2009.-Byelorussian Pharmacopoeia_Volume 3

фаз А и В, то подвижную фазу полученного со-

става используют в начальном времени градиента и для количественного определения.

–скорость подвижной фазы: 1,0 мл/мин;

–спектрофотометрический детектор,

длина волны 254 нм.

–объем вводимой пробы: по 50 мкл рас-

творов сравнения (b) и (с) хроматографируют изократически, используя соотношение под-

вижных фаз А и В начального времени гради-

ента; 50 мкл испытуемого раствора (b) хрома-

тографируют согласно программе градиента;

50 мкл подвижной фазы А хроматографируют согласно программе градиента в качестве контрольного опыта.

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (b):

–разрешение: не менее 2,0 между пиками

амоксициллина и цефадроксила; при необходимости изменяют соотношение подвижных фаз

Аи В.

Предельное содержание примесей:

— любая примесь (не более 1%): на хроматограмме испытуемого раствора (b) площадь любого пика, кроме основного, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (с).

N,N-Диметиланилин (2.4.26, метод А или

В). Не более 0,002% (20 ppm).

Вода (2.5.12). Не менее 11,5% и не более 14,5%. Определение проводят из 0,100 г испы-

туемого образца.

Сульфатная зола (2.4.14, метод А). Не более 1,0%. Определение проводят из 1,0 г испытуемого образца.

#Остаточные количества органических растворителей (2.4.24). Испытуемый образец

должен выдерживать требования статьи (5.4).

#Микробиологическая чистота (2.6.12, 2.6.13, 5.1.4). Амоксициллин тригидрат в условиях испытания обладает антимикробным действием, для устранения которого используют инактиватор — пенициллиназу, которую вносят

вфосфатный буферный раствор, среды № 8 и

№ 11 из расчета 1000 ЕД/мл.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Жидкостная хроматография (2.2.29), как

указано в испытании «Сопутствующие приме-

си», со следующими изменениями. Условия хроматографирования:

–подвижная фаза: соотношение подвижных

фаз А и В начального времени градиента в со-

ответствии с параметрами пригодности хромато-

графической системы;

–объем вводимой пробы: по 50 мкл испытуемого раствора (а) и раствора сравнения (а).

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (а):

–относительное стандартное отклонение: не более 1,0% для площадей пиков при

шести повторных вводах пробы.

Содержание C16H19N3O5S рассчитывают в

процентах с учетом содержания амоксициллина в ФСО амоксициллина тригидрата.

ХРАНЕНИЕ

В воздухонепроницаемом контейнере.

ПРИМЕСИ

HH

А.(2S,5R,6R)-6-Амино-3,3-диметил-7-оксо- 4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновая кислота (6-аминопенициллановая кислота).

HO

В. (2S,5R,6R)-6-[[(2S)-2-Амино-2-(4-гидрокси- фенил)ацетил]амино]-3,3-диметил-7-оксо-4-тиа- 1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновая кислота (L-амоксициллин).

HO

С. (4S)-2-[5-4-Гидроксифенил)-3,6-диоксо- пиперазин-2-ил]-5,5-диметилтиазолидин-4- карбоновая кислота (дикетопиперазины амоксициллина).

O R

HO

D. R = CO2H: (4S)-2-[[[(2R)-2-Амино-2-(4- гидроксифенил)ацетил]амино]карбоксиметил]-

5,5-диметилтиазолидин-4-карбоновая кислота (пенициллановые кислоты амоксициллина).

Е. R=H:(2RS,4S)-2-[[[(2R)-2-Амино-2-(4-гидрокси- фенил)ацетил]амино]метил]-5,5-диметилтиа- золидин-4-карбоновая кислота (пениллановые кислоты амоксициллина).

N

N

OH

HO

F. 3-(4-Гидроксифенил)пиразин-2-ол.

HNH2

G. (2S,5R,6R)-6-[[(2R)-2-[[(2R)-2-Амино-

2-(4-гид-роксифенил)ацетил]амино]-2-(4- гидроксифенил)ацетил]амино]-3,3-диметил-

7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-

2-карбоновая кислота (D-(4-гидроксифенил)гли-

циламоксициллин).

CH3 O

H3C

H3C H NH

CO2H

HO

H. (2R)-[(2,2-Диметилпропаноил)амино]-2- (4-гидроксифенил)уксусная кислота.

H NH2

CO2H

HO

I. (2R)-2-Амино-2-(4-гидроксифенил)уксус-

ная кислота.

