стандарты лечения / Laboratornyi-Spravochnik-2012__Synevo
.pdf
не встречается при тяжелой дисплазии и РШМ, а так же ассоциирована с минимальным риском их развития. Напротив, количество вируса более 105 ГЭ приходящихся на 100 тыс. клеток при установленном факте
персистентного течения инфекции (ВПЧ выявляется более 1 года) обозначается как повышенная нагрузка ВПЧ и ассоциировано с повышенным риском развития тяжелой дисплазии и чаще встречается при РШМ. Наконец определенной информацией обладает мониторинг вирусной нагрузки. Так, считается, что снижение количества ДНК ВПЧ более чем на \ 1 lg может являться маркером транзиторной инфекции. Рост вирусной нагрузки через 3, 6 и 9 мес. после проведенного лечения свидетельствует о возможности рецидива.
Стратегии использования ВПЧ тестов в диагностике предрака и рака шейки матки
Стратегия использования ВПЧ теста в мониторинге терапии CIN2+
Под данной стратегией понимают проведение двойного исследования цитология + ВПЧ2тест через 6 месяцев после проведенного хирургического лечения. В случае получения двойного отрицательного результата пациентку считают полностью излеченной (в отличие от классической схемы, где для подтверждения статуса излеченности необходимо получение 425 отрицательных цитологических заключений).
Использование ВПЧ тестов в соответствии с описанными алгоритмами рекомендовано рядом международных организаций, таких как:
2 Международное агентство исследования рака ВОЗ (IARC WHO);
2 Американское общество кольпоскопии и цервикальной патологии (ASCCP);
2 Европейское общество гинекологических инфекций и неоплазии (EURO2 GIN);
2 Европейское общество инфекционных болезней в акушерстве и гинекологии (ESIDOG);
2 Американский колледж акушерства и гинекологии (ACOG).
Преимущества ВПЧ тестирования по сравнению с цитологией:
2 Существенно выше диагностическая чувствительность по отношению к тяжелой дисплазии и РШМ (93299%), для цитологического анализа мазка чувствительность 50260%;
2 Существенно выше предсказательная ценность отрицательного результата.
Особенности тестирования на ВПЧ Исследование на ВПЧ проводят у женщин. Материалом для
исследования служит соскоб цервикального канала и/или зоны трансформации, выполненный цервикальной цитологической щеточкой. Допускается взятие материала на цитологический и ВПЧ2тесты одной щеточкой: сначала делаются мазки2отпечатки, затем щеточка помещается в транспортную среду. При взятии материала щетку обламывают и сохраняют рабочую часть щетки в транспортной среде до доставки в лабораторию. Допускается использование универсального зонда для взятия материала из цервикального канала при невозможности использования цитологической щетки. Исследование вагинального содержимого или
581
ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО
соскоба уретры менее информативно, чем исследования цервикальных соскобов.
Замечания по проведению исследования на ВПЧ у мужчин.
Инфицированность мужчин ВПЧ сходна с инфицированностью женщин, но ввиду анатомических особенностей мужского урогенитального тракта (отсутствие «зоны трансформации» эпителия) мужчины в большинстве случаев самостоятельно излечиваются или являются бессимптомными носителями инфекции. С учетом того, что опасность развития онкологической патологии у мужчин не велика, а инфицирование партнерши не означает развитие клинических проявлений инфекции (т.к. высока вероятность самостоятельного излечения инфекции (около 80%)), проводить скрининг папилломавирусной инфекции у мужчин не рекомендуется. Исследование проводят лишь по эпидемическим показаниям или для дифференциальной диагностики.
Следует помнить, что наличие ВПЧ у одного из партнеров при отсутствии ВПЧ у другого или несовпадение у партнеров спектра генотипов являются нормальным отражением биологии вируса и не могут говорить о супружеской неверности (обычно у одного из партнеров происходит более быстрая элиминация вируса, при инфицировании пары несколькими генотипами у партнеров может происходить элиминация разных типов, при этом после самостоятельного излечения от ВПЧ определенного генотипа реинфицирования не происходит).
