3 Этап эсми.

А. Наблюдение за животным. В период наблюдения за животным должен быть обеспечен надлежащий уход; методика наблюдения зависит от ожидаемого эффекта:

а) при определении вирулентности, токсигенности, токсичности наблюдают появление инфильтратов или учитывают гибель животного;

б) при этиологической диагностике наблюдают за возникновением признаков заболевания; берут материал для бактериологического и серологического исследования, соблюдая правила асептики; ставят аллергические пробы.

Б. Гибель (умерщвление) животного и вскрытие трупа.

Между смертью и вскрытием трупа животного должно проходить как можно меньше времени, так как кишечная флора даже при температуре холодильника проникает в ткани, кровь, органы через 20–27 часов. Более целесообразно умерщвлять животное в агональный период.

Животные, которые подвергались в эксперименте воздействиям, поведшим за собой понижение жизнеспособности, подлежат умерщвлению гуманным методом (эвтаназии). Эвтаназия не должна выполняться в помещении, в котором находятся другие лабораторные животные. Умерщвление часто осуществляется путём декапитации с использованием специальных гильотин, путём передозировки наркотических веществ (эфира, хлороформа, барбитуратов), электрическим током, воздушной эмболией (внутривенным введением воздуха), полным обескровливанием при использовании различных методов обезболивания.

При вскрытии труп кролика фиксируют на специальной доске за вытянутые лапы. Трупы морских свинок, крыс, мышей можно прикалывать старыми инъекционными иглами к парафиновой пластине в эмалированном лотке. Всю шерсть животного смачивают дезинфектантом (спирт, 5% карболовая кислота, 5% хлорамин). Кожу разрезают по средней линии живота от симфиза до подбородка. На уровне передних и задних лап делают боковые разрезы. Кожу отсепаровывают, отворачивают в стороны и прикалывают к пластине.

Ход вскрытия зависит от задач исследования: изучают паталогоанатомическую и патоморфологическую картину, делают посев органов для выявления обсеменённости и выделения чистой культуры, из внутренних органов готовят мазки-отпечатки.

Вскрытие начинают с грудной полости, вырезая грудину. Если в грудной полости есть экссудат, из него делают мазки и посев. Кровь из сердца забирают проколом пастеровской пипеткой с оттянутым капиллярным концом. Проводят осмотр органов грудной полости и при необходимости забирают из них кусочки ткани. Далее вскрывают брюшную полость. При наличии экссудата его засевают в питательную среду. Затем тщательно осматривают и исследуют органы брюшной полости. Взятие материала из паренхиматозных органов проводят следующим образом: поверхность органа прижигают нагретым в пламени спиртовки скальпелем; прижжённый участок органа прокалывают стерильной пастеровской пипеткой с оттянутым концом или стерильной петлей; взятый материал засевают.

Все этапы работы с лабораторными животными регистрируют в специальном журнале с графами:

• Вид лабораторного животного.

• Цель заражения.

• Время заражения.

• Материал, примененный для заражения.

• Изменение поведенческих реакций животного после заражения.

• Время гибели (умерщвления) животного.

• Изменения, обнаруженные при вскрытии.

• Материал, взятый для посева.

• Свойства микроорганизма.

• Вид микроорганизма.

После вскрытия труп животного сжигают, автоклавируют или кипятят 1–2 часа в растворе фенола; инструменты дезинфицируют, очищают, затем стерилизуют. Трупы животных, павших от особо опасных инфекций, вскрывают в специальных помещениях с соблюдением особых мер предосторожности.

4этап ЭСМИ. Идентификация выделенной культуры и заключение по результатам исследования.

Оценка ЭСМИ.

Достоинства метода:

• относительно высокая чувствительность;

• высокая специфичность;

• ранний метод исследования.

Недостатки метода:

• длительность;

• не всегда доступен;

• опасность инфицирования;

• дорогостоящий.

Таблица 17

Схема экспериментального метода исследования

Цели	Выделение и идентификация чистой культуры микроорганизмов.
	Определение вирулентности и патогенности микроорганизмов.
	Индикация и идентификация экзотоксинов.
	Изучение патогенеза инфекционных болезней при воспроизведении экспериментальных инфекций.
	Производство биологических препаратов.
	Проверка безвредности и эффективности лечебных препаратов.
	Лабораторные животные - доноры крови для приготовления кровяных питательных сред.
Этапы	1 - взятие и обработка материала
	2 – выбор и заражение лабораторного животного	здоровое и чувствительное мыши, крысы, кролики, бараны, лошади беспородные и линейные гнотобионты и гнотофоры
		методы заражения: накожный внутрикожный подкожный внутримышечный внутривенный пероральный интраназальный внутриполостной внутриорганный
	3	прижизненно		наблюдение взятие материала для БЛМИ и СЛМИ постановка кожно-аллергических проб
		гибель (умерщвление) животного, вскрытие		патологоанатомическая картина патоморфологическая картина препараты-отпечатки взятие материала для БЛМИ и СЛМИ
	4 – идентификация и заключение
Оценка	достоинства		относительно высокая чувствительность высокая специфичность ранний метод исследования
	недостатки		длительность не всегда доступен опасность инфицирования дорогостоящий