HO

J. Со-олигомеры амоксициллина и пенициллановых кислот амоксициллина.

HH

O

HO

L. (2R,5R,6R)-6-[[2S,5R,6R)-6-[[(2R)- 2-Амино-2-(4-гидроксифенил)ацетил]амино]- 3,3-диметил-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]- гептан-2-карбонил]амино]-3,3-диметил-7-оксо- 4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]-гептан-3-карбоновая

кислота (6-АПК амоксициллина амид).

АМПИЦИЛЛИН

Ampicillinum anhydricum

AMPICILLIN ANHYDROUS

H

N CH3

S

H H

O

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Ампициллин содержит не менее 96,0% и

не более 102,0% (2S,5R,6R)-6[[(2R)-2-амино-2- фенилацетил]амино]-3,3-диметил-7-оксо-4-тиа-

1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты в пересчете на безводное вещество.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА)

Белый или почти белый кристаллический

порошок.

Умеренно растворим в воде, практически не-

растворим в ацетоне, в 96% спирте и в жирных маслах. Растворяется в разведенных растворах кислот и гидроксидов щелочных металлов.

Обладает полиморфизмом (5.9).

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

Первая идентификация: А, D. Вторая идентификация: B, C, D.

А. Абсорбционная спектрофотометрия в ин-

фракрасной области (2.2.24).

Приготовление: в дисках с калия бромидом Р. Сравнение: ФСО ампициллина безводного.

В. Тонкослойная хроматография (2.2.27).

Испытуемый раствор. 25 мг испытуемого

образца растворяют в 10 мл раствора натрия гидрокарбоната Р.

Раствор сравнения (а). 25 мг ФСО ампициллина безводного растворяют в 10 мл раствора натрия гидрокарбоната Р.

Раствор сравнения (b). 25 мг ФСО амоксициллина тригидрата и 25 мг ФСО ампициллина безводного растворяют в 10 мл раствора натрия гидрокарбоната Р.

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля силанизированного Р.

Подвижная фаза: смесь из 10 объемов ацетона Р и 90 объемов раствора 154 г/л аммония ацетата Р, доведенного до рН 5,0 кислотой уксусной ледяной Р.

Наносимый объем пробы: 1 мкл.

Фронт подвижной фазы: не менее 15 см от линии старта.

Высушивание: на воздухе.

Проявление: пластинку обрабатывают

парами йода до проявления пятен. Просматривают при дневном свете.

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (b):

– на хроматограмме обнаруживаются два

полностью разделенных пятна.

Результаты: на хроматограмме испытуемого раствора обнаруживается пятно, соот-

ветствующее по расположению, цвету и раз-

меру основному пятну на хроматограмме

раствора сравнения (а).

С. 2 мг испытуемого образца помещают в пробирку длиной около 150 мм и диаметром около 15 мм, увлажняют 0,05 мл воды Р,

прибавляют 2 мл раствора формальдегида в серной кислоте Р и встряхивают. Раствор практически бесцветный. Пробирку выдерживают в водяной бане в течение 1 мин. Появляется темно-желтое окрашивание.

D. Испытуемый образец выдерживает ис-

пытание «Вода» как указано в разделе «Испытания».

ИСПЫТАНИЯ

Прозрачность (2.2.1). 1,0 г испытуемого образца растворяют в 10 мл 1 М раствора кислоты хлористоводородной (раствор

А). 1,0 г испытуемого образца растворяют в

10 мл раствора аммиака разведенного Р2

(раствор В). Сразу после приготовления растворы А и В по степени мутности не должны превышать эталон II.

рН (2.2.3). От 3,5 до 5,5. 0,1 г испытуемо-

го образца растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, Р и доводят до объема 40 мл этим же растворителем.

Удельное оптическое вращение (2.2.7). От +280 до +305 в пересчете на безводное ве-

щество. 62,5 мг испытуемого образца раство-

ряют в воде Р и доводят до объема 25,0 мл этим же растворителем.

Сопутствующие примеси. Жидкостная

хроматография (2.2.29).

Испытуемый раствор (а). 27,0 мг испы-

туемого образца растворяют в подвижной

фазе А и доводят до объема 50,0 мл этим же

растворителем.

Испытуемый раствор (b). Раствор готовят непосредственно перед использованием. 27,0 мг испытуемого образца раст-

воряют в подвижной фазе А и доводят до

объема 10,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (а). 27,0 мг ФСО ампициллина безводного растворяют в подвиж-

ной фазе А и доводят до объема 50,0 мл этим

же растворителем.

