стандарты лечения / Laboratornyi-Spravochnik-2012__Synevo
.pdf
2 ориентация микробиолога при уничтожении несоответствующего пато2 логического материала (пример: слюна вместо мокроты);
2 корреляция между состоянием пациентов и результатами, которая по2 зволяет перейти от предварительного к окончательному диагнозу.
Почти все бактерии с клиническим значением могут быть выявлены при помощи окрашенной микроскопии. Исключение составляют бактерии, кото2 рые обитают, в большинстве случаев, внутриклеточно, например, Chlamidia, а также те, которые располагаются в клеточной стенке (например, Mycoplasma и Ureaplasma) и те, которые имеют достаточные размеры для визуализации в микроскопе (пример: спирохета).
Методы окрашивания.
1. Простые окрашивания: используется один краситель и выявляется только морфология микроба – размеры, форма, группировка клеток, на2 личие капсулы. Из методов простого окрашивания традиционным и быс2 трым является окрашивание метиленовой синью, которая окрашивает в синий цвет все клеточные элементы – бактерии, лейкоциты, клетки эпи2 телия.
2. Дифференцированное окрашивание: выявляет, кроме морфологичес2 ких характеристик, и цветовые реакции микроорганизмов. Окрашивания по Граму и Цилю2Нильсену являются наиболее используемыми в бактериоло2 гии. Различные типы окраски бактерий при использовании методики окра2 шивания по Граму зависят от структурных особенностей клеточной стенки. Грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет, а грамот2 рицательные – в красный. Лейкоциты и эпителиальные клетки содержат ци2 топлазму, окрашенную в розовый цвет и ядро – в красный цвет. Окрашива2 ние по Цилю2Нильсену используется для идентификации следующих групп бактерий: Mycobacterium, Nocardia, Rhodococcus, Tsukamurella и ооцист Cryptosporidium, Isopora, Sarcocystis и Cyclospora. Обычно в бактериологии окрашивание по Цилю2Нильсену применяется для выделения микобакте2 рий. Они, в отличие от других бактерий, благодаря наличию в бактериаль2 ной стенке некоторых восковых веществ, окрашиваются при комнатной тем2 пературе основным фуксином и выдерживаются для обесцвечивания в рас2 творимых неорганических кислотах и спирте. Кислото2 и спиртоустойчивые бациллы окрашиваются в красный цвет, а некислотоустойчивые – в синий цвет, так же, как и лейкоциты и клетки тканей, цитоплазма которых окраши2 вается в голубой с голубым ядром.
Внутренний контроль качества мазков является обязательным и прово2 дится с положительным и отрицательным контрольным образцом.
При окрашивании по Граму используем следующие контрольные образцы: 2 положительный образец: Staphylococcus aureus АТСС 25923;
2 отрицательный образец: Escherichia coli АТСС 25923.
Культивирование
Бактерии, принадлежащие к различным видам, могут иметь схожие мик2 роскопические характеристики, поэтому их идентификация предполагает и изучение физиологических характеристик, исследуемых «in vitro» на пита2 тельных средах. Бактериальная культура представляет собой результат ро2 ста и размножения бактерий в питательной среде и имеет цель:
2 выделение патогенных микроорганизмов из отобранного патологическо2 го материала;
2 идентификация патогенных агентов;
41
ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО
2 определение чувствительности к антибиотикам в целях инициации и мо2 ниторизации антимикробной терапии.