Тесты, выполняемые в лаборатории «Синэво Украина»
КОД 3021. ПЦР. Папилломавирус высокого канцерогенного риска типов 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 58, 59, 67 (соскоб, скрининг, кач. опред., с определением 16 генотипа).
Назначение: выявление ДНК вирусов папилломы человека (ВПЧ) высокого канцерогенного риска (ВКР) 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 58, 59, 67 типов (качественный анализ, без определения генотипа), с отдельным определением ДНК ВПЧ 16 типа в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) c гибридизационно2флуоресцентной детекцией. Эти типы обладают высокой трансформирующей активностью и ответственны более чем за 92% случаев тяжелых цервикальных дисплазий и рака шейки матки.
Принцип метода: Метод основан на одновременной амплификации (мультиплекс2ПЦР) и детекции по «конечной точке» участков ДНК ВПЧ и участка ДНК β2глобинового гена, используемого в качестве эндогенного внутреннего контроля. ДНК2мишень, выбранная в качестве внутреннего контроля, является участком генома человека и должна всегда присутствовать в образце (цервикальный соскоб) в достаточном количестве, эквивалентном количеству клеток в мазке (1032105 геномов). Таким образом, эндогенный внутренний контроль позволяет не только контролировать этапы ПЦР2анализа (выделение ДНК и проведение ПЦР), но и оценивать адекватность взятия материала и его хранения. В случаях, если соскоб эпителия забран неправильно (недостаточное количество эпителиальных клеток), сигнал амплификации β2глобинового гена будет заниженным.
582
Материал: соскоб эпителия цервикального канала, уретры.
В крови ВПЧ не обнаруживается, т.к. в жизненном цикле вируса отсутствует период вирусемии.
Условия хранения материала:
2 при комнатной температуре (от +18 до +25 °С) в течение 48 часов; 2 при температуре от + 2 до +8 °С в течение 2 недель.
Анализатор: амплификатор «Терцик», НПФ «ДНК2технология» (Россия), флуоресцентный ПЦР2детектор «Джин», НПФ «ДНК2Технология» (Россия), люминесцентный анализатор «АЛА1/4», BIOSAN (Латвия).
Тест системы: АплиСенс (Россия).
Аналитические характеристики:
Чувствительность: 1 х 10325 х103 ГЭ/мл.
Специфичность: отсутствуют перекрестные реакции на типы низкого онкогенного риска ВПЧ, кожные типы ВПЧ, на ДНК человека, а также на микроорганизмы, присутствующие в урогенитальном тракте, ротовой полости, коже.
Референтные значения в лаборатории «СИНЭВО Украина» –
качественный анализ.
Интерпретация результатов:
«Не обнаружен»: это означает, что из перечисленных выше типов ни один тип папилломавируса не обнаружен.
«Обнаружен вирус 16 типа»: это означает, что из перечисленных выше одиннадцати типов обнаружен только один тип – 16 тип вируса
папилломы.
«Обнаружен»: в данном случае обнаружены один или несколько типов вирусов из перечисленных одиннадцати (количество обнаруженных типов неизвестно, поскольку тест скрининговый), но не обнаружен 16 тип.
«Обнаружен, в том числе вирус 16 типа»: в данном случае обнаружены один или несколько типов вируса папилломы человека (количество обнаруженных типов по2прежнему неизвестно), здесь также обнаружен
еще и 16 тип.
КОД 3033. ПЦР. Папилломавирус высокого канцерогенного риска типов 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 (соскоб, количественное определение, без генотипирования, Real time)
Назначение: выявление и количественное определения ДНК вирусов папилломы человека (ВПЧ) высокого канцерогенного риска (ВКР) 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типов с гибридизационно2флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени». Тест выявляет (без определения генотипа) ДНК ВПЧ двух основных филогенетических групп – А7, А9, которые включают следующие 10 типов: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 58, 59, а также ДНК ВПЧ 51 (группа А5) и 56 (группа А6) типов.