Раствор сравнения (b). 2,0 мг ФСО цефрадина растворяют в подвижной фазе А и доводят до объема 50 мл этим же растворителем. К 5,0 мл полученного раствора прибав-

ляют 5,0 мл раствора сравнения (а).

Раствор сравнения (с). 1,0 мл раствора сравнения (а) доводят подвижной фазой А до

объема 20,0 мл.

Условия хроматографирования:

–колонка длиной 0,25 м и внутренним ди-

аметром 4,6 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии Р

сразмером частиц 5 мкм;

–подвижная фаза:

–подвижная фаза А: к 0,5 мл кислоты уксусной разведенной Р прибавляют 50 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата Р, 50 мл ацетонитрила Р и доводят водой Р до объема 1000 мл;

–подвижная фаза В: к 0,5 мл кислоты уксусной разведенной Р прибавляют 50 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата Р, 400 мл ацетонитрила Р и доводят

водой Р до объема 1000 мл;

tR — время удерживания ампициллина на хроматограмме

раствора сравнения (с).

Если для достижения необходимого раз-

решения изменялось соотношение подвижных фаз А и В, то подвижную фазу полученного состава используют в начальном времени градиента и для количественного определения.

–скорость подвижной фазы: 1,0 мл/мин;

–спектрофотометрический детектор, длина волны 254 нм;

–объем вводимой пробы: по 50 мкл растворов сравнения (b) и (с) хроматографируют

изократически, используя соотношение под-

вижных фаз А и В начального времени гради-

ента; 50 мкл испытуемого раствора (b) хрома-

тографируют согласно программе градиента;

50 мкл подвижной фазы А хроматографиру-

ют согласно программе градиента в качестве

контрольного опыта.

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (b):

–разрешение: не менее 3,0 между

пиками ампициллина и цефрадина; при не-

обходимости изменяют соотношение под-

вижных фаз А и В;

Предельное содержание примесей:

–любая примесь (не более 1,0 %): на хроматограмме испытуемого раствора (b) площадь любого пика, кроме основного, не должна превышать площадь основного пика

на хроматограмме раствора сравнения (с).

N,N-Диметиланилин (2.4.26, метод В).

Не более 0,002 % (20 ppm).

Вода (2.5.12). Не более 2,0 %. Определе-

ние проводят из 0,300 г испытуемого образца.

Сульфатная зола (2.4.14, метод А). Не

более 0,5 %. Определение проводят из 1,0 г

испытуемого образца.

#Остаточные количества органических растворителей (2.4.24). Испытуемый образец должен выдерживать требования

статьи (5.4).

#Микробиологическая чистота (2.6.12, 2.6.13, 5.1.4). Ампициллин в условиях испытания обладает антимикробным действием.

Для устранения антимикробного действия

посев на питательные среды проводят мето-

дом мембранной фильтрации.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Жидкостная хроматография (2.2.29), как

указано в испытании «Сопутствующие приме-

си», со следующими изменениями. Условия хроматографирования:

–подвижная фаза: соотношение подвижных фаз А и В начального времени градиента в соответствии с параметрами пригодности хроматографической системы;

–объем вводимой пробы: по 50 мкл ис-

пытуемого раствора (а) и раствора сравнения (а).

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (а):

–относительное стандартное отклонение: не более 1,0 % для площадей пиков при шести повторных вводах пробы.

Содержание C16H19N3O4S рассчитывают в процентах с учетом содержания ампициллина

вФСО ампициллина безводного.

ХРАНЕНИЕ

В воздухонепроницаемом контейнере при температуре не выше 30°С.

ПРИМЕСИ

A. (2S,5R,6R)-6-Амино-3,3-диметил-7-оксо-

4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновая

кислота (6-аминопенициллановая кислота).

B. (2S,5R,6R)-6-[[(2S)-2-Амино-2-фенил- ацетил]амино]-3,3-диметил-7-оксо-4-тиа-1-аза- бицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновая кислота (L-ампи-

циллин).

C. (4S)-2-(3,6-Диоксо-5-фенилпиперазин-2- ил)-5,5-диметилтиазолидин-4-карбоновая кислота (дикетопиперазины ампициллина).

D. R = CO2H: (4S)-2-[[[(2R)-2-Амино-2-фенил- ацетил]амино]карбоксиметил]-5,5-диметил-

тиазолидин-4-карбоновая кислота (пенициллановые кислоты ампициллина).

F. R = H: (2RS,4S)-2-[[[(2R)-2-Амино-2-фенил- ацетил]амино]метил]-5,5-диметилтиазолидин-4-

карбоновая кислота (пенициллановые кислоты ампициллина).

