ФИЗИОЛОГИЯ КРОВИ

41

Рекомендации к оформлению работы. Нарисуйте пластинку с нанесенными на неѐ сыворотками I, II и III групп. Покажите реакцию исследуемой крови со стандартными сыворотками.

Выводы.

Цель работы: научиться определять группу крови, используя методику, выявляющую более высокую специфичность и выраженность реакции агглютинации.

Необходимо для работы: Цоликлоны анти А и анти В, стеклянная пластинка, стеклянные палочки, карандаш по стеклу, стерильный скарификатор, спирт, эфир, йод, вата.

Объект исследования – человек.

Ход работы. Цоликлоны анти А и анти В представляют собой асцитную жидкость мышей, в которой содержатся антитела против группоспецифических антигенов А и В человека.

Цоликлон анти А – красного цвета Цоликлон анти В – синего цвета

Для определения групп крови используется явление агглютинации исследуемой крови с Цоликлоном анти –А и анти –В. На стеклянную пластинку под соответствующим надписями двумя отдельными пипетками наносят по капле (0,1 мл) Цоликлона анти –А и анти –В. Рядом с каплями антител помещают по капле крови ( 0,01-0,03 мл. т.е. в 10 раз меньше капли Цоликлона). Затем капли тщательно смешивают отдельными сухими стеклянными палочками. Наблюдают за ходом реакции с Цоликлонами визуально, при легком покачивании пластинки в течение 3 мин. Агглютинация наступает в первые 3-5 с, но наблюдение следует вести 3 мин. ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А и В.

Результат реакции в каждой капле может быть положительным (есть агглютинация) или отрицательным (нет агглютинации). Интерпретация результатов представлена ниже.

Рекомендации к оформлению работы. Нарисуйте пластинку с нанесенными на ней Цоликлонами анти –А и анти – В. Покажите, к какой группе относится исследуемая кровь.

Выводы.

42

Работа 12. Определение Д антигена системы резус в эритроцитах человека с помощью Цоликлона анти – Д Супер.

Цель работы: научиться определять резус – принадлежность крови человека с помощью методики, выявляющей более высокую специфичность и выраженность реакции агглютинации.

Необходимо для работы: Цоликлон анти –Д Супер, стеклянная пластинка, стерильный скарификатор, спирт, эфир, йод, вата.

Объект исследования – человек.

Ход работы. Цоликлон анти –Д Супер представляет собой культуральную жидкость, содержащую моноклональные человеческие анти – Д антитела. Последние продуцируются гетерогибридомой, полученной в результате слияния человеческой лимфобластоидной линии с миеломной клеточной линией мыши.

На стеклянную пластинку наносят большую каплю (около 0,1мл) Цоликлона анти – Д Супер. Рядом помещают маленькую каплю (0,01 – 0,05мл) исследуемой крови и смешивают их стеклянной палочкой. Если исследуемая кровь резус – положительная, то реакция агглютинации начинает развиваться через 10-15 с, достигая четкой выраженности через 30-60с. Резус – отрицательная кровь агглютинации не вызывает.

Рекомендации к оформлению работы. Нарисуйте в журнале вид исследуемой крови после реакции с Цоликлоном анти – Д Супер.

Выводы.

Вопросы для самоконтроля:

1.Какой признак лежит в основе классификации групп крови?

2.Перечислите основные антигенные системы крови.

3.Какие антигенные системы крови имеют наиважнейшее значение в практической медицине?

4.Где располагаются антигены основных групповых систем крови?

5.Где находятся антитела групповых систем крови?

6.К чему ведет взаимодействие соответствующих антигенов и антител крови?

7.Что такое агглютинация?

8.Сколько групп имеет антигенная система АВО?

9.Перечислите антигены и антитела системы АВО.

10.Какие антигены и антитела содержит I группа крови? 11.Какие антигены и антитела имеет II группа крови? 12.Что находится в III группе крови?

13.Чем отличается IV группа крови от остальных групп?

14.По какому правилу следует переливать кровь по системе АВО? 15.Что такое резус – фактор и где он находится?

16.Что такое резус – положительная и резус – отрицательная кровь? 17.Какое значение имеет резус – фактор при переливании крови? 18.По какой схеме переливается кровь по системе резус?