583
ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО
Выявление различных филогенетических групп в разных пробирках не является генотипированием вируса, так как каждая группа содержит несколько генотипов ВПЧ.
Принцип метода. Метод основан на одновременной амплификации (мультиплекс2ПЦР) и детекции в режиме «реального времени» участков ДНК Е12Е2 генов ВПЧ и участка ДНК β2глобинового гена, используемого в качестве эндогенного внутреннего контроля. ДНК2мишень, выбранная в качестве внутреннего контроля, является участком генома человека и должна всегда присутствовать в образце (цервикальный соскоб) в достаточном количестве, эквивалентном количеству клеток в мазке (1032105 геномов). Таким образом, эндогенный внутренний контроль позволяет не только контролировать этапы ПЦР2анализа (выделение ДНК и проведение ПЦР), но и оценивать адекватность забора материала и его хранения. В случаях, если соскоб эпителия забран неправильно (недостаточное количество эпителиальных клеток), сигнал амплификации β2глобинового гена будет заниженным.
Количественное определение ДНК ВПЧ основывается на существовании линейной зависимости между циклом начала увеличения флуоресценции образца и исходной концентрацией ДНК2мишени. Для реализации количественного определения в реакцию амплификации параллельно берутся ДНК2калибраторы – образцы с известной концентрацией ДНК ВПЧ. По результатам амплификации ДНК2калибраторов выстраивается калибровочная прямая, по которой происходит определение концентрации ДНК ВПЧ в образцах. В данном тесте так же используется принцип нормализации количественного результата – соотношение полученной концентрации ДНК ВПЧ на количество геномной ДНК – с целью нивелировать эффект вариации при взятии материала.
Материал: соскоб эпителия цервикального канала, уретры.
В крови ВПЧ не обнаруживается, т.к. в жизненном цикле вируса отсутствует период вирусемии.
584
Условия хранения материала:
2 при комнатной температуре (от +18 до +25 °С) в течение 48 часов; 2 при температуре от +2 до +8 °С в течение 2 недель.
Анализатор: амплификатор Rotor2gene 6000 («Corbett Research», Австралия).
Тест системы: АплиСенс (Россия).
Аналитические характеристики:
Чувствительность: 1 х 10325 х103 ГЭ/мл.
Специфичность: отсутствуют перекрестные реакции на другие филогенетические группы ВПЧ высокого канцерогенного риска, отличные от выявляемых, низкого онкогенного риска ВПЧ, кожные типы ВПЧ, на ДНК человека, а также на микроорганизмы, присутствующие в урогенитальном тракте, ротовой полости, коже.
Референтные значения в лаборатории «СИНЭВО Украина».
Определяется концентрация ДНК ВПЧ по группам, выраженная в lg, приходящаяся на 100 тыс. клеток человека, и суммарная вирусная нагрузка.
Трактовка клинической значимости результата
Результат lg |
Трактовка |
(ВПЧ на 100 тыс. клеток) |
|
< 3 |
Клинически малозначимая |
325 |
Клинически значимая. Нельзя исключить |
|
дисплазию, существует риск развития |
|
дисплазии |
> 5 |
Клинически значимая, повышенная. Высокая |
|
вероятность наличия дисплазии |
КОД 3035. ПЦР. Папилломавирус, типы 16, 18 (соскоб, количественное определение, Real time)
Назначение: выявление, дифференциация и количественное определение ДНК вирусов папилломы человека (ВПЧ) 16 и 18 типов в клиническом материале с гибридизационно2флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
Тест рекомендуется рассматривать как вторичный при диагностике папилломавирусной инфекции, позволяющий дифференцировать два наиболее онкогенных типа вируса. На первом этапе диагностики рекомендуется назначать тесты, выявляющие широкий спектр (11214 типов) высокоонкогенных типов ВПЧ, например:
КОД 3021 ПЦР. Папилломавирус высокого канцерогенного риска типов 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 58, 59, 67 (соскоб, скрининг, кач. опред., с определением 16 генотипа).