HH

O

E. (2R)-2-[[[(2S,5R,6R)-6-[[(2R)-2-Амино-2-фенил-

ацетил]амино]-3,3-диметил-7-оксо-4-тиа-1-

азабицикло[3.2.0]гепт-2-ил]карбонил]амино]- 2-фенилуксусная кислота (ампициллинил-D- фенилглицин).

O

H

HN

NH

H

O

G. (3R,6R)-3,6-Дифенилпиперазин-2,5-дион.

N

N

OH

H. 3-Фенилпиразин-2-ол.

HNH2

I. (2S,5R,6R)-6-[[(2R)-2-[[(2R)-2-Амино-2-фенил- ацетил]амино]-2-фенилацетил]амино]-3,3- диметил-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]-

гептан-2-карбоновая кислота (D-фенилглицил-

ампициллин).

H

H3C

N CH3

S

H H

O

J. (2S,5R,6R)-6-[(2,2-Диметилпропаноил)- амино]-3,3-диметил-7-оксо-4-тиа-1-азаби- цикло[3.2.0]гептан-2-карбоновая кислота.

CH3 O

H3C

H3C H NH

CO2H

K. (2R)-2-[(2,2-Диметилпропаноил)амино]-2- фенилуксусная кислота.

HNH2

M. Со-олигомеры ампициллина и пенициллановых кислот ампициллина.

АМПИЦИЛЛИН НАТРИЯ

Ampicillinum natrium

AMPICILLIN SODIUM

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Ампициллин натрия содержит не менее 91,0% и не более 102,0% натрия (2S,5R,6R)-6[[(2R)-2- амино-2-фенилацетил]амино]-3,3-диметил-7-оксо- 4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилата в

пересчете на безводное вещество.

Полусинтетический продукт, полученный из

продукта ферментации.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА)

Белый или почти белый порошок. Гигроскопичен.

Легкорастворим в воде, умеренно рас-

творим в ацетоне, практически нерастворим в жирных маслах и вазелиновом масле.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

Первая идентификация: А, D. Вторая идентификация: B, C, D.

А. Абсорбционная спектрофотометрия в ин-

фракрасной области (2.2.24).

Приготовление: 0,250 г испытуемого образца растворяют в 5 мл воды Р, прибавляют 0,5 мл

кислоты уксусной разведенной Р, перемеши-

вают, выдерживают в течение 10 мин в ледяной бане и фильтруют через стеклянный фильтр

(ПОР 40) (2.1.2) под вакуумом. Кристаллы на фильтре промывают 2—3 мл смеси вода Р — ацетон Р (1:9, об/об), и сушат при температуре 60°С в течение 30 мин.

Сравнение: ФСО ампициллина тригидрата

#или спектр, представленный на рисунке 1.

В.Тонкослойная хроматография (2.2.27).

Испытуемый раствор. 25 мг испытуемого

образца растворяют в 10 мл раствора натрия гидрокарбоната Р.

Раствор сравнения (а). 25 мг ФСО ампициллина тригидрата растворяют в 10 мл раствора натрия гидрокарбоната Р.

Раствор сравнения (b). 25 мг ФСО амоксициллина тригидрата и 25 мг ФСО ампициллина тригидрата растворяют в 10 мл раствора натрия гидрокарбоната Р.

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля силанизированного Р.

Подвижная фаза: смесь из 10 объемов ацетона Р и 90 объемов раствора 154 г/л аммония ацетата Р, доведенного до рН 5,0 кислотой уксусной ледяной Р.

Наносимый объем пробы: 1 мкл.

Фронт подвижной фазы: не менее 15 см от

линии старта.

Высушивание: на воздухе.

Проявление: пластинку обрабатывают

парами йода до проявления пятен. Просматривают при дневном свете.

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (b):

– на хроматограмме обнаруживаются два полностью разделенных пятна.

Результаты: на хроматограмме испытуемого раствора обнаруживается пятно, соответствующее по расположению, размеру и цвету основному пятну на хроматограмме раствора сравнения (а).

С.2 мг испытуемого образца помещают

впробирку длиной около 150 мм и диаметром

около 15 мм. Увлажняют 0,05 мл воды Р, прибав-

ляют 2 мл раствора формальдегида в серной кислоте Р и встряхивают. Раствор практически бесцветный. Пробирку выдерживают в водяной

бане в течение 1 мин. Появляется темно-желтое

окрашивание.

