Алгоритм лабораторної роботи:

1. Маркують 3 пробірки - контрольну, дослідні - для визначення прямого білірубіну, загального білірубіну.

2. Пробірки заповнюють відповідно до нижченаведеної таблиці.

3. Пробірки витримують 10 хв при кімнатній температурі, після чого фотометрують дослідні проти контролю.

4. Розрахунок вмісту прямого та загального білірубіну обчислюють за формулою.

5. Вміст непрямого білірубіну розраховують за різницею загального і прямого білірубіну.

6. У висновках порівнюють концентрацію різних форм білірубіну у досліджуваних пробах крові з нормою.

Методика проведення експерименту

1 Кількісне визначення загального, прямого та непрямого білірубіну в сироватці крові (за методом Ієндрашека)

Принцип методу: діазореактив дає з прямим (зв’язаним) білірубіном рожеве забарвлення. Інтенсивність забарвлення розчину (азобілірубін) пропорційна концентрації прямого білірубіну і може бути визначена фотометрично. Непрямий (вільний) білірубін можна перевести в розчинний стан додаванням до сироватки крові кофеїнового реактиву, який підвищує розчинність цього пігменту, і визначити за допомогою діазореакції. Загальний вміст обох форм білірубіну становить загальний білірубін. За різницею між кількістю загального і прямого білірубіну визначають рівень непрямого білірубіну.

Хід роботи: сироватку крові розводять 1:1 0,9% розчином NaCl. Пробірки заповнюють відповідно до таблиці.

Номер пробірок	1	2	3
Реактив	Прямий білірубін	Контроль	Загальний білірубін
Сироватка, мл	0,5	0,5	0,5
NaCl, 0,85%, мл	1,75	0,25	-
Діазосуміш, мл	0,25	-	0,25
Кофеїновий реактив, мл	-	1,75	1,75

Перемішують і залишають пробірки на 10 хв. Фотометрують при зеленому світлофільтрі (530 нм) у кюветі 5 мм проти контролю. Знаходять вміст прямого і загального білірубіну за різницею загального і прямого білірубіну. За різницею загального і прямого білірубіну обчислюють вміст непрямого.

Розрахунок проводять за формулою

Х = Е · 11,5 · 17,1 мкмоль/л

або за калібрувальним графіком.

Клініко-діагностичне значення

У нормі вміст:

• загального білірубіну становить 8,5-20,5 мкмоль/л (0,1 - 1,2 мг/100 мл),

• непрямого - 1,7-17,1 мкмоль/л (0,1-1,0 мг/100 мл),

• прямого - 0,86-5,1 мкмоль/л (0,05-0,25 мг/100 мл).

Кров новонароджених відрізняється більш високим вмістом білірубіну (23,1 мкмоль/л).

Нагромадження в крові білірубіну вище 27,36-34,20 мкмоль/л призводить до відкладання його в тканинах, появи жовтяниці. При гемолітичній жовтяниці печінка не встигає зв’язувати велику кількість непрямого (вільного) білірубіну, що утворюється внаслідок посиле-ного гемолізу еритроцитів. У результаті в плазмі крові спостерігають підвищений вміст непрямого білірубіну.

Паренхіматозна жовтяниця виникає при гепатитах (вірусних, токсичних), цирозах печінки. Внаслідок пошкодження мембран гепатоцитів прямий білірубін частково потрапляє назад у кров. Крім того, знижується здатність печінки знешкоджувати непрямий білірубін. У результаті при паренхіматозній жовтяниці спостерігають різного ступеня білірубінемію як за рахунок фракції прямого, так і непрямого білірубіну.

При обтураційній жовтяниці внаслідок закупорення (камінцями, пухлиною) жовчних проток, жовч переповнює їх і потрапляє в русло крові. Тому білірубінемія (до 170-700 мкмоль/л) буде виражена в основному за рахунок фракції прямого білірубіну.

Після проведення експериментальної частини роботи ви повинні оформити протокол лабораторної роботи.

Виконайте завдання та перевірте правильність їх розв’язання з еталоном відповіді.

Завдання 1

Хвора А. госпіталізована з вираженою жовтяницею, скаргами на відчуття тяжкості в епігастральній ділянці і правому підребер’ї, шкірний свербіж, стомлюваність, дратівливість. При лабораторному обстеженні виявлено: гіпербілірубінемію з переважним підвищенням кон’югованого білірубіну, тимолова проба в нормі. Про яку патологію свідчать ці симптоми?

A. Механічну жовтяницю.

B. Гострий гепатит.

C. Гемолітичну жовтяницю.

D. Жовтяницю Критлера-Кайяра.

E. Цироз печінки.

Еталон відповіді: А.

Завдання 2

Кал хворого містить велику кількість нерозщепленого жиру і має сірувато-білий колір. Назвіть причину цього явища.

A. Обтурація жовчної протоки.

B. Недостатня активація пепсину соляною кислотою.

C. Гіповітаміноз.

D. Ентерит.

E. Подразнення епітелію кишечника.

Еталон відповіді: А.

Завдання 3

У хворого з жовтяницею виявлено: підвищення у плазмі крові вмісту загального білірубіну за рахунок непрямого (вільного), в калі і сечі – високий вміст стеркобіліну, рівень прямого (зв'язаного) білірубіну в плазмі крові в межах норми. Про який вид жовтяниці можна стверджувати?

A. Гемолітичну.

B. Паренхіматозну (печінкову).

C. Механічну.

D. Жовтяницю немовлят.

E. Хворобу Жильбера.

Еталон відповіді: А.

Завдання 4

Пацієнт звернувся до клініки зі скаргами на загальну слабість, ниючі болі в животі, поганий апетит, з підозрою на жовтяницю. У сироватці крові виявлено 77,3 мкмоль/л загального білірубіну і 70,76 мкмоль/л кон'югованого білірубіну. Який найбільш імовірний вид жовтяниці?

A. Механічна жовтяниця.

B. Гострий гепатит.

C. Цироз печінки.

D. Обтураційна жовтяниця.

E. Гемолітична жовтяниця.

Еталон відповіді: А.

Завдання 5

У хворого А. після переливання крові спостерігається жовтуватість шкіри та слизових оболонок, у крові підвищено рівень загального та непрямого білірубіну, в сечі підвищено рівень уробіліну, в калі - рівень стеркобіліну. Про який вид жовтяниці це свідчить?

A. Гемолітичну жовтяницю.

B. Спадкову жовтяницю.

C. Обтураційну жовтяницю.

D. Паренхіматозну жовтяницю.

E. Жовтяницю новонароджених.

Еталон відповіді: А.

Завдання 6

При укусі отруйної змії у людини може розвинутися гемолітична жовтяниця. Назвіть показник плазми крові, який зростає у потерпілого в першу чергу.

A. Білірубін непрямий (некон’югований).

B. Білірубін прямий (кон’югований).

C. Сечова кислота.

D. Сечовина.

E. Вільні амінокислоти.

Еталон відповіді: А.

Короткі методичні вказівки до роботи студентів на практичному занятті

Заняття починається з розв’язання навчальних задач, після чого необхідно виконати досліди лабораторної роботи.

У кінці заняття проводяться тестовий контроль, аналіз результатів роботи, в яких беруть участь усі студенти під керівництвом викладача.