КОД 3033 ПЦР. Папилломавирус высокого канцерогенного риска типов 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 (соскоб, количественное определение, без генотипирования, Real time).
Принцип метода: метод основан на одновременной амплификации (мультиплекс2ПЦР) участков ДНК ВПЧ и участка ДНК β2глобинового гена, используемого в качестве эндогенного внутреннего контроля. ПЦР2анализ на наличие ДНК ВПЧ 16 и 18 типов проводится в одной пробирке. ДНК2 мишень, выбранная в качестве внутреннего контроля, является участком
585
ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО
генома человека и должна всегда присутствовать в образце (цервикальный соскоб) в достаточном количестве, эквивалентном количеству клеток в мазке (1032105 геномов). Таким образом, эндогенный внутренний контроль позволяет не только контролировать этапы ПЦР2анализа (выделение ДНК и проведение ПЦР2амплификации), но и оценивать адекватность взятия материала и его хранения. В случаях, если соскоб эпителия взят неправильно (недостаточное количество эпителиальных клеток), сигнал амплификации β2глобинового гена будет заниженным.
Количественное определение ДНК ВПЧ основывается на существовании линейной зависимости между циклом начала увеличения флуоресценции образца и исходной концентрацией ДНК2мишени. Для реализации количественного определения в реакцию амплификации параллельно берутся ДНК2калибраторы – образцы с известной концентрацией ДНК ВПЧ. По результатам амплификации ДНК2калибраторов выстраивается калибровочная прямая, по которой происходит определение концентрации ДНК ВПЧ в образцах. В данном тесте также используется принцип нормализации количественного результата – соотношение полученной концентрации ДНК ВПЧ на количество геномной ДНК – с целью нивелировать эффект вариации при взятии материала.
Материал: соскоб эпителия цервикального канала, уретры.
В крови ВПЧ не обнаруживается, т.к. в жизненном цикле вируса отсутствует период вирусемии.
Условия хранения материала:
2 при комнатной температуре (от +18 до +25 °С) в течение 48 часов; 2 при температуре от +2 до +8 °С в течение 2 недель.
Анализатор: амплификатор Rotor2gene 6000 («Corbett Research», Австралия).
Тест системы: АплиСенс (Россия).
Аналитические характеристики:
Чувствительность: 1 х 10325 х103 ГЭ/мл.
Специфичность: отсутствуют перекрестные реакции на типы высокого канцерогенного риска, отличные от 16 и 18, низкого онкогенного риска ВПЧ, кожные типы ВПЧ, на ДНК человека, а также на микроорганизмы, присутствующие в урогенитальном тракте, ротовой полости, коже.
Референтные значения в лаборатории «СИНЭВО Украина».
Определяется концентрация ДНК ВПЧ 16 и 18 генотипов, выраженная в lg, приходящаяся на 100 тыс. клеток человека.
Трактовка клинической значимости результата
Результат lg |
Трактовка |
(ВПЧ на 100 тыс. клеток) |
|
< 3 |
Клинически малозначимая |
325 |
Клинически значимая. Нельзя исключить |
|
дисплазию, существует риск развития |
|
дисплазии |
> 5 |
Клинически значимая, повышенная. Высокая |
|
вероятность наличия дисплазии |
586
КОД 3033. ПЦР. Папилломавирус высокого канцерогенного риска типов 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 (соскоб, качественное определение, генотипирование, Real time).