D. Испытуемый образец дает реакцию (а) на

натрий (2.3.1).

ИСПЫТАНИЯ

Прозрачность (2.2.1). 1,0 г испытуемого образца помещают в коническую колбу и медлен-

но прибавляют при постоянном перемешивании

10 мл 1 М раствора кислоты хлористоводородной (раствор А). 1,0 г испытуемого образца растворяют в воде Р и доводят до объема 10,0 мл

этим же растворителем (раствор В). Сразу после

приготовления растворы А и В по степени мутно-

сти не должны превышать эталон II.

Оптическая плотность (2.2.25). Не более 0,15 при 430 нм. Измеряют оптическую плот-

ность раствора В сразу после приготовления,

как указано в испытании «Прозрачность».

рН (2.2.3). От 8,0 до 10,0. 2,0 г испытуемого

образца растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, Р и доводят до объема 20 мл этим

же растворителем. Через 10 мин после раство-

рения измеряют рН полученного раствора.

Удельное оптическое вращение (2.2.7). От +258 до +287 в пересчете на безводное вещество. 62,5 мг испытуемого образца растворяют

в растворе 4 г/л калия гидрофталата Р и доводят до объема 25,0 мл этим же растворителем.

Сопутствующие примеси. Жидкостная хроматография (2.2.29).

Испытуемый раствор (а). 31,0 мг испытуемо-

го образца растворяют в подвижной фазе А и до-

водят до объема 50,0 мл этим же растворителем.

Испытуемый раствор (b). Раствор готовят непосредственно перед использованием.

31,0 мг испытуемого образца растворяют в подвижной фазе А и доводят до объема 10,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (а). 27,0 мг ФСО ампициллина безводного растворяют в подвижной фазе А и доводят до объема 50,0 мл этим же раст-

ворителем.

Раствор сравнения (b). 2,0 мг ФСО цефрадина растворяют в подвижной фазе А и дово-

дят до объема 50 мл этим же растворителем.

К 5,0 мл полученного раствора прибавляют

5,0 мл раствора сравнения (а).

Раствор сравнения (с). 1,0 мл раствора

сравнения (а) доводят подвижной фазой А до

объема 20,0 мл.

Раствор сравнения (d). К 0,20 г испытуемого

образца прибавляют 1,0 мл воды Р и нагревают

при температуре 60°С в течение 1 ч. 0,5 мл полученного раствора доводят подвижной фазой А до объема 50,0 мл.

Условия хроматографирования:

– колонка длиной 0,25 м и внутренним диа-

метром 4,6 мм, заполненная силикагелем окта-

децилсилильным для хроматографии Р с раз-

мером частиц 5 мкм;

–подвижная фаза:

–подвижная фаза А: к 0,5 мл кислоты уксусной разведенной Р прибавляют 50 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата Р, 50 мл ацетонитрила Р и доводят водой Р

до объема 1000 мл;

–подвижная фаза В: к 0,5 мл кислоты уксусной разведенной Р прибавляют 50 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата Р, 400 мл ацетонитрила Р и доводят водой Р

до объема 1000 мл;

tR — время удерживания ампициллина на хроматограмме раствора сравнения (с).

Если для достижения необходимого разрешения изменялось соотношение подвижных фаз А и В, то подвижную фазу полученного состава используют в начальном времени градиента и для количественного определения.

–скорость подвижной фазы: 1,0 мл/мин;

–спектрофотометрический детектор, длина волны 254 нм;

–объем вводимой пробы: по 50 мкл рас-

творов сравнения (b) и (с) хроматографиру-

ют изократически, используя соотношение подвижных фаз А и В начального времени градиента; по 50 мкл испытуемого раствора (b) и

раствора сравнения (d) хроматографируют со-

гласно программе градиента; 50 мкл подвижной фазы А хроматографируют согласно программе градиента в качестве контрольного опыта.

Идентификация пиков: идентифициру-

ют пики ампициллина и димера ампициллина,

используя хроматограмму раствора сравне-

ния (d).

Относительное удерживание (по отно-

шению к ампициллину): димер ампицилли-

на — около 2,8.

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (b):

–разрешение: не менее 3,0 между пиками

ампициллина и цефрадина; при необходимости

изменяют соотношение подвижных фаз А и В;

Предельное содержание примесей:

–димер ампициллина (не более 4,5%): на хроматограмме испытуемого раствора (b) площадь пика, соответствующего димеру ампициллина, не должна превышать 4,5-кратную площадь основного пика на хроматограмме

раствора сравнения (с);

Пропускание

100

98

96

94

92

90

88

86

84

82

80

78

76

74

–любая другая примесь (не более 2%): на хроматограмме испытуемого раствора (b) площадь любого пика, кроме основного и димера ампициллина, не должна превышать 2-крат- ную площадь основного пика на хроматограмме

раствора сравнения (с).