43

19.Почему учитывается резус – фактор в акушерстве?

20.Перечислите основные принципы переливания крови.

21.С какой целью проводится биологическая проба перед переливанием крови?

22.Какие существуют методики для определения групп крови по системам АВО и резус?

Тестовые задания

1.Резус - фактор находится в А) лейкоцитах; Б) плазме; В) эритроцитах;

Г) тромбоцитах.

2.Агглютинация – это

А) склеивание эритроцитов; Б) разрушение эритроцитов; В) образование тромба; Г) склеивание тромбоцитов.

Ситуационные задачи.

1.Вопрос:

Во время трансфузии разрешается переливать небольшое количество крови первой группы реципиентам второй, третьей и четвертой групп, но кровь всех перечисленных групп нельзя переливать реципиентам первой группы крови. Объясните, почему.

Ответ:

Первая группа крови не содержит активных агглютиногенов, поэтому эритроциты данной группы не будут склеиваться в плазме реципиентов других групп крови. Тем не менее, в плазме первой группы крови находятся агглютиногены альфа и бета, способные агглютинировать эритроциты, содержащие агглютиногены А и В. Во время трансфузии небольших количеств крови происходит разбавление плазмы донора и агглютинины альфа и бета не достигают концентраций, необходимых для реакции агглютинации, однако при увеличении дозы переливаемой крови такая реакция может произойти.

2.Вопрос:

Реципиент имеет резусотрицательную кровь. Можно ли ему перелить резусположительную кровь?

Ответ:

Трансфузия в данном случае разрешается, если реципиент имеет одинаковую группу крови по системе АВО, ранее не было переливания резусположительной крови и биологическая проба показала совместимость крови донора и реципиента. Повторное переливание подобной крови не разрешается,

44

так как у данного реципиента появляются антирезус – антитела, способные вызвать агглютинацию эритроцитов донора.

Темы для реферативных докладов

1.Групповые системы крови человека.

2.Характеристика групповой системы АВО.

3.Характеристика групповой системы резус.

4.Гемотрансфузионные реакции, вызванные несовместимым переливанием крови.

Литература:

1.Групповые системы крови человека и гемотрансфузионные осложнения./Под ред. М.А.Умновой. – М.,1989.

2.Справочник по переливанию крови и кровезаменителей /Под ред. О.К.Гаврилова. – М.,1982.

3.Физиология человека. /Под ред. Г.И. Косицкого.- М.,1985.

4.Физиология человека. /Под ред. Р.Шмидта и Г. Тевса.- т. 3. М.1986

5.Основы физиологии человека.- т.1/Под ред. Б. И. Ткаченко.- Санкт - Петербург, 1994.

6.Физиология крови. Методическое пособие к практическим занятиям по нормальной физиологии. – Фрунзе. КГМИ. 1981.

7.Физиология крови. Методическое пособие к практическим занятиям по нормальной физиологии.- Бишкек, КГМА, КРСУ, 2000.

Тема №4. Гемостаз и его компоненты.

Цель:

1.Знать значение основных компонентов гемостаза.

2.Знать основные механизмы действия свертывающей, противосвертывающей и фибринолитической систем крови.

3.Понять характер взаимодействия свертывающей, противосвертывающей и фибринолитической систем в поддержании агрегатного состояния крови.

4.Ознакомиться с методами оценки состояния гемостаза.

Перечень навыков, которыми должен овладеть студент:

1.Уметь объяснить значение и механизмы различных компонентов гемостаза.

2.Овладеть методами определения времени свертывания крови и времени кровотечения.

Необходимо повторить из курса физиологии, гистологии и химии:

1.Форменные элементы крови и их функции.

45

2.Белки плазмы крови и их функции.

3.Строение сосудистой стенки.

4.Понятие и функции ферментов.

Вопросы для самоподготовки:

1.Гемостаз: определение, значение, пусковой фактор.

2.Основные компоненты гемостаза (сосудисто - тромбоцитарный и коагуляционный), их значение в остановке кровотечения.

