ПРЕДИСЛОВИЕ.

Современный уровень науки требует от преподавателей постоянного совершенствования методических приемов, позволяющих оптимизировать процесс обучения. Создание методических пособий и практикумов является актуальным вариантом подобной работы.

Для практической работы студентов первого курса на кафедре гистологии требуется специальный альбом для зарисовки микроскопических препаратов и словесное их описание, а для теоретической работы - контрольные вопросы к каждому занятию.

Созданное на кафедре гистологии методическое пособие не требует альбома для зарисовки, включает контрольные вопросы к каждому занятию, описание микроскопических препаратов, предназначенных для изучения, что существенно облегчает самостоятельную работу студентов. Практикум иллюстрирован оригинальными рисунками и схемами, поясняющими строение клетки и различных видов тканей. Он включает материалы практических занятий, предусмотренных программой курса, а также материал для самостоятельной работы студентов.

!!! Альбом является главным отчётным документом студента при прохождении практикума по гистологии. Каждое занятие должно быть подписано преподавателем. В конце семестра студент получает зачёт по практикуму. Без данного зачёта студенты к экзаменам не допускаются.

ТЕХНИКА МИКРОСКОПИРОВАНИЯ

Для изучения гистологических препаратов студентам представляется стандартный набор технических средств, применяемых в гистологических лабораториях. Для микроскопирования используют (минимальный) набор средств:

1.Оптический микроскоп;

2.Осветитель;

3.Средства ухода за микроскопом.

1). МИКРОСКОП.

Основным прибором, которым пользуются студенты на практических занятиях, является оптический микроскоп. Микроскоп состоит из механических и оптических частей.

Механическая часть включает: 1). штатив с механизмом фокусировки; 2). предметный столик; 3). механизм перемещения конденсора; 4). револьверное устройство для быстрой смены микрообъективов разного увеличения.

Оптическая часть состоит из: 1). окуляра; 2). объектива; 3). конденсора; 4). зеркала.

Объективы состоят из оправы и системы линз высокого качества, увеличивающих изображение препарата. Объективы подразделяют на «сухие» и «иммерсионные». Первые работают в воздушной среде (т.е. перед передней линзой микробъектива и препаратом находится воздух), вторые требуют нанесения на препарат иммерсионной жидкости с определенным показателем преломления (вода, глицерин, иммерсионное масло).

Важным элементом характеристики объектива является его увеличение. Объективы с увеличением 3,5-10х (иногда 20х) называются объективами малого увеличения, объективы с увеличением 40х и более называют объективами большого увеличения. Степень увеличения обозначена на оправе объектива целыми числами (8; 10…; 40х). На оправе также указана апертура объектива – это величина, характеризующая его разрешающую способность, т.е. способность раздельного изображения двух близколежащих микроскопических объектов (измеряется в линиях на милиметр). Апертура обозначается десятичной дробью (0,20; 0,65; 1,25).Чем выше апертурное число, тем качественнее объектив.

Окуляры - афокальные оптические системы линз, укреплённых в металлической оправе, характеризующиеся увеличением (5х; 7х; 10х; 15х; 20х).

ПРИМЕЧАНИЯ: 1. Определить увеличение системы объектив - окуляр можно перемножив их увеличения (например, объектив 40х окуляр 10х - увеличение 400х).

2. Увеличение системы объектив - окуляр не должно превышать величины апертуры данного объектива, умноженной на 1000. Объектив 90х, апертура 1,25, окуляр 10, увеличение = 900 - правильное соотношение объектива и окуляра. Объектив 90х, апертура 1,25, окуляр 15, увеличение = 1350х - соотношение оптики выбрано не верно. Слишком большое увеличение вызывает ухудшение резкости и затрудняет изучение тонких структур микропрепарата.

Конденсор - система линз, служащая для концентрации и рассеивания лучей света на микропрепарате. Конденсоры снабжены ирисовой диафрагмой для регулировки величины светового потока. Возможна работа без конденсора.

Зеркало - располагается ниже конденсора и служит для направления света от его источника на микропрепарат. Микроскопы комплектуются двумя зеркалами, смонтированными в одной оправе - плоским и вогнутым. Плоское зеркало используют при искусственном освещении совместно с конденсором, вогнутое - при работе без конденсора, или с естественным освещением.

2). ОСВЕТИТЕЛЬ.