Классификация сред для культивирования может проводиться в за висимости:
Толерантность |
2 Обычные среды, позволяющие культивировать большое |
|
количество видов бактерий |
|
2 Специальные среды, позволяющие культивировать |
|
ограниченное число видов, иногда – только |
|
предназначенные для единственного вида |
Цель |
2 Обогащенные среды (всегда жидкие) для определенных |
исследования |
групп бактерий |
|
2 Среды для выделения: обычные, недифференциальные, |
|
дифференциальные, которые отличаются одной |
|
характерной чертой таксономической группы или рода |
|
2 Селективные среды, ингибирующие определенные |
|
группы бактерий, способствуя процесс размножения |
|
других групп |
Идентификация |
2 Тест2среды – конвенциональные или микротест2среды |
|
2 Мультитест2среды – ассоциированные или |
|
комбинированные |
Для каждой категории отобранного патологического материала использу2 ется традиционная среда или набор сред, позволяющих выделить бактерии, наиболее часто вовлеченные в соответствующие инфекционные процессы. Этот набор традиционных сред может быть дополнен другими средами, в соответствии с клинико2эпидемиологическими данными. Для выделения па2 тогенных колоний из мультиконтаминированного продукта необходимо про2 вести посев на дифференциальные среды. В случае, когда установлено, что отобранная проба содержит уменьшенное количество колоний, необходимо использовать жидкие обогащенные среды (бульон для аэробных колоний, тиогликолитический бульон с ресазурином для анаэробов, селенитовый бу2 льон для копрокультуры и т.д.). Инкубация сред для посева проводится с учетом высоких требований, предъявляемых к подозрительным бактериям:
2 аэробные бактерии культивируются в обычных условиях воздушной среды;
2 карбоксифильные бактерии требуют инкубации при повышенном содер2 жании СО2 в воздушной среде в эксикаторе с использованием свечки;
2 строго анаэробные бактерии культивируются при помощи систем Gaspak.
Большинство бактерий, интересующих нас с медицинской точки зрения, растут при 37 °С, в отличие от грибов, оптимальная температура роста ко2 торых 30 °С. Длительность инкубирования сред составляет 24248 часов для обычных бактерий; 225 суток – для грибов.
Наблюдение культивирования: аспект культивирования зависит от типа и со2 става среды. В жидкой среде рост может быть равномерным, с образованием отложений, гранул, пленки, колец, газа, пигмента. На твердых средах бактерии образуют колонии, характер которых (форма, размер, поверхность, прозрач2 ность, консистенция, запах) и количество ориентирует микробиолога на пра2 вильный ход диагностики. Важным аспектом является отсутствие бактериаль2 ного роста в случае обычных мультиконтаминированных продуктов (например, назофарингеальный экссудат, копрокультура, вагинальные выделения). Дан2
42
ный факт предполагает, что пациент проходит систематическое или местное лечение антибактериальными препаратами. Значение клиники некоторых вы2 деленных культур может быть установлено также на основе первичной культу2 ры, в случае отбора выделенных культур из неконтаминированных проб (жид2 кость из пункции) или грамотрицательных бацилл, выделенных за определен2 ным порогом в количественной урокультуре. При выделении монобактериаль2 ных культур из нормальных стерильно отобранных проб (гемокультура, жид2 кость из пункции) проводится прямая идентификация и антибиотикограмма. Из мультиконтаминированных культур проводится пересев колоний, затем – идентификация до уровня вида и тест на чувствительность к антибиотикам. Их селекция осуществляется, в зависимости от аспекта колонии, характера отоб2 ранного образца, клинической диагностики и результатов микроскопического исследования с окрашиванием. Реакции антиген2антитело (агглютинация на стекле и латекс2агглютинация) находят применение в лаборатории при иденти2 фикации антигенов из некоторых выделенных культур с клиническим значени2 ем при подтверждении рода и вида. Колонии E.coli, вызывающие диарейный синдром, классифицируются на основе патогенных механизмов у: энтеропато2 генной E.coli (EPEC), энтероинвазивной E.coli (EIEC), энтеротоксигенной E.coli (ETEC), энтерогеморрагической E.coli (EHEC), энтероагрегативной E.coli (EAEC). Биохимическая идентификация не дифференцирует патогенные штаммы Е. coli от непатогенных, поэтому рекомендуется провести тест по се2 ротипированию. Врач2клиницист на основе клинических признаков должен уточнить в направлении серотип, на который должна быть исследована проба пациента. Высев на обогащенные среды (например, бульон с селенитом на2 трия) и на селективные среды способствует росту сальмонелл и позволяет дифференцировать от других видов энтеробактерий.