N,N-Диметиланилин (2.4.26, метод В). Не более 0,002% (20 ppm).

2-Этилгексановая кислота (2.4.28). Не более 0,8% (м/м).

Метиленхлорид. Не более 0,2% (м/м). Га-

зовая хроматография (2.2.28).

Раствор внутреннего стандарта. 1,0 мл этиленхлорида Р растворяют в воде Р и доводят до объема 500,0 мл этим же растворителем.

Испытуемый раствор (а). 1,0 г испытуемо-

го образца растворяют в воде Р и доводят до

объема 10,0 мл этим же растворителем.

Испытуемый раствор (b). 1,0 г испытуе-

мого образца растворяют в воде Р, прибавляют

1,0 мл раствора внутреннего стандарта и дово-

дят водой Р до объема 10,0 мл.

Раствор сравнения. 1,0 мл метиленхлорида Р растворяют в воде Р и доводят до объема

500,0 мл этим же растворителем. К 1,0 мл по-

лученного раствора прибавляют 1,0 мл раст-

вора внутреннего стандарта и доводят водой Р

до объема 10,0 мл.

Условия хроматографирования:

–колонка стеклянная длиной 1,5 м и диаметром 4 мм, заполненная диатомитом для газовой хроматографии Р, импрегнированным 10% (м/м) макрогола 1000 Р;

–детектор: пламенно-ионизационный;

–газ-носитель: азот для хроматографии Р;

–скорость газа-носителя: 40 мл/мин;

–температура: колонка — 60°С, блок ввода проб — 100°С, детектор — 150°С.

Содержание метиленхлорида рассчиты-

вают с учетом плотности метиленхлорида при 20°С, равной 1,325 г/мл.

Тяжелые металлы (2.4.8, метод С). Не более 0,002% (20 ppm). 1,0 г испытуемого образца должен выдерживать испытание на тяжелые металлы. Эталон готовят с использованием 2 мл

эталонного раствора свинца (10 ppm Pb) Р.

Вода (2.5.12). Не более 2,0%. Определение проводят из 0,300 г испытуемого образца.

Бактериальные эндотоксины (2.6.14).

Менее 0,15 МЕ/мг, если субстанция предназначена для производства лекарственных средств

для парентерального применения без дальней-

шей подходящей процедуры удаления бактери-

альных эндотоксинов.

#Пирогенность (2.6.8). Испытуемый об-

разец должен быть апирогенным. Тест-доза — 20 мг испытуемого образца в 1 мл воды для инъекций Р на 1,0 кг массы тела кролика.

Испытание «Пирогенность» проводят в ка-

честве альтернативного испытанию «Бактери-

альные эндотоксины».

#Стерильность (2.6.1). Ампициллин

натрия в условиях испытания обладает антимикробным действием. Для устранения антимикробного действия посев на питательные среды проводят методом мембранной фильтрации.

#Аномальная токсичность (2.6.9). Испы-

туемый образец должен быть нетоксичным. Тест-

доза — 20 мг испытуемого образца в 0,5 мл воды для инъекций Р, внутривенно. Срок наблюдения — 24 ч.

# Остаточные количества органических растворителей (2.4.24). Испытуемый образец должен выдерживать требования статьи (5.4).

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Жидкостная хроматография (2.2.29), как указано в испытании «Сопутствующие примеси», со следующими изменениями.

Условия хроматографирования:

–подвижная фаза: соотношение подвижных

фаз А и В начального времени градиента в соответствии с параметрами пригодности хромато-

графической системы;

–объем вводимой пробы: по 50 мкл испы-

туемого раствора (а) и раствора сравнения (а).

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (а):

–относительное стандартное отклонение: не более 1,0% для площадей пиков при шести повторных вводах пробы.

Содержание ампициллина натрия в процентах рассчитывают, умножая процентное содер-

жание ампициллина на 1,063.

ХРАНЕНИЕ

В воздухонепроницаемом контейнере.

Стерильная субстанция — в стерильном

воздухонепроницаемом контейнере с контролем первого вскрытия.

ПРИМЕСИ

A. (2S,5R,6R)-6-Амино-3,3-диметил-7-оксо- 4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновая кислота (6-аминопенициллановая кислота).