На практических занятиях по гистологии в качестве осветителя используется лампа накаливания мощностью 100 ватт, заключенная в матовый светорассеиватель шаровидной формы.

3). СРЕДСТВА УХОДА ЗА МИКРОСКОПОМ.

1. Склянка с органическим растворителем (ксилол или толуол) для очистки оптики микроскопа от жировых загрязнений. Использовние спирта и эфира для очистки оптики микроскопа приводит к ее порче, ввиду растворения склеивающего линзы бальзама.

2. Хлопчатобумажная тряпочка для очистки оптики. Вату для очистки оптики не использовать! Ворс!

ВНИМАНИЕ!!!! ОТРАЖАЮЩИЙ СЛОЙ ЗЕРКАЛ МИКРОСКОПОВ НАНЕСЕН ПОВЕРХ СТЕКЛЯННОЙ ОСНОВЫ И ЛЕГКО ПОВРЕЖДАЕТСЯ. БУДЬТЕ ОСТОРОЖНЫ!!!

ПРАВИЛА МИКРОСКОПИРОВАНИЯ:

1.Установите микроскоп на рабочем столе прямо, во время работы он не должен перемещаться.

2.Убедитесь в чистоте объектива и окуляра. При необходимости очистите их от загрязнений.

3.Используя револьвер с объективами, установите объектив малого увеличения, поместите препарат на столик микроскопа покровным стеклом вверх.

4.Наблюдая в окуляр и перемещая зеркало добейтесь максимальной яркости поля изображения.

5.Глядя сбоку на микроскоп, опускайте его тубус, вращая от себя макровинт, пока линза объектива не будет на расстоянии 0,5 см от покровного стекла. Медленно вращайте макровинт на себя до получения чёткого изображения препарата.

6.Для более чёткой наводки используйте микровинт.

7.Перемещая столик микровинта с помощью рычажков, исследуйте изображение микропрепарата при малом увеличении.

8.Для детального изучения структур препарата используйте объектив

9.Поднимите тубус микроскопа при помощи поворота макровинта на себя и произведите смену объектива малого увеличения микроскопа при помощи револьвера на объектив большего увеличения.

10.Глядя сбоку на микроскоп, вращать микровинт от себя до тех пор, пока фронтальная линза не приблизится почти вплотную к покровному стеклу.

11.Вращать макровинт на себя до появления изображения препарата. Более чёткая наводка достигается вращением микровинта.

12.Приступайте к изучению микропрепарата под большим увеличением.

ПРИМЕЧАНИЯ. 1. Нельзя оставлять микроскоп на длительный срок “с включенным” объективом большого увеличения.

2.Переносить микроскоп нужно осторожно, придерживая его за основание.

3.Не крутить без необходимости регулировочные винты микроскопа.

4.Не прикасаться руками к оптическим частям микроскопа.

5.Не допускать повреждения микропрепаратов при микроскопировании.

6.Во всех неясных случаях необходимо обращаться за помощью к преподавателю.

Введение в гистологию

Гистохимические методы исследования Основные и кислотные красители. В водной среде основные красители

ионизируются как основания и приобретают положительный заряд: хромофор - NH3+ . При гистохимических реакциях в результате электростатического взаимодействия ионизированный основной краситель соединяется с отрицательно заряженными группами тканевых белков (СОО - ), нуклеиновых кислот (РО4-) и кислых мукополисахаридов (СООН-, SО3-). В результате этого cоединения возникает окраска. Изменяя рH красящего раствора можно получить избирательную окраску сульфатированных мукополисахаридов

приобретают отрицательный заряд: хромофор- СОО-. При гистологических реакциях электростатического взаимодействия ионизированный кислотный краситель соединяется с положительно заряженными группами тканевых белков ( NН3+), в результате чего возникает окраска.

Способность гистологических структур окрашиваться кислыми красителями

дезоксирибозы. Эти группы затем окрашивают специфическим для них реактивом ШИФФА на основе красителя - основной фуксин. В реактиве ШИФФА этот краситель бесцветен, а при взаимодействии с альдегидами он

полисахариды не гидролизуют, а окисляют йодной кислотой, открывшиеся при этом альдегидные группы выявляют, описанным в предыдущем случае способом. Для контроля реакции используют предшествующее окраске ферментативное разрушение исследуемых веществ (ДНК- ДНК-азой,

МЕСТО ДЛЯ ЗАРИСОВКИ