Shpargalka_po_biohimii(ceccuu.net) / T26
.docБИЛЕТ 26
•Кофакторы ферментов: ионы металлов и коферменты. Коферментные функции витаминов, (на примере трансаминаз и дегидрогеназ, витаминов В6, РР, В2).
ОТВЕТОВ НА ЭТОТ ВОПРОС НЕ СДЕЛАЛИ
Подскатать можно из билета 13 (вопрос 1 – витамины).
•Представление о гормонах и рецепторах. Рецептор ацетилхолина, тиреоидные и стероидные гормоны и их рецептор, рецепторы серпентинового типа. Роль G-белков в передаче гормонального сигнала.
Рецепторы – часто олигомеризуются =>кооперативность связывания.
Типы рецепции: 1.Внутриклеточный (ядерный; гормон =>в ядро =>закрепление комплекса рецептор-гормон в хроматине =>изменение уровня транскрипции; замедленный ответ); 2.Мембранный (немедленный ответ).
ЯДЕРНЫЙ ТИП: стероиды, тиреоидные гормоны, ретиноевая к-та и производные.
Особенность: “1 ген, 1 белок, 1 рецептор” (кроме рецептора трийодтиронина – 2 белка в разных тканях). Структура рецептора: 6 доменов. Между 2мя – Е и F (СООН-конец пепт.цепи) – гидрофобный «карман» - местот присоединения гормона. Связывание =>аллостерич.активация домена С, на котором – 2 Cys-Zn-«пальца» - петли. На одной – Arg и Lys – связ-ся с отриц.заряженными фосфатными группами ДНК; на другой – гидрофобные АК – связываются с гормон-чувствительным элементом ДНК (ГЧЭ).
ГЧЭ – паллиндромы (симметричные последовательности нуклеотидов со специфической последовательностью посредине участка).
Гормоны часто связ-ся с гистонами, с шаперонинами (например, стероиды – с hsp90).
МЕМБРАННЫЙ ТИП: белково-пептидные, катехоламины, негормональные информоны (поверность клетки). Интегральные липофильные мембранные гликопротеины.
Семейства: 1.Одноцепочечные гликопротеины, разобщенные с акцептором сигнала (адренорецепторы, глюкагона, гистамина, дофамина; 7 «стопок» в мембране; Взаим-ие с гормоном =>связ-ие с G-белками =>измие конформации С-конца белка, обращенного в цитоплазму =>вз-ие с протеинкиназой А =>изм-ие конформации рецептора); 2.Рецепторы, обладающие тирозинкиназной активностью (инсулин; фосфорилируют остатки Tyr в т.ч.и самого рецептора); 3.Рецепторы, обладающие св-вами ионных каналов (N-холинорецептор – 2α, 2β и 1γ-субъединицы в виде «бочки» в мембране; гормон-связывающий локус – на внутр.пов-ти альфа-субъединиц; связ-ие рецептора =>изм-ие конформации =>открытие канала для ионов).
ПУТИ проведения сигналов: 1.Аденилаткиназный: образование цАМФ из АТР =>активация ПК А и фосфолипазы С, угнетение К и Са каналов; 2.Гуанилатциклазный (образование цГМФ); 3.Фосфатидилинозитидный путь (образование фосфатидил-инозито-4,5-бисфосфата =>ИФ3 и диацилглицерола =>вторичные мессенджеры).
•Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и полиморфизм длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) как методы изучения генома диагностики болезней. Генная терапия.
ПЦРпозвол многократ воспроиз-ть(амплифицировать)выбран фрагмДНК без пом рестриктаз,векторов или кл-хозяина.Нужно им в своем распоряж-ии 2олигонуклеотида (праймера),кажд из кот будет гибридизов-ся с 1из цепей на противопол-ых концах подлежащего амплификации фрагмДНК,достаточ кол-во дезоксирибонуклеозидтрифосфатов и спец-ую термостабил-уюДНК-полимеразу. Праймер синтез-ют,а полимеразу получ из термостабильн бактер.На 1-ой стадии двунитевуюДНКнагревают до 90оС для разделения цепей и получ-я однонитевой ДНК(а). Затем смесь охлажд-т,чтобы произошла гибридиз-ция с праймерами.Комплементарные цепи ДНК синтез-ся в обоих направ-ях,начиная от праймеров. Этот циклический проц повторяют с той же самой реакцион смесью.20-30-кратно.Двунитевые фрагмДНК,равные по длине расстоянию м/ду двумя праймерами,начинают накаплив-ся после 3-его цикла. Их кол-во удваив-ся после каждого цикла до тех пор,пока почти все синтезирован фрагм не будут соответств-ть первонач-му фрагм,ограничен праймерами.Циклы нагрев-я и охлажд-я проводятся в термостате-амплификаторе с программируемым температурн режимом.2.Рестриктазы расщеплДНК в специфич-их участк,обычно в палиндромных последоват-ях.Когда 1из основ-ий в такой последов-ти измен-ся в результате мутации, этот участок перестает расщепл-ся рестриктазами.В то же вр мутации мог привод к образ-ю новых участ,чувствительных к рестриктазе.В резул соответств-е фрагмДНК, получен от 2-х генетически не идентичных индивидов,часто обр-ют рестрикцион фрагм различной длины.Это явл-е носит назв полиморфизма длин рестрикционных фрагмДНК(ПДРФ).На рис. 1 приведен метод выявления ПДРФ. Прежде всего, ДНК-фрагмент, содержащий исслед-ую послед-ть,амплифицируют с помПЦР.Затем амплифицирован фрагм гидролизуют подходящей рестриктазой.Фрагм раздел гель-электрофорезом, интересующий фрагм выявл с пом спец генного зонда.Рестрикционная карта образцаДНК, выделен из тк,найденной на месте преступл-я,четко совпадает с пробой,взятой у подозреваемого 2, а не у подозреваемого1.Для получ такого«генетич отпечатка" достаточно оч мал кол-ва материала,содержащегоДНК.2-ым важным практическим прилож-ем ПДРФ-анализа явл выявл-е генетич мутац,ведущ к наслед заболев-ям.