B. (2S,5R,6R)-6-[[(2S)-2-Амино-2-фенил-

ацетил]амино]-3,3-диметил-7-оксо-4-тиа-1-

азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновая кислота

(L-ампициллин).

D. R = CO2H: (4S)-2-[[[(2R)-2-Амино-2-фенил-

ацетил]амино]карбоксиметил]-5,5-диметил- тиазолидин-4-карбоновая кислота (пенициллановые кислоты ампициллина).

F. R = H: (2RS,4S)-2-[[[(2R)-2-Амино-2-фенил- ацетил]амино]метил]-5,5-диметилтиазолидин-4-

карбоновая кислота (пенициллановые кислоты ампициллина).

HH

O

E. (2R)-2-[[[(2S,5R,6R)-6-[[(2R)-2-Амино-2-фенил- ацетил]амино]-3,3-диметил-7-оксо-4-тиа-1- азабицикло[3.2.0]гепт-2-ил]карбонил]амино]- 2-фенилуксусная кислота (ампициллинил-D-

фенилглицин).

O

H

HN

NH

H

O

G. (3R,6R)-3,6-Дифенилпиперазин-2,5-дион.

N

N

OH

H. 3-Фенилпиразин-2-ол.

HNH2

H

N CH3

S

H H

O

I. (2S,5R,6R)-6-[[(2R)-2-[[(2R)-2-Амино-2-фени-

лацетил]амино]-2-фенилацетил]амино]-3,3-диме-

тил-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-кар-

боновая кислота (D-фенилглицилампициллин).

H

H3C

N CH3

S

H H

O

CH3 O

H3C

H3C H NH

CO2H

K. (2R)-2-[(2,2-Диметилпропаноил)амино]-2-

фенилуксусная кислота.

HNH2

CO2H

L. (2R)-2-Амино-2-фенилуксусная кислота (D-фенилглицин).

M. Со-олигомеры ампициллина и пенициллановых кислот ампициллина.

N. Олигомеры пенициллановых кислот ампициллина.

АМПИЦИЛЛИН ТРИГИДРАТ

Ampicillinum trihydricum

AMPICILLIN TRIHYDRATE

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Ампициллин тригидрат содержит не

менее 96,0 % и не более 102,0 % (2S,5R,6R)-

6[[(2R)-2-амино-2-фенилацетил]амино]-3,3-

диметил-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]-

гептан-2-карбоновой кислоты в пересчете на

безводное вещество.

Полусинтетический продукт, полученный из продукта ферментации.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА)

Белый или почти белый кристаллический

порошок.

Малорастворим в воде, практически нераст-

ворим в 96% спирте и в жирных маслах. Рас-

творяется в разведенных растворах кислот и гидроксидов щелочных металлов.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

Первая идентификация: А, D. Вторая идентификация: B, C, D.

А. Абсорбционная спектрофотометрия в инфракрасной области (2.2.24).

Сравнение: ФСО ампициллина тригидрата # или спектр, представленный на рисунке 1.

В. Тонкослойная хроматография (2.2.27).

Испытуемый раствор. 25 мг испытуемого образца растворяют в 10 мл раствора натрия гидрокарбоната Р.

Раствор сравнения (а). 25 мг ФСО ампициллина тригидрата растворяют в 10 мл раствора натрия гидрокарбоната Р.

Раствор сравнения (b). 25 мг ФСО амоксициллина тригидрата и 25 мг ФСО ампициллина тригидрата растворяют в 10 мл раствора натрия гидрокарбоната Р.

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля Н силанизированного Р.

Подвижная фаза: смесь из 10 объемов

ацетона Р и 90 объемов раствора 154 г/л аммония ацетата Р, доведенного до рН 5,0 кислотой уксусной ледяной Р.

Наносимый объем пробы: 1 мкл.

Фронт подвижной фазы: не менее 15 см

от линии старта.

Высушивание: на воздухе.

Проявление: пластинку обрабатывают парами йода до проявления пятен. Просма-

тривают при дневном свете.

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (b):

– на хроматограмме обнаруживаются два полностью разделенных пятна.

Результаты: на хроматограмме испыту-

емого раствора обнаруживается пятно, соот-

ветствующее по расположению, цвету и раз-

меру основному пятну на хроматограмме

раствора сравнения (а).

С. 2 мг испытуемого образца помещают в пробирку длиной около 150 мм и диаметром около 15 мм, увлажняют 0,05 мл воды Р,

прибавляют 2 мл раствора формальдегида в серной кислоте Р и встряхивают. Раствор

практически бесцветный. Пробирку выдержи-

вают в водяной бане в течение 1 мин. Появля-

ется темно-желтое окрашивание.