Бета гемолитические стрептококки, изучаемые в медицине:
"Str.pyogenes (группа A), вызывающие фарингиты, кожные инфекции, по2 ловые инфекции, последствия постстрептококковой инфекции;
"Streptococcus (группа B), являющиеся частью нормальной микрофлоры урогенитального тракта женщины, верхних дыхательных путей, нижнего пи2 щеварительного тракта; у новорожденных детей, инфицированных матерью, вызывают менингит, септицемию, у взрослых – инфекции с различной лока2 лизацией, а у беременных – аборты и послеродовую септицемию;
2 группа C и G вызывают схожие инфекции со стрептококком A, но немно2 го реже.
Антибиотикограмма
Микробиологическая лаборатория играет важную роль в лечении инфек2 ций, используя идентификацию бактерий и тестирование на антибиотико2 чувствительность. Основная цель – это лабораторная помощь в установле2 нии клинического диагноза.
Антибиотикограмма необходима в следующих случаях: 2 назначение лечения врачом2клиницистом;
2 выявление тех штаммов, которые обладают энзимами, способными инактивировать действие антибиотиков in vivo;
2 эпидемиологический надзор за резистентными бактериями;
2 сравнение резистентных фенотипов штаммов, вызывающих нозокоми2 альные инфекции.
Этапы проведения антибиотикограммы являются стандартными: состав среды, рН среды, плотность посевного материала, длительность и темпера2
43
ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО
тура инкубации, стабильность и концентрация микробиального вещества. Лаборатория имеет автоматический «расшифровщик» антибиотикограммы (по диффузиметрическому методу), который имеет встроенную в софт2про2 грамму «эксперт», которая соответствует этому стандарту, со способностью выявлять штаммы, продуцирующие пенициллиназу и бета2лактамазу широ2 кого спектра, и также другие резистентные фенотипы. Кроме классического метода, используемого во всех лабораториях, проводится и автоматизиро2 ванная антибиотикограмма. Автоматический анализатор, находящийся в ра2 боте, может идентифицировать микроорганизмы и тестировать их на чув2 ствительность к антибиотикам в течение нескольких часов (от 2 до 12 часов). Длительность изменяется, в зависимости от семейства, к которому относят2 ся изучаемые колонии. Типы идентифицируемых микроорганизмов много2 численны и включают в себя как грамположительные, так и грамотрицатель2 ные бактерии. Выделение патогенного микроорганизма в чистой культуре (необходимое условие для получения правильного результата) позволяет идентифицировать и одновременно тестировать на чувствительность к анти2 биотикам на этом автоматическом анализаторе. Таким образом, имеется возможность обнаружения ферментов, которые ингибируют действие анти2 биотиков in vivo и автоматическая интерпретация результата антибиотиког2 раммы, в зависимости от наличия или отсутствия этих ферментов.
ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ (ПЦР)
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – экспериментальный метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты ДНК в биологическом материале (пробе). Помимо амплификации ДНК, ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с нуклеиновыми кислотами (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК) и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, выделения новых генов.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) была изобретена в 1983 году американским биохимиком Кэри Муллисом. Его целью было создание метода, который бы позволил амплифицировать ДНК в ходе многократных последовательных удвоений исходной молекулы ДНК с помощью фермента ДНК2полимеразы. Первая публикация по методу ПЦР появилась в ноябре 1985 года в журнале Science через 8 лет после этого. За изобретение метода ПЦР К.Муллис получил Нобелевскую премию.
Метод ПЦР основан на многократном избирательном копировании определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях in vitro. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце. В отличие от амплификации ДНК в живых организмах, репликации, с помощью ПЦР амплифицируются относительно короткие участки ДНК. В обычном ПЦР2процессе длина копируемых ДНК2участков составляет не более 3000 пар оснований. С помощью смеси различных полимераз, с использованием добавок и при определённых условиях длина ПЦР2фрагмента может достигать 20240 тысяч пар нуклеотидов.
44
Для проведения ПЦР необходимо:
•ДНК"матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать.
•Два праймера к противоположным концам разных цепей требуемого фрагмента ДНК.
•Термостабильная ДНК2полимераза, которая катализирует реакцию полимеризации ДНК. Полимераза для использования в ПЦР должна сохранять активность при высокой температуре длительное время, поэтому используют ферменты, выделенные из термофилов – Thermus aquaticus (Taq2полимераза), Pyrococcus furiosus (Pfu2 полимераза), Pyrococcus woesei (Pwo2полимераза) и другие.