Назначение: выявление и дифференциация ДНК вирусов папилломы человека (ВПЧ) высокого канцерогенного риска (ВКР) 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типов в клиническом материале с гибридизационно2 флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
Принцип метода: Метод основан на одновременной амплификации (мультиплекс2ПЦР) в одной пробирке участков ДНК трех типов ВПЧ и участка ДНК β2глобинового гена, используемого в качестве эндогенного внутреннего контроля. Каждый генотип регистрируется по своему каналу флуоресценции, что позволяет не только выявлять, но и определять генотип обнаруженного вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска. ДНК2мишень, выбранная в качестве внутреннего контроля, является участком генома человека и должна всегда присутствовать в образце (цервикальный соскоб) в достаточном количестве, эквивалентном количеству клеток в мазке (1032105 геномов). Таким образом, эндогенный внутренний контроль позволяет не только контролировать этапы ПЦР2 анализа (выделение ДНК и проведение ПЦР), но и оценивать адекватность забора материала и его хранения. В случаях, если соскоб эпителия забран неправильно (недостаточное количество эпителиальных клеток), сигнал амплификации β2глобинового гена будет заниженным.
Материал: соскоб эпителия цервикального канала, уретры.
В крови ВПЧ не обнаруживается, т.к. в жизненном цикле вируса отсутствует период вирусемии.
Условия хранения материала:
2 при комнатной температуре (от +18 до +25 °С) в течение 48 часов; 2 при температуре от +2 до +8 °С в течение 2 недель.
Анализатор: амплификатор Rotor2gene 6000 («Corbett Research», Австралия).
Тест системы: АплиСенс (Россия).
Аналитические характеристики:
Чувствительность: 1 х 10325 х103 ГЭ/мл.
Специфичность: 100% типоспецифичность, отсутствуют перекрестные реакции на любые, отличные от данного генотипа, ВПЧ, на ДНК человека, а также на микроорганизмы, присутствующие в урогенитальном тракте, ротовой полости, коже.
Референтные значения в лаборатории «СИНЭВО Украина».
Качественный анализ. В результате указывается выявленный в образце генотип ВПЧ.
КОД 3077. ПЦР. ВПЧ Квант 4 (6, 11, 16, 18 генотипы)
Папилломавирус человека (HPV – Human Papillomavirus) – вирус из рода папилломавирусов, семейства паповавирусов. На сегодняшний день известно более 100 видов вируса папилломы человека (ВПЧ) и из них более 40 – могут вызвать поражение аногенитального тракта (половые органы и задний проход) мужчин и женщин и появление остроконечных кондилом.
Папилломавирусы можно выделить на 3 основные группы: 1. Неонкогенные ВПЧ (1, 2, 3, 5 генотипы).
587
|
|
|
|
|
|
|
|
СИНЭВО |
2. Низкоонкогенные ВПЧ (6, 11, 42, 43, 44 генотипы). |
||
3. Высокоонкогенные ВПЧ (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 и 68 |
|||
|
|||
|
генотипы). |
||
|
Низкоонкогенные ВПЧ при определенных условиях вызывают возможное |
||
|
озлокачествление патологического процесса. Наиболее частое проявление |
||
|
ВПЧ низкоонкогенных генотипов (6, 11) – это остроконечные кондиломы |
||
|
(Condylomata acuminata). Путь передачи преимущественно половой, и |
||
СПРАВОЧНИК |
относится к инфекциям, передающиеся половым путем, согласно |
||
Международной классификации болезней. Представляют собой |
|||
|
|||
|
образования «тестоватой» консистенции, имеющие дольчатое строение, по |
||
|
форме напоминающие «петушиный гребень» или «цветную капусту» и |
||
|
расположены на узком основании. Локализация у мужчин – крайняя плоть, |
||
|