3.Сосудисто - тромбоцитарный механизм гемостаза, его сущность и продолжительность:

-реакция сосудов на их повреждение,

-тромбоциты, их количество, функции, свойства,

-участие тромбоцитов в образовании белого тромба.

4.Коагуляционный механизм гемостаза, его сущность и продолжительность процесса:

-внешний и внутренний механизмы свертывания крови,

-роль плазменных, тканевых и тромбоцитарных факторов в свертывании

крови,

- фазы коагуляционного гемостаза:

I фазаобразование протромбиназы;

II фаза –образование тромбина из протромбина;

IIIфазаобразование фибрина из фибриногена,

-строение красного тромба,

-понятия «аутокатализ» и «каскадность» в коагуляционном гемостазе. 5.Ретракция кровяного сгустка, еѐ значение.

6.Фибринолиз: определение, механизм, биологическое значение. 7.Противосвертывающая система крови, ее значение для сохранения

жидкого состояния крови.

8.Основные принципы регуляции гемостаза.

Домашнее задание:

1. Выписать основные фазы образования белого и красного тромбов и объяснить механизмы их формирования.

Основополагающий материал Гемостаз – сложный комплекс физиологических, биохимических и

биофизических процессов, направленных на предупреждение возникновения кровотечений и их остановку в случае появления. Гемостаз носит защитный характер, сохраняющий постоянство ОЦК и целостность сосудов. Система свертывания обеспечивает эластичность и прочность сосудистой стенки и формирует тромбы, закрывающие ее повреждения. Активируется она с момента нарушения сосуда и условно осуществляется через два механизма: сосудисто - тромбоцитарный и коагуляционый. В остановке кровотечения принимают участие кровеносные сосуды, все клетки крови (особенно тромбоциты) и плазма, содержащая факторы свертывания крови. Противосвертывающая система

46

выполняет две функции: предупреждает образование тромбов в интактных сосудах и предохраняет организм от распространения уже образовавшихся тромбов. Из всех форменных элементов крови в гемостазе наибольшую роль играют тромбоциты.

Тромбоциты – кровяные пластинки дисковидной формы, диаметром 5-8 мкм, покрытые мембраной, содержащей гликопротеины и фосфолипиды, способные к адгезии (приклеиванию к субэндотелию) и агрегации (приклеиванию друг к другу). Зона гиалоплазмы имеет микротрубочки, способные сокращаться и выделять активные вещества из грануломера, расположенного в центре. Эти вещества являются факторами, участвующими в свертывании крови и регенерации сосудов. Тромбоциты образуются из мегакариоцитов в красном костном мозге (см. рис. 7) и содержатся в крови в количестве 200-400 х 109/л. При снижении их количества (тромбоцитопении) удлиняются время свертывания и время кровотечения, сосуды теряют эластичность и легко повреждаются.

Механизмы сосудисто - тромбоцитарного (микроциркуляторного) гемостаза:

Пусковым фактором гемостаза является повреждение сосудов. В развитии данного процесса можно наблюдать несколько механизмов (см. рис.13)

1.Спазм сосудов, который имеет нервно-рефлекторный, гуморальный и местный характер. При повреждении в сосудистой стенке секретируются сосудосуживающие вещества (эндотелины, ангиотензин II, тромбоксан и др.). Болевая реакция усиливает спазм сосудов за счет увеличения в крови адреналина, норадреналина, серотонина. Непосредственное действие повреждающих факторов вызывает сокращение гладких мышц сосудов и последующий отек тканей. Продолжительность спазма не велика, но он способствует удержанию крови в русле и подготовке к дальнейшим реакциям гемостаза.

2.Одновременно со спазмом сосудов в гемостаз вовлекаются тромбоциты. Коллагеновые волокна, расположенные в области повреждения, притягивают тромбоциты, из сосудистой стенки выделяется большое количество веществ, активирующих поверхностные рецепторы тромбоцитов, это вызывает изменение формы последних и происходит прилипание кровяных пластинок к поверхности поврежденного сосуда (адгезия тромбоцитов). Из тромбоцитов начинают выделяться активные вещества, которые не только способствуют адгезии, но и вызывают прилипание кровяных пластинок друг к другу (агрегацию тромбоцитов). Склеивание тромбоцитов сначала можно остановить и прекратить дальнейшую реакцию (обратимая агрегация), но в дальнейшем ионы кальция, выделяющиеся из тромбоцитов БАВ, АТФ, усиливают протекающие реакции, агрегация становится необратимой.