•Дезоксирибонуклеозидтрифосфаты (dATP, dGTP, dCTP, dTTP).
•Ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы.
•Буферный раствор, обеспечивающий необходимые условия реакции.
Праймеры
Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двухцепочечной матрицы и ограничивает начало и конец амплифицируемого участка. Важнейшая характеристика праймеров – температура плавления (Tm) комплекса праймер2матрица.
Амплификатор
ПЦР проводят в амплификаторе – приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1 °C. Современные амплификаторы позволяют задавать сложные программы, в том числе с возможностью «горячего старта», Touchdown ПЦР и последующего хранения амплифицированных молекул при 4 C. Для ПЦР в реальном времени выпускают приборы, оборудованные флуоресцентным детектором. Существуют также приборы с автоматической крышкой и отделением для микропланшет, что позволяет встраивать их в автоматизированные системы.
45
ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО
Разновидности ПЦР
•Вложенная ПЦР – применяется для уменьшения числа побочных продуктов реакции. Используют две пары праймеров и проводят две последовательные реакции. Вторая пара праймеров амплифицирует участок ДНК внутри продукта первой реакции.
•Инвертированная ПЦР – используется в том случае, если известен лишь небольшой участок внутри нужной последовательности. Этот метод особенно полезен, когда нужно определить соседние последовательности после вставки ДНК в геном. Для осуществления инвертированной ПЦР проводят ряд разрезаний ДНК с последующим соединением фрагментов. В результате известные фрагменты оказываются на обоих концах неизвестного участка, после чего можно проводить ПЦР как обычно.
•ПЦР с обратной транскрипцией – используется для амплификации, выделения или идентификации известной последовательности из библиотеки РНК. Перед обычной ПЦР проводят на матрице мРНК синтез одноцепочечной молекулы ДНК с помощью ревертазы и получают одноцепочечную кДНК, которая используется в качестве матрицы для ПЦР. Этим методом часто определяют, где и когда экспрессируются данные гены.
•Ассимметричная ПЦР – проводится тогда, когда нужно амплифицировать преимущественно одну из цепей исходной ДНК.
Используется в некоторых методиках секвенирования и
46
гибридизационного анализа. ПЦР проводится как обычно, за исключением того, что один из праймеров берется в большом избытке.
•Количественная ПЦР, или ПЦР в реальном времени (Real2time), используется для непосредственного наблюдения за измерением количества конкретного ПЦР продукта в каждом цикле реакции. В этом методе используют флуоресцентно2меченые праймеры или пробы для точного измерения количества продукта реакции по мере его накопления; или используется флуоресцентный интеркалирующий краситель, который связывается с двухцепочечной ДНК. Обеспечивается простой и экономичный вариант для детекции и количественного определения ПЦР2продуктов в ходе ПЦР в режиме реального времени без необходимости использования специфичных флуоресцентных зондов или праймеров. В ходе амплификации краситель SYBR Green I встраивается в малую бороздку ДНК ПЦР продуктов и испускает более сильный, по сравнению с несвязанным красителем, флуоресцентный сигнал при облучении синим лазером. SYBR Green I совместим со всеми известными на сегодняшний день приборами для проведения ПЦР в режиме реального времени. Максимум поглощения для SYBR Green I при длине волны – 494 нм. Кроме главного, в спектре красителя имеются два небольших дополнительных максимума поглощения – при 290 нм и 380 нм. Максимум испускания для SYBR Green I при длине волны – 521 нм.
•Ступенчатая ПЦР. С помощью этого метода уменьшают влияние неспецифического связывания праймеров на образование ПЦР2продукта. Первые циклы проводят при температуре выше оптимальной температуры отжига, затем каждые несколько циклов температуру отжига постепенно снижают до оптимальной. Праймер связывается с комплементарной ДНК2мишенью, но с меньшей эффективностью и при температуре плавления праймера выше оптимальной (температура плавления – это равновесие между количеством связанных с ДНК2мишенью и свободных праймеров в растворе). При температуре отжига выше оптимальной праймер связывается с комплементарной цепью всей своей длиной; тогда как при оптимальной температуре отжига праймер стабилен при комплементарности на половину свой длины, что приводит к образованию неспецифического ПЦР2продукта. В большинстве случаев первые десять ПЦР2циклов можно проводить при температуре отжига в 72275 °С, а затем снизить до оптимальной, например, до 60265 °С.