венечная борозда головки полового члена (однако необходимо отличать |
||
|
кондиломы папилломавируса от перламутровых папул, являющихся |
||
|
вариантом нормы), у женщин – преддверие влагалища, малые и большие |
||
|
половые губы, область заднего прохода. Также выделяют еще |
||
|
разновидности остроконечных кондилом: |
||
|
2 кератотические бородавки с локализацией на сухой коже; |
||
|
2 папулезные бородавки с локализацией на полностью ороговевшем |
||
ЛАБОРАТОРНЫЙ |
эпителии; |
||
2 гигантская кондилома Бушке2Левенштейна (встречающаяся у больных |
|||
|
|||
|
со сниженным клеточным иммунитетом или при беременности). |
||
|
Эндоуретральные кондиломы локализуются в уретре, часто сочетаются с |
||
|
обычными кондиломами и встречаются преимущественно у мужчин. |
||
|
Кондиломы шейки матки часто сочетаются с генитальными кондиломами: |
||
|
2 экзофитные кондиломы, |
||
|
2 эндофитные (плоские). |
||
|
Бородавчатая эпидермодисплазия (Epidermodysplasia Verruciformis), |
||
|
которая проявляется множественными полиморфными плоскими папулами |
||
|
розового/красного цвета с умеренно бородавчатой поверхностью. |
||
|
Заболевание обычно возникает в юношеском возрасте и |
||
|
предрасполагающим фактором является наследственность. |
||
|
Материал: урогенитальный соскоб. |
||
|
Пробирка: эппендорф с транспортной средой. |
||
|
Метод: ПЦР в режиме Real2time. |
||
|
Анализатор: ДТ296. |
||
|
Тест системы: ДНК2Технология (Россия). |
||
|
Основные показания к назначению анализа: диагностика |
||
|
низкоонкогенных и высокоонкогенных ВПЧ в клиническом материале. |
||
|
Интерпретация результатов: данная система рассчитана для |
||
|
количественного определения в клиническом материале низкоонкогенных |
||
|
(6, 11) и высокоонкогенных (16, 18) ВПЧ. |
||
|
< 3 Lg (ВПЧ/105 клеток) – клинически малозначимая вирусная нагрузка, |
||
|
от 3 Lg до 5 Lg (ВПЧ/105 клеток) – клинически значимая вирусная |
||
|
нагрузка, |
||
|
> 5 Lg (ВПЧ/105 клеток) – клинически высокозначимая вирусная нагрузка. |
||
588
ГАРДНЕРЕЛЛЕЗ
КОД 3019. ПЦР. Gardnerella vaginalis (урогенитальный соскоб, качественное определение)
G.vaginalis является основным маркерным условно2патогенным микроорганизмом БВ. Этот микроорганизм выделялся из вагинального секрета женщин, страдающих неспецифическим вагинитом, и описан в 1955 году. Долгое время ошибочно считалось, что этот микроорганизм передается половым путем и является этиологической причиной бактериального вагиноза. Однако высокая частота обнаружения G.vaginalis у женщин без признаков БВ (до 50%), а также ее выявление почти у 30% девственниц, опровергает это предположение. Поэтому любые методы качественного выявления G.vaginalis, используется ли для этой цели ПЦР или бактериология, без определения титра или концентрации микроорганизма, заведомо имеют низкую специфичность.
Материал: урогенитальный соскоб. Пробирка: эппендорф с транспортной средой. Метод: ПЦР качественный анализ.
Принцип метода: Выделение ДНК Gardnerella vaginalis из клинического материала; проведение реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР «по конечной точке».
Анализатор: амплификатор «Терцик» (ДНК2технология, Россия), детектор флуоресценции «Джин» (ДНК2технология, Россия).
Тест системы: ДНК2Технология (Россия).
Аналитические характеристики: Чувствительность: 6000 копий/мл. Специфичность: 90%.
Основные показания к назначению анализа: выявление ДНК
Gardnerella vaginalis в клиническом материале.
Референтные значения лаборатории СИНЭВО Украина:
«Не обнаружена»/«Обнаружена».