Склеенные тромбоциты образуют белый тромб, который может закрыть сосуды микроциркуляции, а в крупных сосудах является необходимой основой для образования красного тромба. Тромбоциты, составляющие белый тромб, продолжают уплотняться (ретракция тромба), из них выделяются

47

тромбоцитарные факторы, запускающие последующие реакции гемостаза, которые приводят к образованию красного тромба (гемокоагуляции).

Продолжительность сосудистотромбоцитарного компонента гемостаза от нескольких секунд до 1-2 мин.

3. Механизмы коагуляционного гемостаза.

Коагуляционный гемостаз проявляется в основном при повреждении крупных сосудов – in vivo, а также в условиях in vitro.

Гемокоагуляция происходит в три фазы и в ней участвуют как внутренние (кровяные), так и внешние (тканевые) факторы.

Первая фаза гемокоагуляции заключается в образовании протромбиназы. Это наиболее сложная и продолжительная фаза, так как в ней участвуют три разных вида факторов: тканевые (тканевой тромбопластин), плазменные (ионы кальция, плазменные белки), факторы, выделяющиеся из тромбоцитов во время их ретракции (тромбоцитарный тромбопластин). Внешний и внутренний факторы активируют друг друга, но данные реакции протекают сравнительно медленно, занимая основное время коагуляции (5-7 минут).

Протромбиназа необходима для осуществления второй фазы коагуляции –

превращения протромбина в тромбин. Протромбин – белок, синтезируемый в печени с участием витамина К, находится в плазме крови в неактивном состоянии. Фермент протромбиназа активирует его, превращая в тромбин, который является активатором не только последующей стадии коагуляции, но и путем аутокатализа ускоряет образование протромбиназы. До появления тромбина первая фаза протекает медленно, но даже небольшое количество активного тромбина значительно активизирует ход данной реакции.

Третья фаза коагуляции заключается в образовании нерастворимых нитей фибрина из растворимого фибриногена. Этот сложный процесс протекает с участием тромбина и ионов кальция, в результате из фибриногена - мономера образуется сначала фибрин – димер, затем фибрин – полимер, в нитях которого запутываются форменные элементы и образуется красный тромб.

Таким образом, в ходе образования красного тромба проявляются элементы аутокатализа (образование тромбина стимулирует активацию протромбиназы) и каскадности (завершение одной стадии свертывания стимулирует развитие последующей).

Кровяной сгусток, состоящий из нитей фибрина, форменных элементов и сыворотки крови, называется красным тромбом.

Продолжительность коагуляционного гемостаза – 5-10 мин.

После своего образования в течение нескольких часов под влиянием фибронектина, красный тромб подвергается ретракции, т.е. уплотнению, с целью надежного закрепления его на поврежденном участке сосуда. В процессе ретракции выделяется сыворотка, т.е. плазма крови без фибриногена.

48

Рис. 13. Схема основных этапов и фаз свертывания крови.

В дальнейшем тромб начинает растворяться. Расщепление нитей фибрина называется фибринолизом. Фибринолиз направлен на восстановление просвета закупоренного сгустком кровеносного сосуда. Основным фибринолитическим ферментом является плазмин, поступающий в неактивной форме из многих тканей и макрофагов. Превращение плазминогена в плазмин происходит под влиянием как внешних (тканевых), так и внутренних факторов ((урокиназа, выделяющаяся почками, ферменты плазмы и форменных элементов).

В целостном организме кровь сохраняется в жидком состоянии, так как существует ряд факторов, препятствующих образованию тромбов. Основным из них является наличие противосвертывающей системы крови (естественных антикоагулянтов первичного и вторичного происхождения: гепарина,

49

антитромбинов, продуктов деградации фибрина и др.). К дополнительным факторам поддержания агрегатного состояния крови относятся: гладкая поверхность эндотелия сосудов, большая скорость кровотока, краевое расположение фибриногена, одинаковый заряд эндотелия и форменных элементов крови.