•Метод молекулярных колоний – происходит амплификация с образованием молекулярных колоний.
•ПЦР длинных фрагментов – модификация ПЦР для амплификации протяженных участков ДНК (10 тысяч и более оснований).
•RAPD – ПЦР со случайной амплификацией полиморфной ДНК – используется тогда, когда нужно различить близкие по генетическим последовательностям организмы, например, разные сорта культурных растений, породы собак или близкородственные микроорганизмы.
•Групп специфическая ПЦР – ПЦР для родственных
47
ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО
последовательностей внутри одного или между разными видами, используя консервативные праймеры к этим последовательностям.
•ПЦР с использованием горячего старта – модификация ПЦР с использованием ДНК2полимеразы, в которой полимеразная активность блокируется при комнатной температуре антителами или имитирующие антитела в момент постановки реакции до первой денатурации в ПЦР.
•Виртуальные ПЦР относятся к вычислительным средствам для расчета теоретической ПЦР с помощью списка праймеров (или проб) для предсказания возможного ПЦР2продукта и участков связывания праймеров на исследуемом геноме или хромосомы, на кольцевых молекулах ДНК или на любом другом участке ДНК.
Криминалистика (ПЦР используют для сравнения так называемых «генетических отпечатков пальцев»).
Установление отцовства Медицинская диагностика. ПЦР дает возможность существенно ускорить
иоблегчить диагностику наследственных и вирусных заболеваний.
Персонализированная медицина. Для того чтобы определить, какой
разновидностью цитохрома обладает данный пациент, предложено проводить ПЦР2анализ перед применением лекарства, такой анализ называют предварительным генотипированием.
Клонирование генов – это процесс выделения генов и, в результате генноинженерных манипуляций, получения большого количества продукта данного гена. ПЦР используется для того, чтобы амплифицировать ген, который затем вставляется в вектор – фрагмент ДНК, переносящий чужеродный ген в тот же самый или другой, удобный для выращивания, организм).
Секвенирование ДНК
Вметоде секвенирования с использованием меченых флуоресцентной меткой или радиоактивным изотопом дидезоксинуклеотидов ПЦР является неотъемлемой частью, так как именно в ходе полимеризации в цепь ДНК встраиваются производные нуклеотидов, меченые флуоресцентной или радиоактивной меткой. Это останавливает реакцию, позволяя определить положения специфических нуклеотидов после разделения синтезированных цепочек в геле.
Мутагенез
Внастоящее время ПЦР стала основным методом проведения мутагенеза (внесения изменений в нуклеотидную последовательность ДНК).
48
(КОД УСЛУГИ 3035). ПЦР. ВПЧ 16, 18 (соскоб, количественное определение, Real time).
Папилломавирус 16 тип 4, 15 lg ВПЧ\105 клеток
Вирусная нагрузка в данном исследовании измеряется для каждого генотипа отдельно. Это значит, количество копий вируса папилломы человека 16 типа и количество копий вируса папилломы человека 18 типа.
(КОД УСЛУГИ 3032, ПЦР). ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 (соскоб, количественное определение, без генотипирования, Real time). В данном исследовании 12 определяемых генотипов разделены на 4 филогенетические группы, и вирусная нагрузка определяется для каждой группы отдельно. В филогенетическую группу может быть включено от 1 до 6 генотипов ВПЧ. Также определяется суммарная вирусная нагрузка (об этом подробней в соответствующем разделе).
Что такое 105 или 100 тыс. клеток? Вирус папилломы человека – внутриклеточный паразит, тропный к эпителию урогенитального тракта. Поэтому количество эпителиальных клеток, попавших в биологический материал во время забора, является принципиальным для получения корректного результата анализа. Эпителиальные клетки человека, содержащиеся в биоматериале, являются тем внутренним маркером, позволяющим лаборатории оценить адекватность соскоба или мазка, и, в случае необходимости, отбраковать его. Далее специальное программное обеспечение пересчитывает количество вируса папилломы человека на количество клеток человека, содержащихся в биоматериале, что позволяет стандартизировать результат анализа.
