срок.

Однако живые вакцины могут вызывать поствакцинальные осложнения у молодых, ослабленных и беременных животных, не исключена реверсия виру-

лентности вакцинного штамма.

Инактивированные вакцины отличаются большей стабильностью свойств и они безопаснее, однако, они стимулируют менее длительный иммуни-

тет, требуются более высокие дозы введения и ревакцинации.

Вакцины II-го поколения (субъединичные – молекулярные).

Получить антигены для этих вакцин можно несколькими путями:

- Сплит-вакцины (расщеплённые вакцины) представляют собой взвесь поверхностных и внутренних структурных компонентов вируса без удаления нук-

леиновых кислот (генома), который разрушается в процессе обработки детерген-

тами, ультразвуком в сочетании с замораживанием и оттаиванием вируссодержа-

щей суспензии. Для вакцины используют только только протективные антигены вируса, которые индуцируют в организме животных факторы специфического иммунитета (защита от заболевания). Эти вакцины не содержат геномов вируса и избыточного количества балластных антигенов;

- Синтетические вакцины готовят методом биоорганического синтеза протективных антигенов из отдельных аминокислот, полипептидов, аналогичных нативным вирусным белкам.

Перспективы создания субъединичных вакцин безграничны, особенно, ес-

ли они будут производиться с применением методов генной инженерии.

Под генной инженерией понимают конструирование in vitro функцио-

нально активных генетических программ, т.е. рекомбинанатных ДНК.

Основные этапы конструирования. С помощью ферментов – рестриктаз из генома вируса «вырезают» интересующий нас ген (кодирующий иммунный бе-

лок), этот ген встраивают с помощью ферментов – лигаз в вектор (в качестве век-

тора, например, используют плазмиды E.coli). Полученную рекомбинантную ДНК вносят в E.coli. В этих клетках происходит экспрессия генов в составе рекомби-

нантных ДНК, продукт экспрессии – иммунные белки вируса, их выделяют и ис-

пользуют в качестве вакцины.

<<< < Предыдущая 1 2 3 45 / 75 6 7 > Следующая >>>

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

#
11.02.2015788.1 Кб30Obschaya_i_neorg_khimia.doc
#
11.02.201547.38 Кб13obshhie_rekomendacii_po_oformleniju_referata.docx
#
11.02.2015286.72 Кб57OP-_8.doc
#
14.11.201941.47 Кб14Opr_kach-va.docx
#
11.02.2015744.45 Кб167OTChET_PO_PRAKTIKE.doc
#
28.05.2015644.94 Кб151posobie_po_veterinarnoy_virusologii.pdf
#
11.02.20152.45 Mб30pozvonochnik_i_cherep.docx
#
25.03.2016100.86 Кб30Praktika_FVM расчеты рационов.doc
#
25.12.2018700.93 Кб25Pravovedenie.doc
#
06.09.201934.01 Кб11Programma_Povtorenia_k_ekzamenu.docx
#
11.02.20154.18 Mб43punetti_enziklopediia_sobaki_rabochie_sobaki.rtf