D. Испытуемый образец выдерживает ис-

пытание «Вода» как указано в разделе «Испытания».

ИСПЫТАНИЯ

Прозрачность (2.2.1). 1,0 г испытуемого образца растворяют в 10 мл 1 М раствора кислоты хлористоводородной (раствор

А). 1,0 г испытуемого образца растворяют в

10 мл раствора аммиака разведенного Р2

(раствор В). Сразу после приготовления растворы А и В по степени мутности не должны

превышать эталон II.

рН (2.2.3). От 3,5 до 5,5. 0,1 г испытуемо-

го образца растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, Р и доводят до объема 40 мл этим же растворителем.

Удельное оптическое вращение (2.2.7).

От +280 до +305 в пересчете на безводное ве-

щество. 62,5 мг испытуемого образца растворяют в воде Р и доводят до объема 25,0 мл

этим же растворителем.

Сопутствующие примеси. Жидкостная хроматография (2.2.29).

Испытуемый раствор (а). 31,0 мг испытуемого образца растворяют в подвижной фазе А и доводят до объема 50,0 мл этим же растворителем.

Испытуемый раствор (b). Раствор готовят непосредственно перед использованием. 31,0 мг испытуемого образца раст-

воряют в по-движной фазе А и доводят до

объема 10,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (а). 27,0 мг ФСО ампициллина безводного растворяют в подвижной фазе А и доводят до объема 50,0 мл этим

же растворителем.

Раствор сравнения (b). 2 мг ФСО цефрадина растворяют в подвижной фазе А и доводят до объема 50 мл этим же растворителем. К 5 мл полученного раствора прибавля-

ют 5 мл раствора сравнения (а).

Раствор сравнения (с). 1,0 мл раствора

сравнения (а) доводят подвижной фазой А до

объема 20,0 мл.

Условия хроматографирования:

–колонка длиной 0,25 м и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии Р

сразмером частиц 5 мкм;

–подвижная фаза:

–подвижная фаза А: к 0,5 мл кислоты уксусной разведенной Р прибавляют 50 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата Р, 50 мл ацетонитрила Р и доводят водой Р до объема 1000 мл;

–подвижная фаза В: к 0,5 мл кислоты уксусной разведенной Р прибавляют 50 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата Р, 400 мл ацетонитрила Р и доводят водой Р до объема 1000 мл;

tR — время удерживания ампициллина на хроматограмме

раствора сравнения (с).

Если для достижения необходимого разрешения изменялось соотношение подвижных фаз А и В, то подвижную фазу полученного состава используют в начальном времени градиента и для количественного определения.

–скорость подвижной фазы: 1,0 мл/мин;

–спектрофотометрический детектор, длина волны 254 нм;

–объем вводимой пробы: по 50 мкл растворов сравнения (b) и (с) хроматографируют изократически, используя соотношение подвижных фаз А и В начального времени градиента; 50 мкл испытуемого раствора (b) хроматографируют согласно программе градиента; 50 мкл подвижной фазы А хроматографируют согласно программе градиента в качестве контрольного опыта.

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (b):

–разрешение: не менее 3,0 между пиками ампициллина и цефрадина; при необходимости изменяют соотношение подвижных фаз А и В;

Предельное содержание примесей:

–любая примесь (не более 1,0%): на хроматограмме испытуемого раствора (b) площадь любого пика, кроме основного, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (с).

N,N-Диметиланилин (2.4.26, метод В). Не более 0,002% (20 ppm).

Вода (2.5.12). Не менее 12,0% и не более 15,0%. Определение проводят из 0,100 г испытуемого образца.

Сульфатная зола (2.4.14, метод А). Не более 0,5%. Определение проводят из 1,0 г испытуемого образца.

# Остаточные количества органических растворителей (2.4.24). Испытуемый образец должен выдерживать требования статьи (5.4).

# Микробиологическая чистота (2.6.12, 2.6.13, 5.1.4). Ампициллин тригидрат в условиях испытания обладает антимикробным действием. Для устранения антимикробного действия посев на питательные среды проводят методом мембранной фильтрации.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Жидкостная хроматография (2.2.29), как указано в испытании «Сопутствующие примеси», со следующими изменениями:

Условия хроматографирования:

– подвижная фаза: соотношение подвижных фаз А и В начального времени градиента в соответствии с параметрами пригодности

хроматографической системы;