- •Федеральное агентство по образованию
- •Биохимия
- •В.В. Шапкарин, а.П. Королев, с.Б. Гридина, е.П. Зинкевич
- •Оглавление
- •Глава 1. Методы исследования в биохимии………………………………….…4
- •Глава 2. Белки и аминокислоты…………………………………………………8
- •Глава 3. Ферменты………………………………………………………………..35
- •Глава 4. Углеводы и их обмен…………………………………………………...56
- •Глава 5. Белки и их обмен ……………………………………………………….62
- •Глава 6. Липиды и их обмен ……………………………………………………..63
- •Глава 7. Витамины ………………………………………………………………..71
- •Введение
- •Глава 1. Методы исследования в биохимии
- •1.1. Указания к выполнению лабораторных работ
- •Глава 2. Белки и аминокислоты
- •2.1. Цветные реакции на белки и аминокислоты
- •Цветные реакции на белки и аминокислоты
- •2.2. Методы количественного определения белка
- •Определение белкового азота методом кьельдаля
- •Разведение стандартного раствора белка
- •2.3. Выделение белков из биологических объектов
- •2.4. Реакции осаждения белков
- •Осаждение белков при нагревании
- •Осаждение белков при нагревании
- •Осаждение белков минеральными кислотами
- •Осаждение белков солями тяжелых металлов
- •2.5. Разделение смеси аминокислот методом хроматографии на бумаге
- •Глава 3. Ферменты
- •3.1. Выделение ферментов и обнаружение их действия
- •Продукты гидролиза крахмала
- •Выделение амилаз из солода
- •Выделение сахаразы из дрожжей
- •3.2.Специфичность действия ферментов
- •3.3. Сравнение действия неорганических катализаторов и ферментов
- •3.4. Факторы, влияющие на скорость ферментативных реакций (на активность ферментов)
- •3.5. Выделение α- и β- амилаз из солода и определение их активности
- •3.6. Определение активности амилаз по Вольгемуту
- •3.7. Влияние активаторов и ингибиторов на активность ферментов
- •3.8. Определение активности каталазы (по а.Н. Баху и а.И. Опарину)
- •Глава 4. Углеводы и их обмен
- •4.1 Действие амилазы на сырой и вареный крахмал
- •4.2. Анаэробное окисление углеводов
- •Глюкоза
- •О алкогольдегидрогеназа
- •Глава 5. Белки и их обмен
- •5.1. Определение активности протеаз (по методу Ансона)
- •Глава 6. Липиды и их обмен
- •6.1. Определение йодного числа жира (методом Гануса)
- •6.2.Определение кислотного числа жира
- •6.3. Определение активности липазы клещевины
- •Глава 7. Витамины
- •7.1. Качественные реакции на витамин а
- •7.2. Качественные реакции на витамин д
- •7.3. Качественная реакция на витамин в1 (с диазореактивом)
- •7.4. Качественная реакция на витамин в2
- •7.5. Качественная реакция на витамин (в5) рр
- •7.6. Качественная реакция на витамин с
- •7.7. Количественное определение витамина с
- •Библиографический список
- •Биохимия
- •650056, Г. Кемерово, б-р Строителей, 47
- •650010, Г. Кемерово, ул. Красноармейская, 52
Осаждение белков при нагревании
|
№ пробирки |
Реакция среды |
Наблюдаемые изменения |
Причина изменений |
|
1. |
Нейтральная |
|
|
|
2. |
Слабокислая |
|
|
|
3. |
Сильнокислая |
|
|
|
4. |
Сильнокислая + NaCl |
|
|
|
5. |
Щелочная |
|
|
Осаждение белков минеральными кислотами
Концентрированные минеральные кислоты (кроме ортофосфорной) вызывают необратимое осаждение белков. Это объясняют как явлениями дегидратации молекул белка, так и рядом других причин (денатурация, образование нерастворимых солей и др.). В избытке минеральных кислот, кроме азотной, выпавший остаток белка растворяется. Желатин не осаждается минеральными кислотами.
ХОД РАБОТЫ. В три пробирки вносят 1,5-2,0 мл следующих концентрированных кислот: в первую – соляной, во вторую – серной, в третью – азотной. Затем, наклонив пробирки под углом 45, осторожно по стенке наслаивают 0,5-1,0 мл раствора белка (молоко или раствор яичного белка). На границе соприкосновения двух слоев образуется осадок в виде белого кольца. Пробирки осторожно встряхивают и наблюдают за состоянием осадка. Осадок, выпавший при действии азотной кислоты, увеличивается, а осадки, выпавшие при действии соляной и серной кислот, растворяются в их избытке. Результаты этой и всех последующих реакций вносят табл. 6.
Таблица 6 Осаждение белков
|
№ пробы
|
Название осадителя |
Характер осадка |
Растворимость осадка в избытке осадителя |
|
1 |
Соляная кислота |
|
|
|
2 |
Серная кислота |
|
|
|
3 |
Азотная кислота |
|
|
|
4 |
Сульфосалициловая кислота |
|
|
|
5 |
Трихлоруксусная кислота |
|
|
|
6 |
Сульфат меди |
|
|
|
7 |
Ацетат свинца |
|
|
|
8 |
Нитрат серебра |
|
|
|
9 |
Этанол |
|
|
ОСАЖДЕНИЕ БЕЛКОВ ОРГАНИЧЕСКИМИ КИСЛОТАМИ
Из органических кислот в качестве осадителей белков широко применяют трихлоруксусную кислоту (ТХУ) и сульфосалициловую кислоту.
Механизм осаждения белков этими кислотами объясняют денатурацией и дегидратацией молекулы белка. ТХУ осаждает только белки и не осаждает продукты их гидролиза. Это имеет важное значение для определения белкового и небелкового азота. Сульфосалициловая кислота осаждает белки и высокомолекулярные пептиды.
ХОД РАБОТЫ. В две пробирки наливают по 1 мл раствора белка яиц и добавляют равный объем в первую – раствора с массовой долей ТХУ 10 %, в другую – раствора с массовой долей сульфосалициловой кислоты 10 %. Выдерживают 5 мин и результат опыта вносят в табл. 6.
При осаждении белков конечная концентрация органических кислот в растворе должна быть не менее 2,5-5 %. При осаждении белков молока она должна составлять 12 %.