Логарифм – это показатель степени, в которую нужно возвести основание а, чтобы получить число b. Десятичный логарифм, соответственно, – логарифм с основанием 10.
Проще говоря, 10 = 101 = 1 lg 100 = 102 = 2 lg 1000 = 103 = 3 lg
10 000 = 104 = 4 lg и так далее...
Дело в том, что для клинической практики часто имеет значение не количество копий патогена, выраженное в натуральных числах, а изменение вирусной или бактериальной нагрузки в результате проводимой терапии, что удобней выражать в логарифмической шкале.
Результат измерения количества цитомегаловируса и вируса Эпштейна2 Барр в клиническом образце. Эти вирусы обнаруживаются в различных видах биоматериала: слюна, буккальный соскоб, цельная кровь, моча, ликвор. Важно, чтобы в ПЦР2исследовании контролировался каждый этап анализа. Это осуществляется, благодаря использованию нескольких контрольных точек на каждом из этапов. Одним из таких контролей является внутренний контрольный образец, присутствующий в каждом образце. Экстракция ДНК из плазмы периферической крови, спинномозговой жидкости (ликвора), слюны и мазков из ротоглотки проводится в присутствии внутреннего контрольного образца, который
49
ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО
позволяет контролировать выполнение процедуры исследования для каждого образца. При экстракции ДНК из клинического материала, содержащего клетки, происходит амплификация участка ДНК генома человека (эндогенный внутренний контроль). Эндогенный внутренний контроль позволяет не только контролировать этапы ПЦР2анализа (выделение ДНК и проведение ПЦР), но и оценивать адекватность забора материала и его хранения.
Результаты количественных измерений выражаются, в зависимости от вида биоматериала:
1.В копиях ДНК вируса в мл биологического материала (копий/мл). Эти единицы измерений применяются для плазмы периферической крови, спинномозговой жидкости (ликвора), слюны и мазков из ротоглотки.
2.При исследовании клинического материала, содержащего клетки (цельная кровь, лейкоциты периферической крови, урогенитальный соскоб), результаты количественных измерений выражаются двояко. Дело в том, что соскоб или взвесь лейкоцитов периферической крови – это клеточная суспензия, а не жидкость, если быть абсолютно точным. Поэтому измерять количество вирусных частиц в мл образца не совсем корректно, т.к. в каждую пробирку с транспортной средой или антикоагулянтом попадет разное количество клеток во время забора биоматериала. Поэтому производится на количество клеток в образце (маркером является участок ДНК генома человека, или эндогенный внутренний контроль). Таким образом, в знаменателе будут все те же 100 тыс. (или 105) клеток. В числителе же результат вирусной нагрузки выражается в логарифмах, и в копиях ДНК вируса.
Также иногда результат количественных измерений выражается как «менее чем...» или «более чем...». Тут необходимо дать определение некоторым аналитическим характеристикам тест2систем, используемых в ПЦР2исследованиях.
Аналитическая чувствительность, или предел обнаружения, – минимальное количество молекул ДНК/РНК, которое в состоянии выявить метод. Чаще используется концентрация аналита, которая выявляется с 95% вероятностью. То есть, при заявленной аналитической чувствительности в 400 копий ДНК вируса в мл, 95 из 100 образцов, содержащих вирус в количестве 400 копий/мл, будут интерпретированы лабораторией как положительные.
P.S. Об аналитической чувствительности в случае количественных тестов говорить не вполне корректно.
Аналитическая специфичность – насколько другие молекулы ДНК и РНК оказывают вклад в результат (ложный «+» или ошибка концентрации). Обычно характеризуется перечнем геномов, для которых метод доказано не дает перекрестных реакций и для которых такие реакции возможны.
Воспроизводимость – величина, показывающая, насколько второй результат исследования может отличаться от первого или диапазон значений, в которые попадает основная масса проведенных измерений данной точки. Обычно описывается стандартным отклонением или коэффициентом вариации (CV).
50