Глава 2. Экспериментальная часть

2.1. Материалы и методы

2.1.1. Растительный материал и приготовление вытяжек из лекарственного сырья

В качестве объекта исследований использовали проростки озимой пшеницы (Triticum aestivum L.) с. Казанская 560, которые выращивали в течение 7 суток при комнатной температуре.

В работе был использован сок чистотела большого (Chelidonium majus L.), который был собран в экологически чистых районах Республики Татарстан. Трава содержит более 20 алкалоидов (хелидонин рисунок 1, хелеритрин, сангвинарин, протопин и др.), эфирные масла, витамин С (аскорбиновая кислота) (от 170 до 1000 мг %), витамин А (каротин) (до 14,9 мг %), флавоноиды, сапонины и органические кислоты (лимонную, яблочную, янтарную и хелидоновую).

Рисунок 2. Общее строение хелидонина (по Андреева, 2005).

Образцы растительных соков из чистотела большого были получены следующим способом: свежие листья (5 г) промывали проточной водопроводной водой и измельчали. Полученную массу заворачивали в 4–6 слоев марли, отжимали между двумя стерильными металлическими пластинами, помещенными в тиски. Полученный сок центрифугировали 10 мин. при 4000 об/мин., далее супернатант пропускали через мембранный фильтр Synpor с диаметром пор 0,2 мкм. Стерильный растительный сок разливали в пробирки Эппендорф и хранили при температуре –20 °C. Перед исследованием соки растений разводили стерильной дистиллированной водой до концентрации 1:10 и 1:100.

2.1.2. «Зеленый» синтез бионаночастиц серебра модифицированных соком Chelidonium majus Образцы бионаночастиц серебра были синтезированы с помощью чистотела большого следующим образом:

Приготовленный сок чистотела большого (7 мл) смешивали с дистиллированной водой (29 мл) и добавили сульфат серебра AgSO4 (0,06 г). Полученный раствор перемешали 2 минуты при температуре 65С в магнитной мешалке, обладающей функцией электроплитки -Hei-Standart. Наблюдали изменение цвета от светло-желтого до коричневого, что свидетельствует образование бионаночастиц серебра. Перед исследованием раствор с бионаночастицами серебра разводили дистиллированной водой до концентрации 1:10; 1:100 и 1:1000. БНЧ серебра добавили к тест-системам (контрольным и зараженным проросткам пшеницы), отсюда получили биологический эффект.

Рисунок 3. Схема «зеленого» синтеза бионаночастиц и их тестирования. 2.1.3. Оценка фунгицидных свойств бионаносеребра

Для изучения влияния раствора бионаносеребра на всхожесть семян и рост инфицированных проростков озимой пшеницы (Triticum aestivum L.) с. Казанская 560, семена замачивали на сутки в водопроводной воде со спорами (Кое 500 тыс.спор/мл) фитопатогенного гриба Fusarium оxysporum [Smirnov, 2011]. Затем инфицированные и неинфицированные семена проращивали в темноте, в чашках Петри, на воде (Контроль) и на растворах, разведенных 1:10 и 1:100. Длину побегов и корней проростков пшеницы измеряли на 3 и 7 сутки, выращивания.

2.1.4. Статистическая обработка результатов

Статистическую обработку результатов проводили с использованием стандартных математических методов в программе Microsoft Excel. Группу данных считали однородной, если среднеквадратическое отклонение  в группе не превышало 15%. Различие между группами считали достоверным при Р ≤ 0.05.