КОД 3040. ПЦР. Lactobacillus species / Gardnerella vagi* nalis (урогенитальный соскоб, количественное определение, Real time)
По результатам исследования можно судить о состоянии микроценоза влагалища и с высокой точностью диагностировать бактериальный вагиноз – заболевание, связанное с подавлением нормальной микрофлоры влагалища и заменой ее условно2патогенной. В норме вагинальная микрофлора представлена, в основном, лактобактериями (Lactobacillus spp.) (95298%), концентрация которых варьирует в пределах 10621010 КОЕ/мл. Основные виды вагинальных лактобактерий (L.gasseri, L.crispatus, L.jensenii и др.) продуцируют H2O2, которая сдерживает рост условно2патогенных бактерий (Gardnerella vaginalis, Mobiluncus spp. и др.), концентрация которых в норме не превышает 1032105 КОЕ/мл. Кроме того, метаболизируя гликоген до молочной кислоты, лактобактерии закисляют pH вагинального секрета, нормальная pH не превышает 4,5 – это обеспечивает ингибирование роста анаэробных микроорганизмов. При БВ, независимо от причин, которые его вызвали, происходит, прежде всего, снижение роста Lactobacillus spp. Вследствие этого резко повышается количество условно2патогенных микроорганизмов, прежде
589
ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО
всего, Gardnerella vaginalis, продукты жизнедеятельности которой создают благоприятную среду для роста других условно2патогенных микроорганизмов. Доказано, что Gardnerella vaginalis высевается при БВ в 100% случаев, т.е. является основным маркером БВ. До выяснения причин возникновения БВ Gardnerella vaginalis считали основным возбудителем этого заболевания. С другой стороны, частота высевания Gardnerella vaginalis в норме чрезвычайно высока – до 50260%. Следовательно, просто обнаружение Gardnerella vaginalis, даже бактериологическим методом – маркер, который обладает низкой специфичностью. Для повышения специфичности необходимо включать количественные характеристики этого маркера – определять концентрацию Gardnerella vaginalis. Однако в некоторых случаях концентрация Gardnerella vaginalis в отсутствие БВ при нормальной концентрации лактобацилл, в зависимости от дня менструального цикла, может достигать 1072108 КОЕ/мл. Наиболее точным маркером БВ является соотношение логарифма концентраций Lactobacillus spp. и Gardnerella vaginalis.
Материал: урогенитальный соскоб. Пробирка: эппендорф с транспортной средой.
Метод: ПЦР в режиме Real2time количественный анализ.
Принцип метода. Метод количественного выявления ДНК Gardnerella vaginalis и ДНК Lactobacillus spp. в клиническом материале основан на:
а) выделении тотальной ДНК из суспензии клеток (отделяемое задненижнего свода влагалища, забранное в транспортную среду с муколитиком (ТСМ), производства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора;
б) одновременной амплификации (мультиплекс2ПЦР) в режиме «реального времени» участка ДНК специфичного Gardnerella vaginalis и участка ДНК специфичного Lactobacillus spp.
Для определения количества копий ДНК Gardnerella vaginalis и ДНК Lactobacillus spp. в стандартном объеме клинического образца используются количественные калибраторы, позволяющие определить число копий ДНК Gardnerella vaginalis и ДНК Lactobacillus spp. в
реакционной пробирке.
Анализатор: детектирующий амплификатор в режиме «реального времени» «Rotor2Gene» 6000 («Corbett Research», Австралия).
Тест системы: АмплиСенс (Россия).
Аналитические характеристики:
Чувствительность = 1000 копий/мл.
Основные показания к назначению анализа: количественное определение ДНК Gardnerella vaginalis и микроорганизмов рода Lactobacillus (Lactobacillus spp.) с гибридизационно2флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» с целью оценки состояния микроценоза влагалища и диагностики бактериального вагиноза.
Интерпретация результатов:
для Lactobacillus spp. – 10621010 копий/мл, для Gardnerella vaginalis – «Не обнаружена». «Не обнаружена»/«Обнаружена».
Концентрация ДНК G.vaginalis/мл клинического материала. Концентрация ДНК L. species/мл клинического материала. Коэффициент соотношения L.species/G.vaginalis:
2 КС < 1,0 – высокая вероятность бактериального вагиноза;
2 КС > 2,0 – низкая вероятность бактериального вагиноза.
590