6. Как можно оценить антибиотическую активность лс, поступивших на контроль с целью проверки их концентрации? Ответ

Специфичность антибиотиков характеризуется:

высокой биологической активностью в отношении чувствительных к ним организмов, т.е. способностью проявлять эффект даже в очень низких концентрациях;

избирательностью действия, т.е. способностью конкретного антибиотика проявлять свое действие лишь в отношении определенных организмов или групп организмов, не оказывая заметного эффекта на другие формы живых существ.

Стандартизация антибиотиков

Биологическую активность антибиотиков определяют методом диффузии в агар (питательные среды).

Метод основан на сравнении угнетения роста тест-микроорганизма определенными концентрациями испытуемого препарата с угнетением роста известными концентрациями стандартного препарата антибиотика.

Угнетение роста микроорганизмов антибиотиками может осуществляться только при наличии трех условий:

1) биологически важная для жизнедеятельности бактерий система должна реагировать на воздействие низких концентрацией препарата через определенную точку приложения;

2) препараты должны обладать способностью проникать в бактериальную клетку и воздействовать на точку приложения;

3) препарат не должен инактивироваться раньше, чем вступит во взаимодействие с биологически активной системой бактерии.

Биологическая активность выражается в единицах действия - ЕД.

Единица действия - это специфическая активность, количественное выражение которой для каждого антибиотика указано в соответствующей фармакопейной статье.

Рабочими стандартами при исследовании антибиотиков служат специально изготовленные очищенные образцы препаратов, активность которых устанавливается по международным стандартным препаратам.

В качестве питательной среды используют агар. Для построения стандартной кривой используют 5 концентраций стандартного препарата. Растворы стандартного и испытуемого препаратов готовят в соответствующих стерильных растворителях. Диаметры зон угнетения роста тест-микроба, образуемые испытуемыми концентрациями растворов стандартного и исследуемого препаратов, измеряют с возможно большей точностью при помощи фотоувеличителя или других соответствующих приборов. Расчет биологической активности антибиотиков производят по стандартной кривой. Для построения стандартной кривой используют 5 концентраций стандартного препарата. Одна из концентраций, по которой вносят поправки для всех других концентраций, является контрольной.

По значениям величин зон взятых концентраций и средней величине зоны контрольной концентрации из всех чашек строят стандартную кривую по полулогарифмической сетке расчета активности антибиотиков, откладывая на оси абсцисс величины зон против показания соответствующих концентраций на оси ординат.

Для каждого антибиотика в ГФ указывается тест-микроорганизм и условия его выращивания.

За единицу антибиотической активности принимают минимальное количество антибиотика, способное подавить развитие или задержать рост стандартного штамма тест-микроба в определенном объеме питательной среды. Величину биологической активности антибиотиков выражают обычно в условных единицах дозы (ЕД), содержащихся в 1 мл раствора (ЕД/мл) или в 1 мг препарата (ЕД/мг). Например, за единицу антибиотической активности пенициллина принято считать минимальное количество препарата, способное задерживать рост золотистого стафилококка Staphylococcus aureus 209 в 50 мл питательного бульона. Для Стрептомицина сульфата за единицу активности принято считать минимальное количество антибиотика, задерживающее рост Bac. cereus, var. mycoides 537в 1 мл питательного бульона.

После того как многие антибиотики были получены в чистом виде, для некоторых из них стали выражать биологическую активность в массовых единицах. Например, установлено, что 1 мг чистого основания стрептомицина эквивалентен 1000 ЕД. Следовательно, 1 ЕД активности стрептомицина эквивалентна 1 мкг чистого основания этого антибиотика. Поэтому в настоящее время в большинстве случаев количество стрептомицина выражают в мкг/мг или мкг/мл. Чем ближе число мкг/мг в препаратах стрептомицина к 1000, тем, следовательно, чище препарат.

Очевидно, что единица биологической активности антибиотика не всегда совпадает с 1 мкг. Например, для бензилпенициллина 1 ЕД эквивалентна примерно 0,6 мкг, так как 1 мг антибиотика содержит 1667 ЕД.