Теоретичні питання

1. Білки плазми крові та їх клініко-біохімічна характеристика.

2. Фракціонування білків крові. Протеїнограма білків у нормі та за умов патології.

3. Компоненти системи неспецифічної резистентності організму та білки “гострої фази” запальних процесів.

4. Ферменти плазми крові, їх значення в ензимодіагностиці захворювань внутрішніх органів.

5. Калікреїн-кінінова система.

На занятті ви повинні будете виконати експериментальну частину роботи згідно з алгоритмом лабораторної роботи та методикою її проведення.

Алгоритм лабораторної роботи:

1. Маркують 3 пробірки - дослідну, контрольну, стандартну.

2. Пробірки заповнюють відповідно до нижченаведеної методики проведення експерименту.

3. Оптичну щільність дослідної та стандартної проб вимірюють за допомогою фотоелектроколориметра.

4. Оптична щільність досліджуваних розчинів прямо пропорційна концентрації загального білка.

5. Вміст білка у сироватці крові розраховують за формулою і оцінюють отриманий результат відповідно до норми.

Методика проведення експерименту

1 Визначення загального білка сироватки крові біуретовим методом

Принцип методу: метод ґрунтується на утворенні забарвленого у фіолетовий колір комплексу пептидних зв’язків білка з сульфатом міді у лужному середовищі. Інтенсивність забарвлення прямо пропорційна концентрації білка у сироватці крові і визначається фотометрично.

Хід роботи: у першу пробірку вміщують 0,1 мл сироватки крові (дослідна проба), в другу - 0,1 мл стандартного розчину білка (стандартна проба), у третю - 0,1 мл 0,9% розчину хлориду натрію (контроль). В усі пробірки додають по 5 мл біуретового реактиву, вміст пробірок обережно перемішують і через 30 хв визначають екстинкцію за допомогою фотоелектроколориметра у кюветах по 10 мл при зеленому світлофільтрі (540 нм) проти контрольного розчину.

Розрахунок роблять за формулою

Ед · Сст

Сд = ,

Ест

де Сд - вміст білка в досліджуваній сироватці крові, г/л;

Ед - екстинкція досліджуваної сироватки крові;

Сст - концентрація білка в стандартному розчині, г/л;

Ест - екстинкція стандартного розчину білка.

Клініко-діагностичне значення. Вміст загального білка в сироватці крові у дорослих становить 65-85 г/л. Підвищення вмісту загального білка в сироватці крові (гіперпротеїнемія) може бути відносне (втрата води під час опіків, діареї) та абсолютне (мієломна хвороба, інфекційні захворювання і ревматизм). Гіпопротеїнемія - зменшення вмісту білка в сироватці крові - виникає в основному за рахунок зменшення альбумінів і спостерігається при нефротичному синдромі, ураженні печінки, підвищенні проникності стінок судин, білковому голодуванні.

2 Визначення фракцій білка сироватки крові методом електрофорезу.

Електрофоретичний розподіл білків широко використовується в медичній практиці для діагностики захворювань і дозволяє виділити із сироватки крові їх окремі фракції.

Принцип методу: метод ґрунтується на різній рухливості білків у електричному полі залежно від заряду та молекулярної маси білка.

Електрофорез на папері дозволяє розподілити білки сироватки крові на 5 фракцій: альбуміни, α₁-, α₂-, β-, γ-глобуліни.

Клініко-діагностичне значення. За допомогою електрофорезу білки сироватки крові поділяють на фракції, які характеризують стан організму, і використовують для діагностики. Зменшення кількості альбумінів вказує на захворювання печінки, де вони синтезуються, або втрату їх з сечею при патології нирок. Збільшення кількості γ-глобулінів спостерігають при інфекційних процесах, а зменшення цієї фракції може свідчити про СНІД. Значне зниження альбумінів і під-

вищення всіх глобулі нових фракцій відбувається при злоякісних пухлинах.

Після проведення експериментальної частини роботи ви повинні оформити протокол лабораторної роботи.

Виконайте завдання та перевірте правильність їх розв’язання з еталоном відповіді.

Завдання 1

Хворому встановили попередній діагноз: інфаркт міокарда. Характерною ознакою цього захворювання є суттєве підвищення в крові активності:

А. Глюкозо-6-фосфатдегідрогенази.

В. Каталази.

С. Креатинфосфокінази.

Д. α-амілази.

Е. Аргінази.

Еталон відповіді: С.

Завдання 2

У хворого швидко розвиваються набряки. Зниження вмісту яких білків сироватки крові призводить до їх появи?

А. α₁-глобулінів.

В. Альбумінів.

С. α₂-глобулінів.

Д. β-глобулінів.

Е. Фібриногену.

Еталон відповіді: В.

Завдання 3

У крові хворого виявлене значне збільшення активності МВ-форм креатинфосфокінази та ЛДГ₁. Назвіть можливу патологію.

А. Гепатит.

В. Інфаркт міокарда.

С. Ревматизм.

Д. Панкреатит.

Е. Холецистит.

Еталон відповіді: В.

Завдання 4

На основі клінічних даних хворому встановлено попередній діагноз: гострий панкреатит. Назвіть біохімічний тест, який підтверджує цей діагноз.

А. Рівень креатиніну в крові.

В. Активність кислої фосфатази крові.

С. Активність лужної фосфатази крові.

Д. Активність амінотрансферази крові.

Е. Активність амілази крові.

Еталон відповіді: Е.

Завдання 5

У хворої 38 років ревматизм в активній фазі. Визначення якого з перелічених лабораторних показників сироватки крові має діагностичне значення при цій патології?

А. Сечовини.

В. Сечової кислоти.

С. С-реактивного білка.

Д. Креатиніну.

Е. Трансферину.

Еталон відповіді: С.

Завдання 6

З яким білком зв’язується гемоглобін для транспорту в ретикулоен-дотеліальну систему печінки?

А. Гаптоглобіном.

В. Альбуміном.

С. Феритином.

Д. Трансферином.

Е. Церулоплазміном.

Еталон відповіді: А.

Короткі методичні вказівки до роботи студентів на практичному занятті

Заняття починається з розв’язання навчальних задач, після чого необхідно виконати досліди лабораторної роботи.

У кінці заняття проводяться тестовий контроль, аналіз результатів роботи, в яких беруть участь усі студенти під керівництвом викладача.