Свертывающая, противосвертывающая и фибринолитическая системы крови очень тесно связаны между собой. Сдвиги в одной системе обязательно отражается на состоянии другой, в результате чего наблюдаются гипер - и гипокоагуляции вторичного происхождения. Различные состояния организма (боль, гипо- и гипертермия, гипоксия, интоксикация, ожог, травма, сильные эмоции и т.д.) в первую очередь вызывают активацию гемостаза, что проявляется в ускорении свертывания крови (или гиперкоагуляции). Вслед за такой реакцией наступает усиление активности противосвертывающей системы, которая может проявиться даже в кровотечениях (вторичная гипокоагуляция).

Агрегатное состояние крови регулируется нейро - гуморальными механизмами. Влияние вегетативной системы на гемостаз опосредуется через изменение функций сосудистой стенки. Так, симпатическая система стимулирует выработку коагулянтов, что способствует активации системы свертывания. Парасимпатическая система может замедлить время свертывания крови.

Применяемые в медицинской практике группы препаратов, влияющих на разные этапы свертывания крови и фибринолиза, могут уменьшить агрегацию тромбоцитов, замедлить свертывание крови, ускорить гемокоагуляцию, ускорить или замедлить процесс фибринолиза

Все эти препараты используются при лечении тромбофлебитов, в комплексной терапии инфаркта миокарда, для профилактики тромбозов и тромбоэмболий, при нарушениях микроциркуляции и других заболеваниях. Гепарин препятствует переходу протромбина в тромбин, активирует антитромбин III, нарушает биосинтез протромбина и других факторов свертывания крови.

В медицинской практике при определенных состояниях (иногда после травм, хирургических вмешательств, при циррозе печени, передозировке фибринолитических веществ, маточных кровотечениях) активность системы фибринолиза повышается, что может стать первопричиной кровотечений. В этих случаях необходимо применять антифибринолитические вещества, которые ингибируют процесс активации плазмина или же блокируют действие самого плазмина.

Практическая часть

Перечень работ:

13.Определение времени свертывания крови (по модификации Бюркера) 14.Определение продолжительности кровотечения.

15.Влияние противосвертывающего вещества на свертываемость крови.

50

Работа 13. Определение времени свертывания крови (по модификации Бюркера)

Цель работы: научиться определять время свертывания крови по появлению первых нитей фибрина в цельной крови.

Необходимо для работы: кровь, предметное стекло с углублением, игла, стерильный скарификатор, спирт, эфир, йод, вата.

Объект исследования – человек или крыса.

Ход работы. После прокола пальца человека или удаления кончика хвоста у крысы 2-3 капли крови помещают в углубление предметного стекла, которое кладут на ладонь. Через каждые 30 сек. проводят через кровь иглу до тех пор, пока за ней не потянется первая нить фибрина.

Время свертывания – это время от момента взятия крови из пальца или хвоста до появления первых нитей фибрина.

Рекомендации к оформлению работы. Зарисуйте в журнал предметное стекло с кровью. Покажите в ней нити фибрина. Запишите время свертывания крови.

Выводы.

Работа 14. Определение времени кровотечения (метод Дьюка)

Цель работы: научиться определять время тромбоцитарно – сосудистого гемостаза по длительности кровотечения из ранки.

Необходимо для работы: стерильный скарификатор, фильтровальная бумага, спирт, йод, эфир, вата.

Объект исследования – человек или крыса.

Ход работы. Прокалывают кожу пальца на глубину 3 мм или отсекают кончик хвоста у крысы и засекают время. Выступающие капли крови промокают через каждые 30сек. фильтровальной бумагой до прекращения образования очередной капли.

Рекомендации к оформлению работы. Зарисуйте в тетрадь размеры кровяного пятна на фильтровальной бумаге с первого до последнего измерений времени кровотечения. Укажите время продолжительности кровотечения.

Выводы.

Работа 15. Влияние противосвертывающего вещества на свертывание крови

Цель работы: убедиться, что антикоагулянты препятствуют образованию нитей фибрина.

Необходимо для работы: два предметных стекла, гепарин, иглы, стерильный скарификатор, спирт, йод, эфир, вата.